家兔玻璃體液微量取樣與一次取樣的比較

家兔玻璃體液微量取樣與一次取樣的比較 家兔玻璃體液微量取樣與一次取樣的比較 【摘要 1目的 比較微量取樣與一次取樣的優(yōu)劣。方法 36只家兔分為4 組 (每組 9只 )，于死后 12 h 取樣： i組于一次取出所有 vh； ii組微量取樣 50 l，連續(xù)取 15 次； iii 組左眼一次取樣。右眼微量重復取樣。 iv組雙眼第 1 次微量取樣剩余一次取出。檢測 ca2+cl 、 l(+、na 和 p 等含量，數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。結(jié)果 iii 組左右眼、 (iv)組先后兩次取樣配對 t 檢驗無差異 (p>；0 05)，各組微量取樣樣本的變異系數(shù)、雙眼差較小。結(jié)論 微量 取樣的操作影響較小、穩(wěn)定性和重復性好 更適合法醫(yī)學研究和應用?！娟P(guān)鍵詞】尸體化學；玻璃體液：取樣方法：比較【中圖分類號】 d919 1【文獻標識碼】 a【文章編號】1007 9297(2006)03 0208 03a comparison study of vitreous humor micro-sam pling and wholly sam pling on rabbits zha ng yu zhuj， w a ng lan2 3 liu l ， (department offorensic me dicine， ton#ji medical college ofhuazhong university ofscience arm techno ， w han430030,chian)abstractobjective to make a comparative study of wholly sampling and micro-sampling of vitreous humor(vh) methods【作者簡介】戰(zhàn)玉祝 (1968一 )，男，漢族，山東莒南縣人，醫(yī)學學士，副主任法醫(yī)師， 研究方向：臨床法醫(yī) 學中的視覺、聽覺的電生理研究以及法醫(yī)病理的死亡時間研究；tel+86 531 86323203； e-mail： james680321cn com【通信作者 1 劉良 (1960一 )，男，漢族，山東沂水人，教授，博士生導師，主要從事法醫(yī)病理學教學、研究及檢案。法律與醫(yī)學雜志 2006 年第13卷 (第 3期 )thirty six rabbits were divided into four groups，each of which contains nine all were sampled at 12h postmortem group 1 werewholly extracted group i1 were subjected to multiple sampling of group iii， all left eyes were wholly sampled and all right eyeswere micro-sampled all eyes of group iv were micro sampled at first and all the left were wholy sampled concentrations of calcium， chloride，potassium， sodium and phosphorus were detected and statistically analyzed results th ere are no significan t differencebetween wholly sampling and micro-sampling of the pair-matched t test of between-eyes in group iii and the twice sanipiingin group iv of micro sam pling， the variations of the both-eyes and coeficient of variation were smaller than those of whonysam pling conclusion th e multi-micro-sam pling operation makes much less distort on vh， and is more stab le and repeatable， which is promising for forensic vh study an d examination【 key words l postmortem chemistry； vitreous humog sampling methodology； comparison study取樣方法對玻璃體液 (vitreous humor， vh)研究有重要意義， 11 傳統(tǒng)采用一次取樣 vh，近年有研究使用了微量取樣。迄今未見兩取樣方法比較研究，本實驗通過一次取樣與微量取樣的比較 旨在為 vh 研究選擇取樣方法。材料與方法一、實驗動物及分組取材健康家兔 36只，雌雄混用，體重 1 9 2 5 ，由華中科技大學同濟醫(yī)學院實驗動物中心提供。耳緣靜脈空氣栓塞處死，置于 4 7 恒溫箱，隨機分為 4 組 (每組 9 只 )，于死后 12h取樣： i 組根據(jù) coe推薦的方法，用 20g 針頭 5 iill 注射器自外眥、角膜緣外約 2 mm 處緩慢進針，瞳孔觀察針頭位于中央時緩慢抽出所有 vh，搖勻后移液 50 l 與去離子水 1： 4 稀釋，編號入 ep 管、 -25 凍存。 ii組微量重復取樣：用 20 g留置針，入針后固定針頭，用 1 ml注射器緩慢抽吸、移 液 50 l，重復取樣 15次，其余處置同 i組。 iii 組左眼一次取樣，同 i組，右眼微量重復取樣同 ii 組。 iv組雙眼微量取樣 1 次，操作同 ii組；換 5 iid 注射器一次取出剩余所有 vh，同 i組。二、檢測同日檢測 i 組、 iv 組 1、 2 次取樣和 iii 組左眼樣本，ii組和 iii組右眼第 1⋯；5 8 15次取樣樣本： 37 ci=水浴解凍，美國 abboty aeroset 2000 全自動生化分析儀檢測 ca2+、 cl 一、i<；+、 na+和 p 濃度。檢測 3 次，取平均值。三、統(tǒng)計分析檢測數(shù)據(jù)根據(jù)參考文獻 31，采用 excel 和 spss 12 0 分析軟件進行統(tǒng)計分析：計算各組變異系數(shù)， ii 組進行方差分析， iii 組左右眼配對 t檢驗， iv 組 1， 2 次取樣配對 t 檢驗，分別計算 iv組 1， 2 次取樣雙眼濃度差與雙眼均值的比。結(jié)果實驗所得結(jié)果及統(tǒng)計處理情況見表 1、表 2、表 3。表 1 各組變異系數(shù) (cv。 )table1 coeficient of variation in group i， ii， iii and iv (cv， )表 2 ii 組方差分析結(jié)果 值 )table2 variance analysis of group ii(p value)表 3 iv組雙眼差 (絕對值 )與雙眼均值 的平均比 ( )table 3 ratio of average vanations to means in betweeneyesof group iv( )討論一、取樣方法與變異程度重復微量取樣方差分析提示總體 vh樣本物質(zhì)含量無顯著差異 (表 2)， iii 組和 iv組一次取樣與微量取樣的 t檢驗無差異 (p>；0 05)，因此兩取樣方法獲得的樣本總體無差異。但是，一次取樣的彌散程度大于微量取樣 (表 1)，這印證了 coe關(guān)于 “ 取樣方法不當可造成 vh 含量分散 ” 的觀點。這也反應在雙眼濃度差上微量取樣的雙眼差較小、一次 取樣較大 (表 3)。結(jié)果與有關(guān)報道都相吻合：一次取樣研究報道的 210 vh 濃度變異程度和雙眼問差異較大， 而微量取樣研究所報道的差異則往往較小。 7-91結(jié)合前期研究， 11分析認為取樣方法是造成差異的原因。物質(zhì)在 vh、血液和組織中含量不同， 取樣操作不當引起組織挫碎或污染改變了 vh樣本含量。 coe 方法的缺點之一是 “ 盡量取出所有 vh” 不好控制實際操作時容易抽出鄰近組織 (如視網(wǎng)膜 )，造成組分 (如 vh鉀 )含量的人為改變。 tagliaro91也認為微量取樣對眼球內(nèi)壁組織的作用較小操作引起的損傷和組分改變 也較小，取得的樣本更好。二、微量取樣的法醫(yī)學意義微量取樣操作方法的文獻少見，設計微量取樣操作時參考了 coe 方法的基本步驟。為方便多次取材、減少進針次數(shù)、保持針頭位置和盡量減少污染等，采用了留置針固定后定量 (微量 )移液的取材方法。 tagliaro 等 91 4次取樣 50 lvh 獲得了較好的死亡時間推斷精度， rognum 等 111、 poulsen等 121 和 bocaz beneventi等【 8】也采用微量取樣的方法，并稱死亡時間 95預測區(qū)間更好。結(jié)合本實驗結(jié)果。作者認為這與微量取樣的變異較小有關(guān)。微量取樣所體現(xiàn) 的較小的雙眼差，也更符合實際。 111因此微量取樣采集樣本具有良好的代表性，穩(wěn)定性和重復性更好，也容易控制操作，更適宜于 vh的法醫(yī)學研究與應用綜上所述，微量取樣與一次取樣總體無差別，但不同取樣操作可以造成樣本均數(shù)變異系數(shù)的不同比較而言，微量取樣的彌散程度較小，變異程度和雙眼差較小。微量取樣操作對樣本的影響較小，其穩(wěn)定性和重復性較好，更適合法醫(yī)學 vh研究應用參考文獻 11汪嵐，戰(zhàn)玉祝，劉茜，等家免死后玻璃體液離子濃度的微量重復取樣法律與醫(yī)學雜志 2006 年第 13卷 (第 3期 )法j】中國法醫(yī)學雜志， 2006， 21(3)5 72】 coe ji postmortem chemistry update emphasis on forensic applicationj1 am j forensic med pathol， 1993 14(2)： 91 1173】余松林醫(yī)學統(tǒng)計學北京：人民衛(wèi)生出版禮， 2003 4041， 44-56， l18-1294】madea b， henssge c， honig w， et a1 references for determining thetime of death by potassium in vitreous humorjll forensic sci int， l 989 40(3)： 23 1-2435】 pounder dj， carson do， johnston k， et a1 electrolyte concentrationdifferences between left and right vitreous humor samplesj j foren sic sci， 1998， 43(3)：604-6076】 gardiner ee， newberry rc， keng jy postmortem time and storagetemperature affect the concentrations of hypoxanthine， other purines， pyrimidines， and nucleosides in avian and porcine vitreous humorj pediatr res， 1989， 26(6)：639-6427】 gardiner ee， newberry rc， keng jy postmortem time and storagetemperature affect the concentrations of hypoxanthine， other purines， pyrimidines， and nucleosides in avian and porcine vitreous humorj pediatr res， 1989， 26(6)：639-6428bocaz beneventi g， tagliaro f， bortolotti f， et a1 capillary zone elec trophoresis and artificial neural networks for estimation of the post mortem interval using electrolytes measurements in human vitreous hu mourj int j legal med， 2002， 116(1)： 5-119】 tagliaro f， bortolotti f，manetto g， et a1 potassium concentration differencesin the vitreous humour from the two eyes revisited by micro analysis with capillary electmph0resisj1 j chromatogr a， 2001，924f1-2)： 493-4981o鄭建中眼的生化概要 m北京：人民衛(wèi)生出版禮， 1991 111-12811】 rognum to， hauge s， oyasaeter s，et a1 a new biochemi