無菌室資料.doc

無菌室空氣污染情況的檢驗(yàn)0 r* j8 X% u2 c: |1 V f# l* N. t8 H U1 i$ B% j2 / # j* Y# i% n定期檢驗(yàn)無菌室空氣污染情況，對改進(jìn)滅菌措施，提高成品率是非常必要的。常用方法步驟如下：; 2 I7 ( D+ l2 z& z P$ S L7 I- Q1平板檢驗(yàn)法：用常規(guī)培養(yǎng)基，倒成平板，收入接種室。在事先熏蒸好的接種室，使用前半小時或1小時把供試的培養(yǎng)皿或試管打開，按預(yù)定時間蓋好培養(yǎng)皿或試管。留對照皿不打開。然后一起放入30的溫箱中培養(yǎng)48小時，檢查有無菌殖生長，并由菌落形態(tài)，判斷雜菌種類。一般要求平板培養(yǎng)基開蓋5分鐘，菌落不超過3個；敘面培養(yǎng)基開塞 30分鐘者，以不出現(xiàn)菌落為合格。 Z3 X* 1 i; l* G! D l0 n+ C2 d. x# o# / _ 2斜面檢驗(yàn)法：將常用的瓊脂斜面培養(yǎng)基各取二管，放入接種室，按無菌操作各將其中的一管的棉塞取出，放在滅菌的培養(yǎng)皿內(nèi)。經(jīng)過一定時間后，再將棉塞通過火焰，塞回試管，連同對照一起培養(yǎng)。經(jīng)48小時后，檢驗(yàn)有無雜菌生長。和上邊方法同。9 U; ( Q; A5 o* % M- m, x& q8 K& n4 ?. u; t9 f- s 3空氣污染情況檢驗(yàn)：在接種過程中，人員的出過、器材的搬放、接種操作的動作等原因造成空氣污染，檢驗(yàn)方法是在準(zhǔn)備工作結(jié)束后，接種操作開始時，按上述方法打開培養(yǎng)皿蓋子或試管塞，經(jīng)5分鐘、30分鐘或直到工作結(jié)束時再蓋好，以檢驗(yàn)在不同的使用時間內(nèi)，空氣污染的程度。 o$ f& U/ G# g! k a M5 d2 D1 M2 r5 & J( r4 如霉菌較多時；可先用5石炭酸全面噴射后，再用甲醛熏蒸。如細(xì)菌較多時，可采取用乳酸和甲醛交替熏蒸的辦法加以殺滅。無菌室標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)程及驗(yàn)收- Q9 p S8 L Q& L2 _& d* F, S! A j U y1 X9 I8 K; * s+ O, R l+ _* p6 M7 j; m/ f8 s5 H 1.目的本規(guī)程旨在為無菌操作及無菌室的保護(hù)提供一個標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)程。( F, 1 e1 u. N1 . C* H+ H! W! x& D, m. J) Z r# j2.適用范圍 生測實(shí)驗(yàn)室5 D4 6 a0 R V, v( a0 _- 0 R: r. P9 C# . h- F# i3 I# _6 3.責(zé)任者 QC主管生測員9 ?* 3 b r7 O- d! T3 & U( a 4.定義 無, B S5 , p$ ?7 - T6 S: Q5 b+ _; T8 I 5.安全注意事項(xiàng)嚴(yán)格無菌操作，防止微生物污染；操作人員進(jìn)入無菌室應(yīng)先關(guān)掉紫外燈。: Y- M% M- a& ) N( o0 S4 $ i6 J x 6.規(guī)程 D+ 7 l0 r$ r- B9 ?# V; ?- o( s9 t$ b1 6.1.無菌室應(yīng)設(shè)有無菌操作間和緩沖間，無菌操作間潔凈度應(yīng)達(dá)到10000級，室內(nèi)溫度保持在20-24，濕度保持在45-60%。超凈臺潔凈度應(yīng)達(dá)到100級。5 p* U8 v# G9 h6 I M% h2 X3 ; m* Q6 _2 G7 v; R8 a+ F6.2.無菌室應(yīng)保持清潔，嚴(yán)禁堆放雜物，以防污染。: N0 1 f( m- t5 w/ ? y) 0 h/ f! A8 k7 m) q- t! T6.3.嚴(yán)防一切滅菌器材和培養(yǎng)基污染，已污染者應(yīng)停止使用。( L2 n0 p0 h% U$ a* L) 0 u+ |( |* x a- c3 U/ G 6.4.無菌室應(yīng)備有工作濃度的消毒液，如5的甲酚溶液，70的酒精，0.1的新潔爾滅溶液，等等。2 4 # w3 P; U a: q$ m T9 p& R/ _ P# n S7 D 6.5.無菌室應(yīng)定期用適宜的消毒液滅菌清潔，以保證無菌室的潔凈度符合要求。5 Q L) / l( v* _2 # ; ( , b , A O6.6.需要帶入無菌室使用的儀器，器械，平皿等一切物品，均應(yīng)包扎嚴(yán)密，并應(yīng)經(jīng)過適宜的方法滅菌。) M+ s r6 U6 t* d6 s+ R7 A; F7 V4 l6 s( n6.7.工作人員進(jìn)入無菌室前，必須用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在緩沖間更換專用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭雙手)，方可進(jìn)入無菌室進(jìn)行操作。* w! M$ G p! s( e6 $ j% h/ P- S2 S6.8.無菌室使用前必須打開無菌室的紫外燈輻照滅菌30分鐘以上，并且同時打開超凈臺進(jìn)行吹風(fēng)。操作完畢，應(yīng)及時清理無菌室，再用紫外燈輻照滅菌20分鐘。: I3 l4 W3 T& R/ i! M. m1 W/ R/ v5 j6.9.供試品在檢查前，應(yīng)保持外包裝完整，不得開啟，以防污染。檢查前，用70的酒精棉球消毒外表面。 u7 D8 A! ; 0 Y; j 5 n4 i6 y+ |6.10.每次操作過程中，均應(yīng)做陰性對照，以檢查無菌操作的可靠性。, i; a+ u Q( s0 k. k) D- l9 1 y, S4 t6 .11.吸取菌液時，必須用吸耳球吸取，切勿直接用口接觸吸管。/ S- O/ % + t- z+ I+ h, C8 Z9 q9 t8 8 X6.12.接種針每次使用前后，必須通過火焰灼燒滅菌，待冷卻后，方可接種培養(yǎng)物。5 ; k: n, D7 A: F7 s1 ) i8 o) 1 C3 7 i C l+ V; $ B 6.13.帶有菌液的吸管，試管，培養(yǎng)皿等器皿應(yīng)浸泡在盛有5%來蘇爾溶液的消毒桶內(nèi)消毒，24小時后取出沖洗。3 _3 L r8 1 V+ Y3 D9 % d0 l% M7 y% |; T1 S9 I q6.14.如有菌液灑在桌上或地上，應(yīng)立即用5%石碳酸溶液或3的來蘇爾傾覆在被污染處至少30分鐘，再做處理。工作衣帽等受到菌液污染時，應(yīng)立即脫去，高壓蒸汽滅菌后洗滌。2 R! B0 6 X7 I+ T V9 _. B6 0 2 S 6.15.凡帶有活菌的物品，必須經(jīng)消毒后，才能在水龍頭下沖洗，嚴(yán)禁污染下水道。0 K n* I& ?; Z9 A. L9 J Q Q6 I. p! * r 6.16.無菌室應(yīng)每月檢查菌落數(shù)。在超凈工作臺開啟的狀態(tài)下，取內(nèi)徑90mm的無菌培養(yǎng)皿若干，無菌操作分別注入融化并冷卻至約45的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約15ml，放至凝固后，倒置于3035培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時，證明無菌后，取平板35個，分別放置工作位置的左中右等處，開蓋暴露30分鐘后，倒置于3035培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時，取出檢查。100級潔凈區(qū)平板雜菌數(shù)平均不得超過1個菌落，10000級潔凈室平均不得超過3個菌落。如超過限度，應(yīng)對無菌室進(jìn)行徹底消毒，直至重復(fù)檢查合乎要求為止。 4 O7 d& W* A, R3 x4 s) j6 U8 H0 ( J0 y$ O: x 7.參照藥品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法 中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范中 (無菌檢查法)章節(jié) 中華人民共和國醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)7 E; D, t; h- u8 q ?6 k; |# c7 w8 c( p. : B YY/T0188.6-1995藥品檢驗(yàn)操作規(guī)程+ L% R2 L. $ S/ 2 N9 |6 t5 R: |1 P& w6 F0 Y9 T 8.分發(fā)部門 質(zhì)量管理部( n* E- H3 e& ?3 | E, ; e( % i0 D; H! G8 P& s P 無菌室技術(shù)指導(dǎo)說明) B$ $ C9 J, S) 9 R) l$ Z% x6 a 8 ( + L( 在獲得了無菌環(huán)境和無菌材料后，我們還要保持無菌狀態(tài)，才能對某種特定的已知微生物進(jìn)行研究或利用它們的功能，否則外界的各種微生物很容易混入。外界不相干的微生物混入的現(xiàn)象，在微生物學(xué)中我們叫做污染雜菌。防止污染是微生物學(xué)工作中十分關(guān)鍵的技術(shù)。一方面是徹底滅菌，另一方面防止污染，是無菌技術(shù)的兩個方面。另外，我們還要防止所研究的微生物，特別是致病微生物或經(jīng)過基因工程改造了的本來自然界不存在的微生物從我們的實(shí)驗(yàn)容器中逃逸到外界環(huán)境中去。為了這些目的，在微生物學(xué)中，有許多措施。 ( P. L6 z8 r5 S1 v Z4 Y! , 6 Q. F% d5 |: 無菌室一般是在微生物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)專辟一個小房間。可以用板材和玻璃建造。面積不宜過大，約 4 5 平方米即可，高 2.5; l H, D. h( x+ n2 B : _) i; F5 w$ b8 H! c1 米左右。無菌室外要設(shè)一個緩沖間，緩沖間的門和無菌室的門不要朝向同一方向，以免氣流帶進(jìn)雜菌。無菌室和緩沖間都必須密閉。室內(nèi)裝備的換氣設(shè)備必須有空氣過濾裝置。無菌室內(nèi)的地面、墻壁必須平整，不易藏污納垢，便于清洗。工作臺的臺面應(yīng)該處于水平狀態(tài)。無菌室和緩沖間都裝有紫外線燈，無菌室的紫外線燈距離工作臺面+ T5 x5 N9 w$ h, Y. V9 p c* U7 G+ f Q& w% p- Q K, u1 米。工作人員進(jìn)入無菌室應(yīng)穿滅過菌的服裝，戴帽子。- V: T e, N l8 B H5 K m/ B4 R* ?: e 當(dāng)前無菌室多存在于微生物工廠，一般實(shí)驗(yàn)室則使用超凈臺。超凈臺其主要功能是利用空氣層流裝置排除工作臺面上部包括微生物在內(nèi)的各種微小塵埃。通過電動裝置使空氣通過高效過濾器具后進(jìn)入工作臺面，使臺面始終保持在流動無菌空氣控制之下。而且在接近外部的一方有一道高速流動的氣簾防止外部帶菌空氣進(jìn)入。9 r, T6 : k& $ f, i( b9 ! X& O9 U. m 在條件較困難的地方，也可以用木制無菌箱代替超凈臺。