【畢業(yè)學(xué)位論文】（Word原稿）黃芪多糖增強疫苗免疫效力及機(jī)理研究預(yù)防獸醫(yī)學(xué)碩士論文

密級： 論文編號： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 學(xué)位論文 黃芪多糖 增強疫苗 免疫效 力及機(jī)理 研究 on in of on in of 摘 要 本 論文 研究了黃芪多糖 （ 的提取 、理化性質(zhì)、毒性、制劑安全性及其對肉雞和小鼠免疫功能的影響，并從細(xì)胞 信號 轉(zhuǎn)導(dǎo) 角度探討其作用機(jī)制。 試驗一 黃芪多糖的制備及理化性質(zhì)分析 本試驗研究了黃芪多糖的提取、分離 、 理化性質(zhì)及多糖含量。采用水提醇沉法提取黃芪多糖。分別采用 應(yīng)碘 碘化鉀反應(yīng)茚三酮反應(yīng)研究了黃芪多糖粗提物的理化性質(zhì)。并采用苯酚 果表明黃芪多糖 （ 的得率為 理化性質(zhì)分析表明黃芪多糖粗提物中含有多糖組分，不含淀粉和蛋白質(zhì)， 總 糖含量為 試驗二 黃芪多糖毒性試驗及制劑安全性 評價 本試驗進(jìn)行 了 黃芪多糖毒性試驗和安全性 評價 。結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃芪多糖屬無毒， 并具有無熱原、刺激性低的特點；結(jié)果提示，黃芪多糖可用于口服、注射、滴鼻、點眼多種免疫方式，且無毒 副作用 、安全可靠。 試驗三 黃芪多糖對肉雞免疫功能的影響研究 本試驗 觀察 了黃芪多糖 對雞新城疫疫苗免疫的增效作用。結(jié)果 發(fā)現(xiàn)：黃芪多糖對肉仔雞免疫功能有一定影響，可提高肉仔雞新城疫抗體 水平 。 表明 黃芪多糖有一定的免疫增強作用，可與疫苗聯(lián)用提高疫苗的保護(hù)力。 試驗四 黃芪多糖對小鼠脾淋巴細(xì)胞免疫功能的影響 實驗觀察 了不同濃度黃芪多糖體外對小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化和細(xì)胞因子 泌的影響。發(fā)現(xiàn)黃芪多糖 能 提高脾 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率 ， 促進(jìn) 泌，其中以 200 g/上結(jié)果提示，黃芪多糖可以促進(jìn)淋巴細(xì)胞功能，并通過調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的分泌 影響 免疫系統(tǒng)功能。 試驗五 黃芪多糖對小鼠脾淋巴細(xì)胞信 號轉(zhuǎn) 導(dǎo)的影響 本試驗研究了黃芪多糖對小鼠脾淋巴細(xì)胞內(nèi)第二信使分子 影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃芪多糖可使脾淋巴細(xì)胞 生顯著增加，其中以 200 g/芪多糖可使脾淋巴細(xì)胞 低，促進(jìn) 產(chǎn)生，從而降低 例，并具有劑量相關(guān)性。 本結(jié)果提示，黃芪多糖的免疫調(diào)節(jié) 作用是通過改變細(xì)胞內(nèi) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)而 實現(xiàn)的。 關(guān)鍵詞 ：黃芪多糖，肉雞， 雞新城疫疫苗 ，免疫調(diào)節(jié)， 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) to to of of to of of n to to it be in as on of to on of It a on of of of on of to on by TT It in a by of on to on by O, O in a at 00 g/it by 錄 第一章 緒 論 1 第一節(jié) 多糖類免疫增強劑的研究進(jìn)展 1 第二節(jié) 黃芪多糖（ 究進(jìn)展和應(yīng)用展望 13 第二章 試驗部分 19 試驗一 黃芪多糖的制備及理化性質(zhì)分析 19 19 19 20 21 試驗二 黃芪多糖毒性試驗及制劑安全性評價 22 22 22 23 24 試驗三 黃芪多糖對 肉雞免疫功能的影響研究 26 26 26 2 7 28 試驗四 黃芪多糖對小鼠脾淋巴細(xì)胞免疫功能的影響 29 29 30 3 1 33 試驗五 黃芪多糖對小鼠脾淋巴細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響 3 5 35 35 3 7 39 全文結(jié)論 42 參考文獻(xiàn) 43 致謝 54 作者簡歷 55 文縮略詞表 英文縮寫 英文全稱 中文名稱 芪多糖 膝多糖 多糖 物血凝素 細(xì)胞介素 擾素 瘤壞死因子 然殺傷 甲基噻唑藍(lán) 噬細(xì)胞 伴刀豆球蛋白 氧化氮 O 誘導(dǎo)一氧化氮合成酶 腺苷酸 鳥苷酸 補體受體 3 凝抑制 城疫 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 緒論 1 第一章 緒論 畜禽傳染病一直是畜牧業(yè)發(fā)展的克星，尤其是病毒性傳染病對畜牧業(yè)造成了重大的經(jīng)濟(jì)損失。我國每年由于動物疫病造成的直接經(jīng)濟(jì)損失在 260 元，因疫病引起的生產(chǎn)性能下降飼料和人工浪費藥物消耗等 間接損失達(dá) 800 億元 60。 近年來，由于新發(fā)病（如牛傳染性海綿狀腦病尼帕病西尼羅河熱 ）的不斷出現(xiàn)和傳統(tǒng)重大動物疫?。ㄈ缈谔阋?禽流感 等）的 發(fā)生和 蔓延，給疫病控制工作帶來了更大的困難。同時，免疫抑制性疾病對畜禽健康的威脅日益增加。 特別是病毒性、寄生蟲引起的 免疫抑制性疾病除了 病原 本身的直接危害之外，更為重要的是造成免疫抑制，可使低致病性的病原體引起多種疾病綜合癥的發(fā)生， 并 造成 機(jī)體對 疫苗 的免疫應(yīng)答降低 ，從而導(dǎo)致免疫失敗 49。 目前，應(yīng)用疫苗進(jìn)行預(yù)防仍然是 控制 畜禽傳染病的主要措施。 免疫佐劑 能增強疫苗的免疫應(yīng)答，延長免疫持續(xù)期，是疫苗免疫能否成功的關(guān)鍵因素之一。在國內(nèi)外畜牧生產(chǎn)中，應(yīng)用較廣的疫苗佐劑如鋁膠鹽水，油佐劑等存在著粘滯性高、穩(wěn)定性差等缺點。為適應(yīng)基因工程疫苗、亞單位疫苗和合成肽等新型疫苗的發(fā)展，研制和開發(fā)可生物代謝，無毒害、活性強的新型佐劑，已成為迫切需要研究的課題。 植物活性多糖是一種重要的天然活性成分，大量研究表明它具有促進(jìn)機(jī)體免疫功能抗菌抗病毒抗寄生蟲抗腫瘤和抗輻射等一系列作用。已有實驗證明飼料中添加活性多糖能顯著增強畜禽的免疫功能，促進(jìn)免疫器官發(fā)育和抗體生成，激活淋巴 細(xì)胞，并能促進(jìn)動物生長，降低動物死亡率。因此，植物活性多糖是一種很有前途的免疫 佐劑 ，在動物生產(chǎn)中的研究與應(yīng)用 已 引起國內(nèi)外的重視。 本研究從天然植物黃芪中提取活性多糖，研究其 理化 性質(zhì)及對小鼠和肉雞免疫功能的影響，并探討其作用機(jī)制。同時，黃芪多糖作為多糖類免疫增強劑的一種，其作用機(jī)制與其它多糖類免疫增強劑有許多相似或相同之處，可作為免疫 增強 劑提高疫苗的免疫效果，因此本文就多糖類免疫增強劑的研究進(jìn)展及黃芪多糖的國內(nèi)外研究進(jìn)展作一介紹。 第一節(jié) 多糖類免疫增強劑的研究進(jìn)展 多糖 (一大類天然產(chǎn) 物，廣泛存在于動物、植物、微生物等有機(jī)體中。因其來源廣泛價格低廉效果確切純天然具有多種多樣的生物活性功能 ,而受到人們的普遍重視，使多糖生物資源的開發(fā)利用和研究日益活躍，成為天然藥物、生物化學(xué)、生命科學(xué)的研究熱點。到目前為止，已有近百種多糖類化合物從天然產(chǎn)物中被分離出來。多糖不僅是所有生物有機(jī)體的重要結(jié)構(gòu)成分，而且也是一種重要的信息分子，參與分子識別細(xì)胞粘著及細(xì)胞的防御機(jī)制。近年來，大量藥理及臨床研究表明，多糖類化合物是一種良好的免疫調(diào)節(jié)劑，它能激活免疫受體，提高機(jī)體的免疫功能 120。因此，在現(xiàn) 代畜牧業(yè)中，開發(fā)利用天然多糖提取物作為免疫調(diào)節(jié)劑，受到人們的普遍重視，進(jìn)行了大量研究。 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 緒論 2 1 多糖類免疫增強劑的免疫調(diào)節(jié)作用 從研究報道可以得知，多糖能在多條途徑、多個層面對免疫系統(tǒng)發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。多糖不僅能激活 T B 淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞 (免疫細(xì)胞，還能活化補體，促進(jìn)細(xì)胞因子生成，從而調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能。 對免疫器官的作用 免疫器官主要由中樞免疫器官骨髓胸腺腔上囊及外周免疫器官脾臟淋巴組織等組成。骨髓是造血干細(xì)胞生長分化及發(fā)育的場所，可提供各種免疫細(xì)胞的前體細(xì)胞， B 細(xì)胞單核巨噬細(xì)胞粒細(xì)胞 胞血小板和紅細(xì)胞也在此分化成熟。腔上囊是鳥類特有的中樞免疫器官，來自骨髓的淋巴 T 細(xì)胞在其內(nèi)誘導(dǎo)分化為成熟的 B 細(xì)胞，經(jīng)淋巴循環(huán)和血液循環(huán)到外周淋巴器官參與體液免疫。胸腺的免疫功能主要是誘導(dǎo) T 細(xì)胞的分化和成熟，胸腺衍化的 T 細(xì)胞能輔助T 細(xì)胞產(chǎn)生抗體。脾臟是機(jī)體最大的免疫器官，內(nèi)含大量的免疫細(xì)胞，其中 T 淋巴細(xì)胞約占 40%左右， B 淋巴細(xì)胞約占 60%左右，在體液免疫中的地位極其重要。因此研究多糖對機(jī)體免疫器官的作用是研究多糖免疫調(diào)節(jié)作用的一個重要方面。 銀耳多糖皮下注射 100 mg/正常小 鼠的胸腺及脾臟重量均無顯著影響，而腹腔注射 200 mg/使正常小鼠脾臟重量明顯增加 43。在 10mg/量范圍內(nèi)，當(dāng)歸多糖能對抗環(huán)磷酰胺引起的小鼠脾萎縮，增加小鼠脾重 111。給小鼠腹腔注射北洋參多糖 32 用藥 7 d，可使胸腺重量明顯增加 20。腹腔注射板藍(lán)根多糖（ 50 mg/顯著促進(jìn)小鼠的免疫功能，表現(xiàn)為顯著增加正常小鼠脾重、白細(xì)胞總數(shù)及淋巴細(xì)胞數(shù)，對氫化可的松所致免疫功能抑制小鼠脾重、白細(xì)胞總數(shù)和淋巴細(xì)胞數(shù)的降低有明顯對抗作用 109。 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 緒論 3 對細(xì)胞因子的調(diào)節(jié) 現(xiàn)代研究表明，活性多糖可以誘導(dǎo)免疫細(xì)胞產(chǎn)生多種細(xì)胞因子。而在機(jī)體免疫調(diào)節(jié)過程中，細(xì)胞因子具有重要的作用。如 巨噬細(xì)胞向 T 細(xì)胞遞呈抗原后的第二激活信號，通過激活胞促進(jìn)抗體產(chǎn)生和誘導(dǎo) 胞產(chǎn)生 許多作用是通過 現(xiàn)的。 能誘導(dǎo) 胞的產(chǎn)生，增強 胞的細(xì)胞毒活性，刺激 B 細(xì)胞分化、增殖，促進(jìn)抗體的產(chǎn)生 42。具有重要的免疫調(diào)節(jié)作用：（ 1） T 細(xì)胞重要的自分泌生長因子，是 T 細(xì)胞依賴免疫應(yīng)答的重要決定因素，還可刺激其它 T 細(xì)胞衍 生的細(xì)胞因子的合成。（ 2）刺激 胞，增強它的溶細(xì)胞功能，產(chǎn)生所謂的淋巴因子激活殺傷細(xì)胞（ （ 3）作用于 B 細(xì)胞，即可以作為生長因子又是抗體合成的刺激物 71。 牛膝多糖能激活網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬功能，激活巨噬細(xì)胞，促進(jìn) 生成及促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖，增強 胞和 胞的活性，并能提高血清免疫球蛋白 平 101。大刺猴頭多糖能夠激活 胞，產(chǎn)生 多種免疫因子 2。海帶多糖還可促進(jìn)脾臟 T、 15。 羧甲基茯苓多糖對外周血淋巴細(xì)胞分泌 促進(jìn)誘生作用 119。靈芝多糖可明顯增加小鼠脾淋巴細(xì)胞產(chǎn)生 能力，還能促進(jìn) 成及其 表達(dá)，可在轉(zhuǎn)錄水平影響這些細(xì)胞因子的產(chǎn)生 27。淫羊霍多糖能增強脾和胸腺 T、 B 淋巴細(xì)胞的增殖和分化，促進(jìn)巨噬細(xì)胞的吞噬活性，誘導(dǎo)多種細(xì)胞因子如 的生成 15。銀耳多糖可增強小鼠腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生 能力 64。黃芪多糖能促進(jìn) 生成 59。當(dāng)歸多糖含有藥理特性類似與肝素的 成分，可與多種生長因子相互作用，促進(jìn) 生長因子生成 92,131,137,154,155。蘆薈多糖能使紫外線輻射所致細(xì)胞產(chǎn)生的 少 50%，并完全阻斷培養(yǎng)上清液注射入小鼠體內(nèi)所產(chǎn)生的 應(yīng)的抑制，還能阻斷紫外線激活的 白的磷酸化，但對 白的磷酸化無明顯作用 124,143。 75 親合力 達(dá)明顯增加 148。 體內(nèi)注射香菇多糖后， 水平有所下降， T 細(xì)胞亞群比例趨向 更合理，預(yù)示病人的免疫潛能上升，這是香菇多糖延長患者生命的原因之一 136。 對補體系統(tǒng)的調(diào)節(jié) 補體是血液中一組具有酶 原 活性的蛋白質(zhì)系列，它能協(xié)同抗體殺死病原微生物或協(xié)助、配合吞噬細(xì)胞來殺滅病原微生物 120。許多多糖均有調(diào)節(jié)補體活性作用。補體蛋白上存在的識別點可識別多糖的結(jié)構(gòu)，多糖和血液補體蛋白的相互識別作用能夠使蛋白活化，誘發(fā)增加補體蛋白抵御吞噬病原的能力 28。 而 從當(dāng)歸、艾葉、柴胡、甘草、紫根等植物中提取的酸性多糖都是具有抗補體活性的多糖 120。 對免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié) 細(xì)胞免疫主要是由 T 細(xì)胞 介導(dǎo)。機(jī)體通過致敏階段和反應(yīng)階段， T 細(xì)胞分化成效應(yīng)性淋巴細(xì)胞并產(chǎn)生細(xì)胞因子。 T 細(xì)胞能抵抗細(xì)胞內(nèi)寄生的細(xì)菌病毒真菌以及原蟲的感染； T 細(xì)胞具有中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 緒論 4 免疫監(jiān)視作用，被腫瘤抗原致敏的 T 細(xì)胞通過直接殺傷和釋放細(xì)胞因子等可直接或間接地殺傷腫瘤細(xì)胞。多糖具有增強細(xì)胞免疫功能的作用。 一些多糖可以通過激活免疫細(xì)胞提高機(jī)體的免疫力。如 提取的一種海藻多糖可誘導(dǎo)荷瘤小鼠 遲發(fā)型超敏反應(yīng)，增強脾淋巴細(xì)胞到漿細(xì)胞的變化，增強外周血中 T 細(xì)胞的百分率 ，提示其抗瘤作用與其增強輔助性 T 細(xì)胞、殺傷性 T 細(xì)胞、自然殺傷 T 細(xì)胞的活性有關(guān) 140。女貞子多糖能促進(jìn) T、 B 淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，增強巨噬細(xì)胞的吞噬活性 7。 海藻硫酸多糖對 T、 B 淋巴細(xì)胞有促進(jìn)增殖作用，并對環(huán)磷酰胺 (致免疫力低下小鼠，它還可以通過調(diào)節(jié)血像、增加胸腺指數(shù)、提高 T 淋巴細(xì)胞和 胞數(shù)目、促進(jìn) T、 增殖來緩解 105。淫羊霍多糖能增強脾和胸腺 T、 B 淋巴細(xì)胞的增殖和分化，促進(jìn)巨噬細(xì)胞的吞噬活性 5。 香菇多糖是一種典型的 T 細(xì)胞激活劑，可提高腫瘤患者 值而逆轉(zhuǎn)免疫 抑制狀態(tài)，具有調(diào)節(jié)腫瘤患者細(xì)胞免疫功能的作用 89。 紫松果菊多糖與小鼠骨髓的巨 噬 細(xì)胞共同孵育，則巨噬細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的毒性大大激活 35。枸杞多糖具有增強 胞殺傷活性及增加白細(xì)胞數(shù)量的作用 18。甘草多糖能提高 T 細(xì)胞轉(zhuǎn)化率 65。蘆薈多糖可促進(jìn)腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能，促進(jìn)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率 62。靈芝多糖可使 T 淋巴細(xì)胞增多 38。 對體液免疫的調(diào)節(jié) 體液免疫是 B 細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，是由 B 細(xì)胞通過對抗原的識別活化增殖，最后分化成漿細(xì)胞并分泌抗體來實現(xiàn)的，抗體是介導(dǎo)體液免疫的重要分子，在體內(nèi)可發(fā)揮 多種免疫功能。多糖作為疫苗免疫增強劑可以促進(jìn)抗體的產(chǎn)生。 枸杞多糖具有提高 B 細(xì)胞產(chǎn)生抗體能力的作用 11。紫錐菊的多糖部分具有刺激巨噬細(xì)胞的吞噬功能，刺激 T 淋巴細(xì)胞增殖，并能顯著增強體液免疫功能 12。人參多糖免疫小鼠，小鼠體內(nèi)的特異性抗體及 含量顯著增加 12。高山紅景天多糖可明顯增加特異的抗體分泌細(xì)胞數(shù)，從而增強機(jī)體的體液免疫 69。有人研究玉米花粉多糖對雞新城疫弱毒疫苗免疫應(yīng)答的影響，發(fā)現(xiàn)玉米花粉多糖能顯著促進(jìn) 體的產(chǎn)生，使抗體提前產(chǎn)生并維持較高滴度 72。 對單核吞噬細(xì)胞 系統(tǒng)的影響 近年來的研究表明，單核吞噬細(xì)胞作為免疫效應(yīng)細(xì)胞， 其殺傷各種腫瘤細(xì)胞和參與抵抗細(xì)菌、真菌及寄生蟲等感染的炎癥反應(yīng)的重要因子。多糖能促進(jìn) 胞分泌 細(xì)胞因子。含有一個未成對電子的小分子物質(zhì)，因而具有活躍而廣泛的生物化學(xué)性質(zhì)，主要通過環(huán) 非 徑而發(fā)揮其生物效應(yīng) 51。 人參多糖單體 可增強正常小鼠的單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)功能 21。豬苓多糖能對正常人外周血單核細(xì)胞（ 促進(jìn)增殖作用，可提高 上 體的表達(dá)并促進(jìn) 其分泌 強其殺傷力 21。香菇多糖（ 刺激小鼠腹腔巨噬細(xì)胞活化并使 性增加，釋放大量 。枸杞多糖（ 胃與腹腔注射均可明顯增加小鼠腹腔靜 息期 O 誘生量及胞內(nèi)溶菌酶與超氧化物歧化酶（ 活性 122。 究發(fā)現(xiàn)葡聚糖能促進(jìn) 成酶基因的表達(dá)，使其 錄和蛋白質(zhì)合成增加，進(jìn)而促進(jìn) 合成與分中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 緒論 5 泌。 對 胞和 胞的影響 胞是一類重要的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞，它對 T 細(xì)胞 B 細(xì)胞骨髓干細(xì)胞等均有調(diào)節(jié)作用，并通過釋放細(xì)胞因子 對機(jī)體免疫功能進(jìn)行調(diào)節(jié)。 胞能殺傷對 胞敏感和不敏感的實體瘤細(xì)胞，具有廣譜的抗腫瘤作用。 研究發(fā)現(xiàn)商陸多糖能促進(jìn) 導(dǎo)的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化，增強 胞活性，促進(jìn) 150。牛膝多糖 50 mg/100 mg/腔注射，每天一次，共 5 d，可顯著增強 胞活性，還可對抗環(huán)磷酰胺對 胞的抑制作用 114。 2 多糖作用機(jī)制的研究 多糖類免疫增強劑的作用機(jī)制是當(dāng)前多糖研究的重點內(nèi)容，已經(jīng)深入到基因和分子水平。多糖通過與淋巴細(xì)胞表面受體結(jié)合，從而影響淋巴細(xì)胞的信息 傳遞過程，進(jìn)而影響淋巴細(xì)胞基因表達(dá)和淋巴細(xì)胞功能，是目前比較公認(rèn)的多糖作用機(jī)制。 多糖受體的研究 多糖通過與細(xì)胞表面多糖受體結(jié)合發(fā)揮作用。多糖與蛋白質(zhì)和酶一樣，分子中存在一個或幾個寡糖片斷的活性中心，只有多糖分子中的這些有活性的寡糖片斷才能與受體結(jié)合。 目前，已發(fā)現(xiàn)有四類多糖受體即補體 型受體（ 體?，F(xiàn)在研究最多的是 在于 胞巨噬細(xì)胞 B 細(xì)胞中性細(xì)胞和細(xì)胞毒 兩個不同結(jié)構(gòu)區(qū)域，一個能與葡聚糖特異 結(jié)合，一個與 活補體 3的裂解片斷 b）特異結(jié)合， 體與葡聚糖結(jié)合后，可促進(jìn)巨噬細(xì)胞對 理的靶細(xì)胞的吞噬作用 152。可溶性酵母多糖與中性粒細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞的 體的凝集素位點結(jié)合，從而激活受體結(jié)構(gòu)，使其變形，調(diào)節(jié)對 理靶細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用 147。 研究表明，葡聚糖受體受細(xì)胞因子和前列腺素調(diào)控。如淋巴因子 促進(jìn)巨噬細(xì)胞表面葡聚糖受體的表達(dá) 141。 增強葡聚糖受體的功能，使其介導(dǎo)的吞噬能力增強 141。 多糖對基因表達(dá)影響的研究 多糖能夠 影響淋巴細(xì)胞的基因表達(dá)；還能通過促進(jìn)細(xì)胞因子基因表達(dá)來促進(jìn)細(xì)胞因子的分泌。 靈芝多糖在體外能促進(jìn)小鼠脾細(xì)胞 泌及其 表達(dá)，并呈劑量依賴關(guān)系 100 。腹腔注射云芝多糖可以通過增加巨噬細(xì)胞的錳超氧化物歧化酶(量，提高小鼠巨噬細(xì)胞總 性 66。紫云英中提取的果膠多糖可增加 錄活性，促進(jìn)體外培養(yǎng)的小鼠 B 細(xì)胞的 泌 130。體內(nèi)注射 5 mg/30 mg/菇多糖，均能提高肝中 超氧化物歧 化酶（ 表達(dá)量，其中以 5 mg/ 第一章 緒論 6 劑量的作用稍強 61。 多糖對淋巴細(xì)胞信號傳導(dǎo)的影響 多糖還可影響淋巴細(xì)胞的信號傳導(dǎo)，這方面已有眾多文獻(xiàn)報道。 影響 一種重要的信號分子，多糖可通過影響 分泌調(diào)節(jié)機(jī)體免疫。 豬苓多糖（ 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞 成具有明顯的促進(jìn)作用，呈劑量依賴關(guān)系，并與干擾素具有協(xié)同促進(jìn)作用，另外， 能誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞 成 23。香菇多糖或協(xié)同干擾素均能促進(jìn)小鼠巨噬細(xì)胞分泌 5。云芝多糖能促進(jìn) 成酶基因的表達(dá) ，使巨噬細(xì)胞分泌加 97。 息系統(tǒng)的影響 動物細(xì)胞內(nèi)以 “第二信使 ”的形式對細(xì)胞功能起著重要的調(diào)節(jié)作用，影響機(jī)體免疫功能，大量研究表明，多糖能調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞內(nèi) 含量和相對比值。 螺旋藻多糖可劑量依賴性地引起小鼠脾細(xì)胞中 度升高 113。靈芝多糖可引起小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中 度快速升高，且呈劑量依賴關(guān)系， 5 峰值，之后緩慢下降，至 30 38；靈芝多糖也能劑量依賴性引起小鼠腹腔中 度快速升高 38。 鈣離子的影響 鈣離子也是一種重要的信使分子，對淋巴細(xì)胞功能有重要的作用，如調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞的分裂，促進(jìn) 釋放，介導(dǎo)巨噬細(xì)胞的吞噬作用等。研究表明多糖可引起淋巴細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的改變。 銀耳多糖在一定劑量范圍內(nèi)，可劑量依賴性地增加脾淋巴細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度，并與 通道阻斷劑可阻斷這一作用 7。螺旋藻多糖可劑量依賴性引起小鼠腹腔巨噬細(xì)胞顯升高，其升高是胞 外 鈣內(nèi)流和胞內(nèi)鈣釋放共同作用的結(jié)果 84。枸杞多糖能迅速誘導(dǎo)脾臟細(xì)胞和腹腔巨噬細(xì)胞內(nèi) 加，并呈劑量依賴關(guān)系 70。靈芝多糖影響小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的三磷酸肌醇（ 二?；视停?息傳 遞 系統(tǒng)，使小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中 濃度升高，進(jìn)而影響細(xì)胞鈣離子濃度 37。 3 多糖免疫調(diào)節(jié)劑的開發(fā)利用 病毒作用 病毒必須通過吸附和穿入易感宿主細(xì)胞，才能以自我復(fù)制的方式進(jìn)行增殖引起感染。吸附的兩個階段為 :一是病毒與細(xì)胞接觸，進(jìn)行靜電結(jié)合，此過程是非特異的、可逆的；二是病毒表面為點 (蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu) )與宿主細(xì)胞膜上相應(yīng)受體結(jié)合，此過程是特異的、非可逆的，硫酸多糖可與 合抑制 51。 目前最難對付的病毒之一。硫酸化香菇多糖具有顯著抗 用 ,體外 10 就可完全抑制 原的表達(dá)，干擾 胞的侵染，抑制合胞體形成，臨床使用能協(xié)同疊氮胸苷 (好地抑制 原的表達(dá) 132,139。 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 緒論 7 腫瘤作用 多糖類的抗腫瘤作用一般是通過提高宿主免疫功能來實現(xiàn)的。多糖通過增強網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)提高血清抗體水平促進(jìn) 淋巴細(xì)胞增殖誘生干擾素和腫瘤壞死因子增強巨噬細(xì)胞吞噬能力及直接殺傷腫瘤細(xì)胞等途徑來提高機(jī)體 免疫力。 香菇多糖能刺激免疫細(xì)胞成熟、分化及增殖，改善宿主機(jī)體平衡，達(dá)到恢復(fù)和提高宿主細(xì)胞對淋巴因子激素和其它生理活性因子的反應(yīng)性 44。白術(shù)多糖可促進(jìn)淋巴細(xì)胞向成熟 T 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化，提高小鼠細(xì)胞免疫功能 102。茯苓多糖能增強巨噬細(xì)胞識別功能，提高巨噬細(xì)胞的吞噬率和吞噬指數(shù)，并能通過增強腫瘤壞死因子 (因轉(zhuǎn)錄而增加巨噬細(xì)胞釋放 增強 活性 78。甘草多糖可以延長腹水瘤小鼠的生存期，抑制實體瘤的生長 144。豬苓多糖對小鼠 127。 報道 體內(nèi)用香菇多糖能顯著抑制小鼠外周血 產(chǎn)生，表明香菇多糖可應(yīng)用于下調(diào) 治療方案 133；另外，香菇多糖還能有效預(yù)防化學(xué)性或病毒性腫瘤的發(fā)生，對小鼠 體瘤的抑制率可達(dá) 70%其中 90%小鼠的腫瘤完全消退；還能抑制化學(xué)致癌，防止小鼠腸潰瘍惡化導(dǎo)致的結(jié)腸癌的發(fā)生 138。 衰老作用 隨著社會的發(fā)展，出現(xiàn)了眾多關(guān)于衰老發(fā)生機(jī)制的學(xué)說，如遺傳學(xué)說、自由基學(xué)說、交聯(lián)學(xué)說以及免疫功能下降學(xué)說等等。其中持免疫功能下降學(xué)說的科學(xué)家認(rèn)為衰老是由免疫功能下降引起的，而中草藥免疫調(diào)節(jié)劑可以 增強老年人的免疫功能，因此很有希望將它們作為延緩衰老藥應(yīng)用于臨床。近年來，化學(xué)家們已從扶正固本等補益類中草藥中得到了多種多糖類化合物，不但能促進(jìn)機(jī)體的免疫功能，而且證實了有些多糖確實有抗老延壽的作用。 藥理證明刺五加多糖不但具有很強的免疫活性，而且有顯著的抗衰老作用，實驗表明它可延長家蠶壽命 108。南沙參多糖可降低老齡小鼠肝、腦脂褐素含量，顯著抑制老齡小鼠血清中丙二醛的生成，提高老齡小鼠紅細(xì)胞中超氧化物歧化酶及全血中谷胱甘肽過氧化物酶的活性 33。 氧化作用 從真菌云芝得到的連接蛋 白的多糖（ 對巨噬細(xì)胞 化修飾后 力降低和 成增多有很好的抑制作用，能使 力升高，脂質(zhì)過氧化物等的指標(biāo)恢復(fù)正常 156。從海帶科植物海帶中提取的低分子量巖藻聚糖硫酸酯具有能使高血脂癥大鼠血清中 含量顯著升高，血清及組織中 力降低，起到抗氧化的作用 153。靈芝多糖可清除 制化學(xué)發(fā)光，并可在引發(fā)脂質(zhì)過氧化體系中抑制脂質(zhì)過氧化 135。硫酸軟骨素屬于天然硫酸 酯 化多糖，可抑制氧化過程的進(jìn)行 149。 血糖作用 從 養(yǎng)菌絲體的熱水提取物中純化出的一種多糖 抑制肝葡萄糖的輸出，降低血糖 134。從 果肉中提取的一種水溶性酸性多糖（ 有中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 緒論 8 顯著的降血糖作用 145。從真菌 發(fā)酵液中提取的水溶性中性多糖（ 患 糖尿病小鼠也有明顯的降血糖作用 146。靜脈注射 1 菇多糖 ,可顯著的預(yù)防老年白內(nèi)障和糖尿病引起的視網(wǎng)膜病的并發(fā)癥發(fā)生 129。 4 幾種重要多糖的研究進(jìn)展 迄今為止，已有 300 多種多糖類化合物從天然產(chǎn)物中被分離出來，其 中以植物多糖最為重要，以下介紹幾種重要多糖研究進(jìn)展。 菌脂多糖（ 細(xì)菌脂多糖 (革蘭氏陰性菌所特有，位于外壁層的最表面，由類脂 A核心多糖和側(cè)鏈多糖三部分組成。其是親脂又親水的聚陰離子分子，對體液免疫 (細(xì)胞免疫 (有輔佐作用，可引起動物特異性應(yīng)答。單獨注射可引起多克隆應(yīng)答。既有多克隆細(xì)胞有絲分裂原的作用，又可促進(jìn)巨噬細(xì)胞等分泌單核因子，如白介素 可調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞表面 子的表達(dá)，從而改變抗原的提呈。細(xì)菌脂多糖的免疫調(diào)節(jié)作用早已為人們熟知，并作為免疫佐劑應(yīng)用已有 幾十年。近幾年來在治療方面的應(yīng)用也屢見報道，其抑制腫瘤、抗放射、抗傳染等作用在醫(yī)學(xué)和獸醫(yī)臨床獲得進(jìn)一步證實 29。 菇多糖（ 香菇多糖是 1969 年在日本首先 獲得 ， 1986 年日本厚生省批準(zhǔn)生產(chǎn)并外銷。 1988 年我國批準(zhǔn)進(jìn)口，現(xiàn)在國內(nèi)亦可生產(chǎn)。香菇多糖是從人工培養(yǎng)的傘菌科真菌香菇子實體中提取、分離、純化獲得的均一組分的多糖。香菇能恢復(fù)或加強宿主對淋巴細(xì)胞、激素及其它生物活性因子的反應(yīng)，通過刺激免疫活性細(xì)胞的成熟、分化和繁殖，使機(jī)體的淋巴細(xì)胞大量增加；它還能激活補體系統(tǒng)的經(jīng)典途徑或變更途徑；還 可增加巨噬細(xì)胞非特異性免疫力，并增加中性粒白細(xì)胞對腫瘤的浸潤，促使宿主因癌癥及感染而引起的體內(nèi)平衡失調(diào)快恢復(fù)。 香菇多糖可增強機(jī)體的細(xì)胞免疫。如增強 變 強細(xì)胞毒 T 細(xì)胞活性，提高 胞活性，明顯增加 性細(xì)胞數(shù)和 值，使 T 細(xì)胞各亞群的活性明顯增加；香菇多糖與 胞有抗癌協(xié)同作用，并明顯增加巨噬細(xì)胞對癌細(xì)胞的吞噬作用，從而增強細(xì)胞免疫。香菇多糖能促進(jìn)正常小鼠經(jīng) 2.5 mg/激的脾臟 T 淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)，糾正 由環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的免疫低下狀態(tài) 94。可促進(jìn)馬立克氏病感染雞的脾細(xì)胞分泌 低雞的死亡率 52。 另外，香菇多糖也能明顯提高體液免疫功能，促進(jìn) B 細(xì)胞合成 加 抗 體分泌細(xì)胞數(shù)。 膝多糖 牛膝多糖是從中藥牛膝中分離得到的一種小分子量多糖化合物，藥效學(xué)的研究表明，牛膝多中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 緒論 9 糖具有顯著的增強機(jī)體免疫功能的作用。毒理試驗表明，牛膝多糖幾乎無毒性。牛膝多糖的純度可達(dá) 98%以上，易溶于水，與一些國內(nèi)外已在臨床使用的多糖類藥物如香菇多糖云芝多糖等相比，具有分子量小無抗原性水溶性好人體易 吸收生化提取質(zhì)量穩(wěn)定人工栽培資源豐富等優(yōu)點 91。 能影響紅細(xì)胞免疫功能。如牛膝多糖能提高小鼠 體花環(huán)率，也能降低 環(huán)率，表明它既能促進(jìn)紅細(xì)胞免疫粘附作用，也能加強紅細(xì)胞對循環(huán)免疫復(fù)合物的清除作用。 增強巨噬細(xì)胞免疫功能。它能提高腹腔巨噬細(xì)胞內(nèi)乳酸脫氫酶和酸性磷酸酶活性，并能顯著誘導(dǎo)腹腔巨噬細(xì)胞表達(dá) 且對 誘導(dǎo)表達(dá)具有顯著的劑量效果 57。 增強 T 淋巴細(xì)胞和天然殺傷細(xì)胞功能。如在體外能增強天然殺傷 (胞活性，促進(jìn)伴刀豆球蛋白 A（ 導(dǎo)的腫瘤 壞死因子（ 生。皮下注射 50 及 100 mg/顯著提高正常小鼠 胞活性和 成，增強二硝基氟苯誘導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)和對抗環(huán)磷酰胺對 膝多糖還可以增強 水型肝癌小鼠的 胞和淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞（ 胞）的殺瘤活性，并顯著提高小鼠的 產(chǎn)生 106。 增強小鼠體液免疫反應(yīng)，明顯提高正常小鼠血清總 特異性溶血素水平，增加脾臟空斑形成細(xì)胞數(shù)目，對抗環(huán)孢霉素 A 引起的 平的下降，增強小鼠單核巨噬細(xì)胞的吞噬功能，但對二硝基氟苯 （ 導(dǎo)的變態(tài)反應(yīng)無明顯影響 107。 牛膝多糖的衍生物 含量達(dá) 21%以上，多糖分子中的羥基已最大限度地被酯化），在體外具有明顯的抗病毒作用，對乙型肝炎和 用 90。 杞多糖 (枸杞多糖是從中藥枸杞中提取的雜多糖，它由六種單糖組成。 明顯增加小鼠外周 血 色法），其作用強，用量小，對 T 淋巴細(xì)胞免疫反應(yīng)具有選擇性作用，可以認(rèn)為它是一種 T 淋巴細(xì)胞免疫佐劑。 體液免疫也有促進(jìn)作用。 輻射損傷的小 鼠免疫功能的受抑有恢復(fù)作用，還可逆轉(zhuǎn)氫化可的松所致的小鼠免疫 功能 低下，使胸腺重量和抗體生成增加 32。 促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖。如 外應(yīng)用對正常小鼠及快速老化模型小鼠脾細(xì)胞增殖反應(yīng)具有直接促增殖作用，明顯增加正常小鼠脾臟抗體形成細(xì)胞（ 目，迅速誘導(dǎo)脾細(xì)胞和腹腔巨噬細(xì)胞內(nèi) 的增加，并呈一定劑量依賴性關(guān)系 70。 調(diào)節(jié)細(xì)胞因子分泌。如體外應(yīng)用枸杞多糖對 有雙向調(diào)節(jié)作用，低濃度時對 產(chǎn)生及其受體表達(dá)有明顯促進(jìn)作用，高濃度時則呈不同程度的抑制效應(yīng)， 可 誘導(dǎo)產(chǎn)生 99。 通過提高機(jī)體免疫，發(fā)揮抗腫瘤作用。如 瘤小鼠腹腔注射枸杞多糖（ 200 mg/ d，能顯著提高 胞活性以及脾細(xì)胞產(chǎn)生 能力，脾重及脾有核細(xì)胞數(shù)目明顯增多，在停藥后第 1 5 10 天，抑瘤率分別為 85。 量依賴性的抑制小鼠 瘤瘤重，恢復(fù)和提高荷瘤小鼠脾細(xì)胞數(shù)及活化 T 細(xì)胞增殖能力，明顯促進(jìn) 泌水平 46。 增加 胞活性。如枸杞多糖能增強 胞殺傷活性，增加白細(xì)胞數(shù)量， 對環(huán)磷酰胺所中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第