【畢業(yè)學(xué)位論文】(Word原稿)番茄尖孢鐮刀菌無致病力尖孢鐮刀菌生防特性的研究-生物化學(xué)與分子生物學(xué)

分 類 號(hào) 密級(jí) _ 收藏編號(hào) 10386 學(xué)號(hào) 11士研究生學(xué)位論文 番茄尖孢鐮刀菌 無致病力尖孢鐮刀菌 生防特性的研究 送 審 編 號(hào)： _ 研究生 姓名： 指 導(dǎo) 教 師： 姓名、職稱： 研究員、副教授 學(xué)科、專業(yè)： 生物化學(xué)與分子生物學(xué) 研 究 方 向： 應(yīng)用微生物 所 在 學(xué) 院： 生物科學(xué)與工程學(xué)院 論文答辯委員會(huì) 主 席 簽 名： _ 二 一二 年 三 月 番茄尖孢鐮刀菌 無致病力尖孢鐮刀菌 生防特性的研究 答辯時(shí)間： _ 答辯地點(diǎn)： _ 答辯委員會(huì) 成員名單： _ _ _ _ 獨(dú)創(chuàng)性聲明 本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得福州大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。 論文作者本人簽名： 簽字日期： 20 年 月 日 關(guān)于論文使用授權(quán)的說明 本人完全了解福州大學(xué)有關(guān)保留使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件，允許論文被查閱和借閱；學(xué)校可以公布論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文。（保密的論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定） 本學(xué)位論文屬于（必須在以下相應(yīng)方框內(nèi)打“”，否則一律按“非保密論文”處理）： 1、保密論文： 本學(xué)位論文屬于保密，在 年解密后適用本授權(quán)書。 2、非保密論文： 本學(xué)位論文不屬于保密范圍，適用本授權(quán)書。 是否同意授權(quán)以下單位 （必須在以下相應(yīng)方框內(nèi)打“”，否則一律按“同意授權(quán)”處理）： 1、 同意授權(quán) 不同意授權(quán) 清華大學(xué)“中國學(xué)術(shù)期刊 (光盤版 )電子雜志社”將本人學(xué)位論文進(jìn)行電子和網(wǎng)絡(luò)出版，并編入 列數(shù)據(jù)庫（中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫和中國知識(shí)資源總庫）。 2、 同意授權(quán) 不同意授權(quán) 中國科學(xué)技術(shù)信息研究所（萬方數(shù)據(jù)庫）將本人學(xué)位論文收錄到中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫，并進(jìn)行信息服務(wù)，同時(shí)本人保留在其他媒體發(fā)表論文的 權(quán)利。 本人簽名： 簽字日期： 20 年 月 日 導(dǎo)師簽名： 簽字日期： 20 年 月 日 I 中文 摘要 植物 枯萎病是由尖孢鐮刀菌 （ 引起的毀滅性病害， 該菌能夠引起多種作物及花卉的枯萎，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失 。 無致病力尖孢鐮刀菌作為最有潛力的生防菌株，其生防機(jī)制仍然不是很清楚，研究清楚 無致病力尖孢鐮刀菌 的作用機(jī)理是關(guān)鍵所在 。本文 以一株無致病力尖孢鐮刀菌 基礎(chǔ) ， 研究 該菌 的生長速度、細(xì)胞壁降解酶（ 活性 、次級(jí)代謝產(chǎn)物、 寄主范圍 、 定殖特性 及其 對(duì) 番茄 枯萎病的盆栽防治效果 。結(jié)果表明： 無致病力 尖孢鐮刀菌 生長速度與致病菌相比無明顯差異， 對(duì)枯萎病菌無拮抗作用；在以 柑桔 果膠和羧甲基纖維素鈉（ 碳源的培養(yǎng)條件下 均能產(chǎn)生 多聚半乳糖醛酸酶（ 、 果膠甲基半乳糖醛酶（ 、 纖維素酶（ 、 多聚半乳糖醛酸反式消除酶（ 果膠甲基反式消除酶（ 這幾種 細(xì)胞壁降解酶（ 但以 柑桔 果膠為碳源時(shí) 活力 更高； 在發(fā)酵液的 析中得到高匹配率成分（匹配率高于 80 %） 17 種，包括有機(jī)酸，酮類，醇類，醛類等 ， 與致病菌株的發(fā)酵液相比 未發(fā)現(xiàn)特殊組分。 無致病力 尖鐮孢菌 夠在番茄、茄子、黃瓜、甜瓜、甜椒、香蕉、粉蕉7 種作物中定殖，而且對(duì)這 7 種作物無致病性， 從入侵時(shí)間和入侵后的定殖時(shí)間來看，無致病力 尖鐮孢菌 番茄和香蕉中的定殖最穩(wěn)定 。 該菌能夠提高番茄和香蕉植株體內(nèi) 過氧化物酶（ 多酚氧化酶（ 種酶 的 活 性 ，但對(duì)不同的酶影響時(shí)間不一致 。 無致病力尖孢鐮刀菌 番茄有明顯促長作用，能顯著提高番茄的株高和葉片數(shù)量， 且 先接入無致病力尖孢鐮刀菌 接入病原菌的處理方法，顯著優(yōu)于與病原菌同時(shí)接入或者先接入病原菌的處理方法，對(duì)番茄枯萎病盆栽苗的防效可達(dá)76 %。 關(guān)鍵詞： 無致病力尖孢鐮刀菌 ；尖孢鐮刀菌 ；酶活；防治效果 該論文做的和寫的很好，建議： 1、英文要繼續(xù)修改， 2、第 4、 5 章合并。 on as a so of is At a in of on of in At of in of no no to or as of of 7 of in of 0 %), et , no in of to of in of 3 - in of of is to of 6 %. 錄 第一章 緒論 . 1 1 枯萎病的發(fā)生及危害 . 1 2 枯萎病的防治 . 1 業(yè)防治 . 1 學(xué)防治 . 2 病育種 . 2 物防治 . 3 3 無致病力尖孢鐮刀菌的作用模式 . 3 導(dǎo)系統(tǒng)抗性 . 3 爭 . 4 養(yǎng)競(jìng)爭 . 4 入位點(diǎn)競(jìng)爭 . 5 4 無致病力尖孢鐮刀菌的應(yīng)用現(xiàn)狀 . 5 5 本研究的目的及意義 . 6 第二章 無致病力尖孢鐮刀菌 理學(xué)特性研究 . 7 引言 . 7 1 材料與方法 . 7 驗(yàn)材料 . 7 驗(yàn)方法 . 8 致病 力尖孢鐮刀菌 長速度 . 8 同營養(yǎng)條件對(duì)無致病力尖孢鐮刀菌 胞壁降解酶的活性影響 . 8 胞壁降解酶粗酶液的制備 . 8 G、 性的測(cè)定 . 8 性的測(cè)定 . 9 血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 . 9 馬斯亮藍(lán) 測(cè)定酶蛋白濃度 . 9 孢鐮刀菌 致病力菌株與致病菌株的 分分析比較 . 9 2 結(jié)果與分析 . 9 致病力尖孢鐮刀菌 致病菌生長速度的比較 . 9 養(yǎng)條件對(duì)無致病力尖孢鐮刀菌 胞壁降解酶的活性影響 . 10 桔果膠為碳源的影響 . 10 甲基纖維素鈉為碳源的影響 . 11 柑桔果膠和羧甲基纖維素鈉混合為碳源的影響 . 12 孢鐮刀菌 致病力菌株與致病菌株的 分分析比較 . 12 致病力尖孢鐮刀菌 致病菌的 分特性分析 . 14 3 討論 . 15 第三章 無致病力尖孢鐮刀菌 毒基因檢測(cè)及其病理學(xué)特性研究 . 17 引言 . 17 1 材料與方法 . 17 驗(yàn)材料 . 17 驗(yàn)方法 . 17 無致病力尖孢鐮刀菌 作物的安全性評(píng)價(jià) . 17 致病力尖孢鐮刀菌 作物體內(nèi)定殖能力分析 . 17 株的特異性引物 測(cè) . 18 2 結(jié)果與分析 . 18 幾種主要作物的安全性 . 18 致病力尖孢鐮刀菌 作物體內(nèi)定殖能力分析 . 19 株的特異性引物 測(cè) . 20 3 討論 . 20 第四章 無致病力尖孢鐮刀菌 香蕉與番茄上的定殖特性研究 . 22 引言 . 22 1 材料與方法 . 22 驗(yàn)材料 . 22 驗(yàn)方法 . 23 致病力尖孢鐮刀菌 致病菌在植物體內(nèi)的定殖監(jiān)測(cè) . 23 致病力尖孢鐮刀菌 致病菌對(duì)植物體內(nèi)酶類的影響 . 23 液的 制備 . 24 測(cè)定 . 24 測(cè)定 . 24 活力的計(jì)算 . 24 萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 . 24 . 24 2 結(jié)果與分析 . 25 致病力尖孢鐮刀菌 致病菌在植物體內(nèi)的定殖監(jiān)測(cè) . 25 株的致病性測(cè)定 . 25 株的分離驗(yàn)證 . 27 致病力尖孢鐮刀菌 致病菌對(duì)植物體內(nèi)酶類的影響 . 錯(cuò)誤 !未定義書簽。 致病力尖孢鐮刀菌 致病菌對(duì)過氧化物酶的影響 . 30 致病力尖孢鐮刀菌 致病菌對(duì)多酚氧化酶的影響 . 31 致病力尖孢鐮刀菌 致病菌對(duì) . 33 3 討 論 . 35 第五章 無致病力尖孢鐮刀菌 番茄枯萎病防效的測(cè)定 . 37 引言 . 37 1 材料與方法 . 37 驗(yàn)材料 . 37 驗(yàn)方法 . 37 致病力尖孢鐮刀菌 致病菌平板共培養(yǎng)的營養(yǎng)競(jìng)爭 . 37 致病力尖孢鐮刀菌 致病菌株 番茄盆栽苗枯萎病防效的測(cè)定 . 37 致病力尖孢鐮刀菌 番茄植株生長特性的影響 . 38 致病力尖孢鐮刀菌 番茄盆栽苗枯萎病防效的測(cè)定 . 38 2 結(jié)果與分析 . 38 致病力尖孢鐮刀菌 致病菌平板共培養(yǎng)的營養(yǎng)競(jìng)爭 . 38 致病力尖孢鐮刀菌 致病菌株 番茄盆栽苗枯萎病防效的測(cè)定. 39 V 致病力尖孢鐮刀菌 番茄植株生長特性的影響 . 39 致病力尖孢鐮刀菌 番茄盆栽苗枯萎病防效的測(cè)定 . 40 3 討論 . 42 第六章 結(jié)論與展望 . 44 1 結(jié)論 . 44 2 展望 . 44 參考文獻(xiàn) . 46 致 謝 . 51 個(gè)人簡歷 . 52 番茄尖孢鐮刀菌無致病力菌株生防特性的研究 1 第一章 緒論 1 枯萎病的發(fā)生及危害 植物枯萎病是由鐮刀菌引起的一種世界性真菌土傳病害，其主要的致病菌是尖孢鐮刀菌（ ） 。絕大部分的尖孢鐮刀菌都是致病的，會(huì)引起植物根部腐爛或維管束病變，但它們中有一些菌株能夠定殖于植物組織而不引起任何癥狀 1。致病的尖孢鐮刀 菌具有很強(qiáng)的寄主特異性?；诩闹髦参锏姆N類和品種，可以把它們大約分為 53 個(gè)種， 117 個(gè)?；停€有 29 個(gè)變種 2。 該菌有較強(qiáng)的腐生性，在土壤中能存活 5，厚垣孢子通過牲畜消化道后仍具有活力。所以，連作地和施用未充分腐熟有機(jī)肥的地發(fā)病嚴(yán)重 3。 尖孢鐮刀菌寄主范圍廣泛，目前已報(bào)道的被嚴(yán)重為害的作物有 番茄、香蕉、辣椒、西瓜、黃瓜、棉花、香石竹、康乃馨、蘿卜、鷹嘴豆、菠菜、草莓、川紅花、甘蔗、芝麻、粉蕉、鳳梨等多種植物 4。 枯萎病在植株的整個(gè)生育期均可發(fā)生， 3 至 4 年內(nèi)就會(huì)由零星點(diǎn)片發(fā)展為普遍流行性病害 5。 鄧?yán)ふ聦?duì)廣西北海市香蕉枯萎病進(jìn)行調(diào)查，自2003 年起到 2009 年，枯萎病發(fā)生面積由 加為 30 。 在發(fā)病地區(qū)，該病的發(fā)病率一般為 15 %至 30 %，嚴(yán)重時(shí)可達(dá) 70 %至 80 %，有時(shí)甚至導(dǎo)致絕收，造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。 張揚(yáng)等對(duì)北京市延慶縣 2002 年至 2006 年期間甘藍(lán)枯萎病的田間發(fā)生和危害進(jìn)行了追蹤調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)這 5 年來該縣甘藍(lán)發(fā)病面積提高了 ，年產(chǎn)量損失由 180000 展到 1370000 積年產(chǎn)量損失 4030000 。 目前陜西、甘肅、福建、 廣西 、四川、 海南、 湖南、北京、 貴州、 浙江、山西等地已相繼有此病的報(bào)道。植物枯萎病呈快速發(fā)展和蔓延態(tài)勢(shì)，危害日益加重，已經(jīng)對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)構(gòu)成巨大威脅。 2 枯萎病的防治 業(yè)防治 對(duì)枯萎病的防治傳統(tǒng)上采用農(nóng)業(yè)措施：（ 1）實(shí)行與其它種類蔬菜輪作，最好水旱輪作 ；輪作在一定程度上可控制土傳病害已經(jīng)在多種作物病害控制中得到證實(shí)。 就要求進(jìn)行輪作，由于 鐮刀菌 在土壤中的存活時(shí)間較長，一般 5 年以上輪作才有較好的防治 效果 8。 （ 2）選用無病土育苗，提倡 用新法育苗，減少傷根， 即使清理田間發(fā)病植株及病殘?bào)w，防治其隨農(nóng)事操作在田間傳播或者成為病害的侵染來源，對(duì)減緩病害發(fā)生和蔓延具有積極作用； 重病地塊或棚室在夏 季 高溫季節(jié)覆膜， 利用太陽 能 升高薄膜下溫度直至病殘?bào)w全部腐爛，從而殺死病菌，可有效控制病害的蔓延。 （ 3） 以抗枯萎病能力較強(qiáng)的作物為砧木，嫁接 栽培 達(dá)到防治目的 ； 嫁接苗不僅可以防治枯萎病，確保苗全、苗壯，而且嫁接苗的根系強(qiáng)大，對(duì)水、肥的吸收能力強(qiáng)。 莫云彬等用不同砧木嫁接西瓜，結(jié)果表明利用日本強(qiáng)勢(shì)葫蘆作為砧木的效果最佳，不僅抗枯萎病能力最好，而且其綜合性狀也比其它 砧木福州大學(xué)碩士學(xué)位論文 2 效果好 9。 （ 4）加強(qiáng)肥水管理，嚴(yán)防大水漫灌，施用充分腐熟的有機(jī)肥，增施餅肥、磷鉀肥與消石灰，改善土壤理化性狀 10。 雖然 傳統(tǒng)的農(nóng)業(yè)措施對(duì)枯萎病具有一定的 防治效果，但由于這種方法耗費(fèi)時(shí)間長，適用范圍有限，此外，采用嫁接法除了增加工作量，同時(shí)也使得生育期推遲，某些嫁接組合的可溶性糖、蛋白質(zhì)含量和有機(jī)酸的成分發(fā)生了變化，導(dǎo)致果實(shí)口感、品質(zhì)下降 ，同時(shí)也無法解決種子帶菌的問題，這些缺陷都限制著農(nóng)業(yè)防治的適用性 11。 學(xué)防治 與農(nóng)業(yè)防治相比，化學(xué)防治具有起效快 、效果好等優(yōu)點(diǎn)。 國內(nèi) 常用的化學(xué)方法 有：（ 1）新土育苗或床土消毒，每平方米用 50 %多菌靈可濕性粉劑 8g 加土拌勻，先將1/3 藥土灑 在畦面上，然后播種，再把其余藥土覆在種子上。（ 2）種子消毒，用適樂時(shí)進(jìn)行種子包衣（ 100 以處理 2 子），并將藥液稀釋到 2000 倍進(jìn)行苗床澆灌或用 硫酸銅浸種 5 凈后催芽播種。（ 3）發(fā)病初期要及時(shí)拔除病株，帶到田外深埋或燒掉，并對(duì)發(fā)病點(diǎn)進(jìn)行噴藥保護(hù)。藥劑有 70 %甲基托布津可濕性粉劑 1000 倍、50 %多菌靈 600 倍、 適樂時(shí) 1500 倍，灌根時(shí)，可根據(jù)植株的生長情況，每 株灌藥液 100 g，每隔 7d 一次，連續(xù) 3 12。 國外常用化學(xué)藥劑熏蒸土壤達(dá)到消滅病原菌的目的，如用甲基溴熏蒸。 在西瓜播種前 25 d 用聚乙烯塑料薄膜覆蓋地面，利用太陽能加熱結(jié)合 的多菌靈菌種和播種后噴灑，可明顯降低枯萎病的發(fā)生13。 采用化學(xué)防治的方法雖能產(chǎn)生 較好 的防治效果，但 也 能夠?qū)е虏≡a(chǎn)生抗藥性，從而使防治工作失敗，更加嚴(yán)重的是化學(xué)農(nóng)藥污染環(huán)境、損害人類健康 ，例如甲基溴已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)是一種潛在的致癌物 ，現(xiàn)在國家已不提倡使用 11。 病育種 對(duì) 環(huán)境最安全的方法就是使用抗病品種， 常規(guī)方法一般是用野生植物作為抗枯萎病育種材料，經(jīng)過幾年抗性培養(yǎng)篩選出具有良好抗性的植株。但 常規(guī)育種方法選育抗性資源花費(fèi)時(shí)間長、耗資大 ?，F(xiàn)代分子生物學(xué)的發(fā)展，為抗病育種研究提供了強(qiáng)有力的工具，分子標(biāo)記方法和 基因工程 技術(shù)已成為 抗病育種 的 主要方法 ，植物的遺傳轉(zhuǎn)化可創(chuàng)造出常規(guī)方法得不到的基因型，相比常規(guī)手段 大大減少了育種工作，縮短了育種周期，提高了育種效率， 可更加有效的改造栽培品種的缺點(diǎn)，并打破物種界限，擴(kuò)大了基因來源 14。通過將質(zhì)粒 入 一株熒 光假單胞菌獲得融合菌株，提高了該菌株對(duì)黃瓜枯萎病的防治效果 15。 抗病育種 雖然 能夠選育出抗病品種 ，但也面臨很多問題 。一方面， 有些作物抗性種質(zhì)資源較少，抗性遺傳規(guī)律復(fù)雜，且選育的抗病品種只是相對(duì)抗病，生命力較弱，不能從根本上解決問題 ； 從另一方面來說，培養(yǎng)一種抗病植物，不僅要知道該植物的優(yōu)勢(shì)基因，而且要求這個(gè)植物是雌雄同株的。對(duì)于康乃馨、仙客來、亞麻這些植物來說，它們的優(yōu)勢(shì)基因未知，而對(duì)于棕櫚樹來說，它又是雌雄異株的 16。隨著時(shí)間的推移，致病菌還會(huì)突變?yōu)橐环N新的菌侵入那些抗病植物?？偠灾?，通過農(nóng)藥以及 培養(yǎng)抗病品種來控番茄尖孢鐮刀菌無致病力菌株生防特性的研究 3 制枯萎病還存在一定的困難。隨著人們對(duì)殺菌劑危害環(huán)境的認(rèn)識(shí)逐漸提高，對(duì)零化學(xué)農(nóng)產(chǎn)品的興趣逐漸增加，加上培育抗病品種費(fèi)時(shí)費(fèi)力，生物防治就成為人們最青睞的辦法。 物防治 用來防治植物枯萎病的生防菌已經(jīng)有很多報(bào)道，包括多種細(xì)菌、真菌、放線菌，或者將兩種或兩種以上的菌聯(lián)合起來使用。 這些生防菌之所以能夠防治枯萎病，目前公認(rèn)的機(jī)制主要包括營養(yǎng)的競(jìng)爭、生態(tài)位的競(jìng)爭、 重寄生、 產(chǎn)生抗菌素或誘導(dǎo)植物產(chǎn)生免疫抗性等 17。 生防 細(xì)菌 目前