【畢業(yè)學位論文】（Word原稿）多菌靈酶聯免疫分析技術研究免疫分析技術及其應用碩士論文

密級： 論文編號： 中國農業(yè)科學院 碩士學位論文 多菌靈酶聯免疫分析技術研究 : 國農業(yè)科學院碩士論文 摘要 i 摘 要 鑒于我國有機磷和氨基甲酸酯農藥的大量應用，蔬果中農藥殘留超標不容忽視。為了滿足我國農產品現場和快速檢測的需要，選取應用廣泛、具有廣譜殺蟲效果和具有 代表性 的氨基甲酸酯類農藥多菌靈作為研究對象，根據酶聯免疫分析的原理，試圖 建立快速、低成本、適宜于現場檢測的多菌靈殘留的酶聯免疫快速檢測技術， 為 進一步 研制 劑盒 及其工藝流程定型 提供基礎， 也將為蔬果 中農藥殘留的快速、現場檢測和監(jiān)控提供技術支撐。 多菌靈，通用名 子式： 學名稱 ，與苯菌靈等具有相似的特異結構 苯并咪唑，與 托布津、甲基托布津的代謝物結構相同。 本研究設計了兩條多菌靈半抗原的合成路線。其一，活化 苯 并 咪唑環(huán)上的 亞氨基 ， 使之帶上可以利用的羥基 ，合成半抗原 1氧羰乙基丙酸 2苯并咪唑氨基甲酸甲酯 ，多菌靈中的 苯并咪唑環(huán)和氨 基甲酸甲酯部分均 被 保留 ；其二 ， 多菌靈原藥在堿性條件下水解，生成 2氨基苯并咪唑氨基甲酸甲酯，再經 琥珀?；玫桨肟乖?2琥珀酰苯并咪唑。合成的兩種半抗原經核磁共振和紅外鑒定，證明合成成功。分別采用混合酸酐法、活性酯法使兩種半抗原與蛋白質偶聯制備了免疫原 包被原 聯比均在 3 35： 1 之間，符合小分子免疫的要求。 經過免疫得到了抗血清，但是第一種免疫原的抗血清效價較低，不滿足 法的要求。而第二種免疫原 制備 的 多克隆抗體，效價在 64000 以上，同時除了與苯菌靈具有很高的交叉率 、與噻苯達唑交叉率達到 8外，與托布津、甲基托布津等其它農藥的交叉率均小于 2，符合 析技術建立對 抗 血清效價 的要求，并用辛酸一硫酸銨鹽析法對抗血清進行純化。 本研究從包被條件與方法選擇、抗體 （抗血清） 工作濃度優(yōu)化和基質條件優(yōu)化（鹽濃度、 方面初步得到間接 析的最佳工作條件，并在優(yōu)化條件下建立多菌靈檢測的間接 ，抑制率與多菌靈的濃度對數值呈顯著的線性關系，符合回歸方程Y=x)+回歸 系數 ，測定范圍 ， 最低 檢測 10%的甲醇提取中的添加回收率平均為 109，變異 系數 16 ， 初步鑒定 滿足多菌靈的實際檢測需求。 采用多菌靈間接 對 結構類似 物進行交叉反應試驗。當多菌靈對抗體抗原反應的抑制率為 50%時，所需多菌靈的濃度為 g，苯菌靈的濃度為 4.0 ng/g，噻苯達唑濃度為 30 ng/g，交叉反應率為 8%，甲基托布津、托布津濃度均大于 200 ng/g，交叉反應率為小于 2%， 2氨基苯并咪唑濃度大于 500 ng/g，交叉反應率小于 此法可以 用于苯菌靈及其代謝物多菌靈的檢測 ，但是如何區(qū)分苯菌靈和多菌靈殘留尚需進一步研究 。 以建立的 測方法對來自土壤和水中的添加樣品進行回收實驗，并與常規(guī)的 接 測定土壤中多菌靈的添加回收率土壤中回收率為 109，變異 系數 ，河水中的回收率為 變異 系數 ，純水中變異 系數 16 ，平均回收率 109。 綜合分析， 所 建立的多菌靈間接 ，可適用于 現場快速檢測 ， 成本 和簡便性等方面較傳統的儀器分析 具 有明顯的優(yōu)勢。 關鍵詞： 多菌靈，苯菌靈，農藥殘留，酶 聯 免疫分析 中國農業(yè)科學院碩士論文 t is of in in to of In to of in to a a to a to an of in ， as of of of as (1) To on to of 1(2) To to 2NM R of of of , of of 4000 by It to 00%), to as It to of of of of A in N of Y=x)+ is x of , , of 09% 6. of to of .0 ng/g 30 ng/g %， 00 ng/g %，00 ng/g is to 國農業(yè)科學院碩士論文 At g/ BC in 09 in % of to 國農業(yè)科學院碩士論文 目錄 I 目 錄 摘 要 . i . 錄 . I 第一章 引 言 . 1 藥殘留免疫速測研究的意義 . 1 藥免疫檢測技術基本原理 . 2 疫與抗原抗體反應 . 2 分子免疫 . 2 藥免疫檢測原理 . 3 藥免疫檢測技術研究的方法 . 3 抗原的分子設計 . 3 抗原與載體蛋白的偶聯 . 3 藥人工抗原偶聯比例的測定 . 4 藥免疫分析的發(fā)展趨勢 . 4 疫傳感器 . 5 組分分析物免疫分析 (. 5 動注射免疫分析 (. 5 疫 術 （ . 5 疫親和層析 . 6 研究的立題依據及意義 . 6 第二章 多菌靈人工抗原的合成與鑒定 . 7 料與方法 . 7 學試劑及主要儀器 . 7 菌靈結構類似物的合成與鑒定 . 8 菌靈人工抗原（免疫原和包被原）的制備及鑒定 . 10 果與分析 . 13 抗原核磁的鑒定結果 . 13 工抗原的紫外圖譜 . 15 菌靈抗原的生物鑒定 . 17 論 . 19 于多菌靈半抗原結構類似物的設計 . 19 于多菌靈抗原的合成與鑒定 . 19 第三章 定量測定多菌靈的間接競爭 法的建立 . 20 料與方法 . 21 劑及主要儀器 . 21 體制備純化及其特性考察 . 23 菌靈競爭 佳工作條件的確定 . 24 測方程的建立及添加回收試驗 . 26 果與分析 . 26 體的特性 . 26 菌靈競爭 佳工作條件的確定 . 27 中國農業(yè)科學院碩士論文 目錄 檢測方程的建立及添加回收試驗 . 31 論 . 33 于抗體的特性 . 33 于抗體最佳工作濃度的確定 . 34 于影響 測方法的系列因素 . 34 于標準曲線的實用性 . 34 第四章 主要結論 . 35 要結論 . 35 工抗原 的設計合成 . 35 多菌靈多克隆抗體的制備 . 35 菌靈殘留 接競爭）的建立 . 35 菌靈殘留 接競爭）的檢驗 . 36 參考文獻 . 37 致 謝 . 43 作者簡歷 . 44 中國農業(yè)科學院碩士論文 第一章 引言 1 第一章 引 言 藥殘留免疫速測研究的意義 我國農業(yè)生產持續(xù)、穩(wěn)定增長，農產品供給由長期短缺到總量基本平衡、豐年有余，同時，也付出了資源 過度消費和環(huán)境質量日益惡化的沉痛代價。化肥、化學農藥、除草劑等農用化學品的長期、大量、不合理使用，對我國農業(yè)生態(tài)環(huán)境和農畜產品的安全生產及人體健康與生命構成了嚴重威脅。全國每年因農業(yè)污染造成的直接經濟損失高達 160 多億元。 20 世紀 90 年代以來，我國 蔬菜和水果農藥殘留引起人畜中毒死亡事件頻繁發(fā)生。據統計， 1981 ，死亡 ， 1985 年全國農藥中毒人數 ，死亡 ；近 10 年來，我國平均每年發(fā)生中毒事故約 10 萬人，死亡 1 萬多人（單正軍等， 1997）。其中 1992 年至 1996 年全國 26個省市發(fā)生農藥中毒事件 247349 例，死亡 24612 人 (陳曙陽 王鴻飛， 1997)，我國每年因農藥中毒的人數占世界同類事故中毒人數的 50%。據農業(yè)部 2000 年底對我國 14 個省會城市 2110 個樣品的檢測結果，蔬菜中農藥超標 率 高達 其中北京、天津、上海、廣州、南寧、昆明等大城市蔬菜農藥 殘留超標率超過 50%(彭紅蘭 陳永寧， 2000)。近年來，我國蔬菜、茶葉出口中每年因 農藥 殘留超標而被進口國拒收、扣留、遲貨、索賠、終止合同、拒絕入關等事件時有發(fā)生，給國家?guī)砭薮蟮慕洕鷵p失并丟失了國際市場，有損國家形象。隨著我國加入 及人民生活水平的提高，在國際農產品貿易中，將面臨更加苛刻 的 農藥殘留 等有毒化學品殘留標準的制約。同時，我國的農貿市場小而多，中規(guī)模以上的就有 5000 多個，農藥殘留的檢測與市場準入控制將面臨大量的農藥殘留超標篩選，缺少快速 、 靈敏 、 準確的檢測技術就難以進行，難以消除消費者的心理 影響。所以農藥殘留的快速檢測問題，已成為我國農產品生產和貿易發(fā)展的重要制約因素之一。急需研究建立蔬、果、茶 中農藥殘留 快速檢測技術，研發(fā)小型、便攜、適于現場檢測快速實用的速測產品，為農產品安全生產與 市場監(jiān)控 提供技術支撐。 國內已有的檢測技術和儀器設備重點是對產后農產品農藥殘留的精確測定， 而 對殘留快速檢測技術及速測產品的研制起步晚 。 隨著我國人民生活現代化和生活質量的不斷提高，消費者對蔬、果、茶等農產品中 的 農藥 殘留提出了更高的要求，現有的速測技術 不能滿足我國農 產品安全生產監(jiān)測及廣大消費者的需求。 隨著待測樣本 數 量 ，特別是要求現場快速檢測樣品 數 量的迅速增加，迫切需要開發(fā)和運用高效 、 快速 的 新技術 和方法 。為了滿足當前農藥殘留 檢測 的要求，有效地開展快速篩選和監(jiān)測農藥殘留的危害，一些新興的分析技術不斷涌現，如農藥殘留的多殘留快速檢測方法等均取得了進展。農藥殘留檢測技術不斷朝著更加快速、方便、靈敏與可靠的方向發(fā)展。 免疫分析法 (一種以抗體作為生物化學檢測器，對化合物、酶或蛋白質等物質進行定性和定量分析的技術，它基于抗原與抗體的特異性反應，具有特異性強、靈敏度高 (檢測限可達 1 1000 )、方便 快捷、分析容量大、檢測成本低、安全可靠等優(yōu)點。一般不需要貴重儀器 ， 可大大簡化甚至省去前處理過程 ， 對使用人員的 專業(yè) 技術要求不高 ， 容易普及和推廣 ，尤其適宜現場篩選和大量樣品的快速分析 。 該技術開發(fā)的產品 檢測試劑盒 ， 可廣泛應用于大量中國農業(yè)科學院碩士論文 第一章 引言 2 樣品的快速 篩選 檢測 和現場檢測 。 20 世紀 90 年代以來它在檢測糧食、水果、蔬菜、肉、奶、水和土壤中農藥的殘留分析上得到迅速發(fā)展 ， 成為研究比較多的一項分析技術。世界糧農組織 ( )已向許多國家推薦此項技術。因此 ， 人們稱免疫分析技術是 21 世紀最具競爭性和挑戰(zhàn)性的檢測分析技術。 藥免 疫檢測技術基本原理 疫與抗原抗體反應 脊椎動物機體具有免疫系統，當異源性大分子進入體內時，能刺激機體發(fā)生保護性應答反應（免疫反應），產生特異性的保護物質（免疫球蛋白 即抗體）來識別該異源物質（即抗原或免疫原）并與之結合，從而“鈍化”該物質以排除其干擾?？乖c抗體的結合反應是高特異性的，主要依靠抗原與抗體間結合位點相關空間結構的精密“鍥合”和范德 華 力 等維系 ?？贵w抗原結合反應符合質量作用定律，因而反應不僅可以在體內進行，也可以在體外進行。 分子免疫 抗原的免疫原性與分子的大小密切 相關。凡具有免疫原性的物質，分子量常大于 10000，分子量小于 5000 的一般免疫原性很弱，特別是分子量在 1000 以下的小分子幾乎無免疫原性。抗原物質要求有一定的分子量，同時也要有一定的分子結構和空間構象。分子結構和空間結構復雜者抗原性強，如含有芳香族氨基酸和堿性氨基酸的蛋白質較含其他氨基酸者抗原性強?？乖肿拥目臻g構象，即基團之間的相互立體關系，是決定抗原性重要的因素，但是空間構象是最容易受到破壞的因素。 一種抗原物質刺激機體產生相應的抗體，這種抗原只能與相應的抗體相結合發(fā)生反應，即抗原的特異性（ 也就是所謂的抗原所引起的免疫應答具有極強的針對性。抗原的的分子量，結構復雜性和特異性不決定于整個抗原分子，而決定于抗原分子表面具有特殊立體構型和 免疫活性的化學基團，這些基團易為機體的免疫應答所針對，是與抗體相結合的部位，這個區(qū)域或基團稱為抗原決定簇（ 又稱抗原表位（ 實驗證明，將某些簡單的化學基團，如羧基（ 磺酸基（ 砷酸基（ 別連接在苯胺或其他芳香胺上，通過偶氮化作用，使之與血清蛋白相連 接，形成的產物稱為偶氮蛋白質。這些物質的抗原特異性決定于新結合上去的暴露于表面的簡單化學基團，而不在蛋白質本身，這就是半抗原的免疫機理。 抗原特異性決定于抗原決定簇的性質、氨基酸或碳水化合物的種類、序列及空間立體構型?？臻g構象與抗原特異性有 密切 關系，光學異構性對免疫原性也有很大影響。 D 型低于 L 型（氨基酸中，除甘氨酸外，都有不對稱碳原子，都有旋光性）。旋光性 也 影響抗原的特異性。例如，把酒石酸的光學異構物分別和對硝基苯胺縮合，經重氮化再連接到蛋白質載體上，以研 究其抗原特異性，結果表明，其免疫原性互不相同。 中國農業(yè)科學院碩士論文 第一章 引言 3 藥免疫檢測原理 農藥的分子量大多小于 1000，這些小分子物質盡管具有反應原性，可與特異性抗體相結合形成半抗原抗體復合物，但是本身通常沒有免疫原性，不能直接刺激動物機體產生特異性抗體，但當它們與蛋白質載體結合后即可獲得免疫原性。此外，小分子物質本身也不能被現有的固 相 載體吸附，而必須與載體蛋白偶聯后，才能通過載體蛋白的作用將農藥半抗原包被在固 相 載體上。包被在固 相 載體上的半抗原（定量）和待測液中的半抗原（待測物質）競爭地與限量抗體結合，通過測定半抗原 抗體復合物的量計算待測物的含量。 藥免疫檢測技術研究的方法 抗原的分子設計 農藥相對分子質量一般小于 1000， 不具備刺激機體產生針對農藥抗原決定 簇 的特異 抗體 ，必須與大分子物質連接后才能刺激機體產生抗體，這也是小分子免疫分析的基本模式。半抗原的結構對方法的檢出限和選擇性至關重要，因此，首先需要合成可直接與載體 (一般為蛋白質 )偶聯，并能最大程度模擬待測分子結構的半抗原。理想的半抗原，一方面應具備待測物的結構特征，特別是立體結構；另一方面與載體連接后應保證該特征結構能最大程度地 為與 免疫活 性細胞識別 ，并與之 結合，以制備出具有預期選擇性和親合性的抗體。典型的半抗原結構應具備適當 的 末端活性基團，如 ，同時活性基團與載體之間應具備一定長度的間隔臂，一般為 3 6 個碳鏈長度 (0.8 間隔臂一般為非極性，且除供偶聯的活性基團外，不應有其它高免疫活性的結構，如苯環(huán)、雜環(huán)等，以降低抗體對間隔臂的識別和間隔臂對待測物結構特征的影響 。此外， 間隔臂還應遠離待測物的特征結構部分和官能團，有利于高選擇性和高親合性抗體的產生。 研究表明，半抗原的合成應該遵循以下幾個 基本原則： (1)間隔臂 (或連接分子 )應盡量避免連接在目標分子的官能團處或靠近官能團處，而是最好位于重要的特征性官能團的遠端，否則會減少抗體與目標分子的識別和結合位點。 (2)對于結構類似的一類化合物，間隔臂應當在它們具有相同結構 (或類似結構 )的位置連接，以最大限度的使分子的獨特部位暴露。間隔臂長 度一般以 3 或 0. 58宜。 (3)盡可能避免間隔臂含較強的決定簇 (如芳環(huán)、共軛雙鍵或雜環(huán)等 )，通常以含末端活性基團的鏈烷 烴 為宜，以減少所產生的抗體對間隔臂的過度識別而降低對目標分子的識別能力。 抗原與載體蛋白的偶聯 大多數農藥都是小分子化合物，本身沒有免疫原性，它們必須與大分子物質連接后才能刺激機體 產生特異性抗體 。 所以，需要首先合成能直接與載體偶聯并能最大程度模擬待測分子結構的半抗原。半抗原通常由待測農藥衍生物制備或由原料合成，在其結構的末端需有可直接與載體蛋白質偶聯的活性基團，常用的活性基團有 。半抗原與載體蛋白的偶中國農業(yè)科學院碩士論文 第一章 引言 4 聯即人工抗原的合成。常用的載體蛋白有牛血清白蛋白（ 人血清白蛋白 (兔血清白蛋白 (豬血清白蛋白 ( 鉬 孔血藍蛋白 (卵清蛋白 (。根據半抗原 (待測農藥改造物 )的結構 特征 ，常用的連接方法主要包括：通過羧基連接的混合酸酐法和碳二亞胺 (；通過羥基連接的琥珀酸酐法；通過醛基連接的戊二醛法；通過酚基連接的重氮化法；通過氨基連接的 應和丙烯酸法；通過酮基連接的氨基氧乙酸法等。 一般 認為每個分子載體上連接的半抗原分子數以 10 左右為宜，過高結合比抗原易導致動物免疫耐受。 藥人工抗原偶聯比例的測定 鑒定農藥人工抗原最常用的方法是紫外光譜掃描法，如果人工抗原的紫外吸收圖譜 不同于原載體蛋白和半抗原的紫外掃描圖譜，則證明人工抗原合成成功。半抗原、 偶聯物進行紫外掃描，根據半抗原偶聯物在紫外區(qū)域的吸收約等于游離蛋白和半抗原吸光值的簡單加和的特點，可通過三者在 280吸光值推算其可能的結合比。本論文即采用該法。計算公式如下： K A B 式中： 偶聯物中 A、 、 物質在 物質在 物質在其最大吸收波長下的吸光值。 物質在其最大吸收波長下的吸光值。 物質在 物質在 大波長下的吸光值。 物質最大吸收波長下的吸光值。 物質最大吸收波長下的吸光值。 藥免疫分析的發(fā)展趨勢 20世紀 90年代以來，一些新方法和新手段的出現，有力地推動了農藥免疫分析技術的快速發(fā)展。如分析農藥小分子的結構，深入探討其抗原決定簇的位置，通過化學方法封閉或突出某些特定的抗原決定簇，就可制備該決定簇的特異性抗體，以增加檢測的特異性，避免交叉反應；也有人提出可以考慮用能產生部分交叉反應的結構類似物，制成合適的免疫抑制原，對動物進行選擇中國農業(yè)科學院碩士論文 第一章 引言 5 性免疫抑制， 然后用相應的抗原進行免疫，可提高抗原對該物質識別的特異性；把免疫分析與其它技術聯用，如免疫分析與流動注射系統相結合形成流動注射免疫技術，免疫分析與傳感器結合形成免疫傳感技術，免疫分析與氣相、液相色譜聯用等，都充分利用了兩種技術的優(yōu)勢，既可增加檢測的靈敏度又可降低交叉反應；多組分分析物免疫分析的應用，為多種農藥暴露檢測以及混配農藥分析創(chuàng)造了條件 ； 利用分子生物學技術進行 備具有抗原完整功能的抗體片斷，并在生長繁殖迅速的生物體如大腸桿菌上進行足夠量表達，就可大大縮短特異性抗體制備時間等。 疫傳感器 免疫傳感器（ 將免疫測定法與傳感技術相結合而構建的一類新型生物傳感器 ， 應用于痕量免疫原性物質的分析研究。它利用動物體內抗原、抗體能發(fā)生特異性吸附反應的性質，將抗原（或抗體）固定在傳感器基體上，通過傳感技術使吸附發(fā)生時產生物理、化學、電學或光學上的變化，轉變成可檢測的信號來測定環(huán)境中待測分子的濃度。被用于分析的對象從復雜的病毒、微生物、生物毒素，到簡單的農藥分子、工業(yè)有機污染物、重金屬離子等各種物質，成為檢測食品中痕量有害物質方法的研究熱點。近年來，根據免疫化學原理研 制出的微型生物傳感器在現場監(jiān)測、原位分析、在線分析、微區(qū)分析、動態(tài)跟蹤監(jiān)控等方面顯示出誘人的開發(fā)前景。 組分分析物免疫分析 (多組分分析物免疫分析（ 指在同一份樣品中，同時測定兩種或兩種以上的相關分析物的免疫分析技術。這種技術的應用對需要檢測多種物質的綜合測定提供了重要信息，有利于環(huán)境、食 品 中 多種農藥殘留和職業(yè)中多種農藥接觸檢測，特別是對混配農藥接觸分析以及對其聯合作用及體內代謝動力學的探討和研究具有重要意義。 動 注射免疫分析 (1980 年 S 等將流動注射分析 (與特異性強、靈敏度高的免疫分析 (為一體 ， 創(chuàng)立了流動注射免疫分析法 (它是將抗體固定在適當載體膜上制備均勻一致的抗體膜帶（可分段使用），將膜帶的一部分安裝于密封但有樣品進出口的微型槽內，從進口處注入待測樣品和酶標樣品的混合液，競爭性結合反應在微型槽內進行，反應所 引起的特定物理或化學參數的變化由配套的檢測系統檢測出來， 該法分析速度快，自動化程度高， 目前已在藥物分析、環(huán)境監(jiān)測及農殘檢測等方面得到了廣泛應用。 疫 術 （ 將抗原抗體反應的高度特異性與 術的高靈敏度、高自動化、操作簡便等特點結合起來，形成了免疫 術，開創(chuàng)了免疫檢測技術的新時代。免疫 抗原抗體特異性反應與 大的擴增能力結合在一起，使免疫分析的靈敏度進一步提高，是目前為止最為敏感的檢測方法之一，理論上可以檢測到一個抗原分子的存在。免疫 基本原理與 第一章 引言 6 基本相似，所不同的是用一段可擴增的 子代替 的酶來放大檢出信號。 疫親和層析 將純化后的抗體固定到適當固相載體上制成免疫吸附劑。利用農藥小分子的反應原性和抗原抗體結合的特異性以及一定條件下能可逆解離的原理，以免疫吸附劑為固定相，對復雜樣品中超微量農藥殘留進行選擇性吸附，然后在適當條件下洗脫，從而選擇性地提取與濃縮超微量農藥殘留。所得提取物可直接用 理化分析方法進行檢測。大大簡化了樣品前處理過程，提高了提取效率。免疫親和層析是提高農藥殘留 分析靈敏度、選擇性、準確性和可靠性的一項具有很高實用價值的配套技術。雖然固相免疫吸附劑可再生利用，但其制備所需代價較高，使用和保存壽命有一定限度，尚待深入研究解決。 總之，免疫檢測技術已廣泛應用于細菌、毒素、農殘、獸殘，重金屬等的檢測。它以高特異 、靈敏 、 廉價、快速等特點，已在國外環(huán)境和食品安全檢測中占有一定的位置。今后隨著分子生物學、基因工程及電腦技術的發(fā)展，可望合成更高親和力和特異性的抗體并使其操作自動化，從而推動免疫分析技術的進步，提高食品安全檢測的有效性和實用性。 研究的立題依據及意義 70 年代以來，隨著有機氯類農藥受到禁用或限用，有機磷農藥的高毒性、高殘留，以及抗有機磷農藥昆蟲品種的日益增多，因而氨基甲酸酯類農藥的使用量逐年增加，這就使得氨基甲酸酯類農藥的殘留情況倍受關注。多菌靈，有效成分為 一個廣譜內吸性氨基甲酸脂類殺菌劑，對子囊菌、擔子菌和半知菌類中大多數病原菌都有效，目前正廣泛用于小麥赤霉病（特效）、水稻稻瘟病、水稻紋枯病、谷類黑穗病、棉花菌病及紅薯黑斑病的防治 。 但大量使用造成在空氣、土壤和水中的持久殘留，不僅造成環(huán)境污染，而且對人體