外源化合物致突變作用

1、第七章外源化學物致突變作用,一般毒性作用 特殊毒性作用 （致畸、致突變、致癌）“三致”作用,目的要求,掌握外源化合物的致突變作用 熟悉致突變作用的評價方法 了解致突變作用的遺傳學基礎,基本概念：突變、遺傳毒理學、致突變作 用、致突變物 致突變的類型：基因突變、染色體結(jié)構(gòu)異 常、染色體數(shù)目異常,內(nèi)容,致突變作用機制 突變的后果：生殖細胞突變，體細胞突變 機體對致突變作用的影響 致突變試驗,第一節(jié) 概述,DNA,RNA,蛋白質(zhì),基因就是指DNA中能編碼蛋白質(zhì)和功能 RNA的特定核苷酸序列,為什么子女與父母非常相象,13.3 13.2 13.13 13.11 12 12 13.11 13.2 13.

2、33 13.43,LDL-R,ApoE ApoCI ApoCII,等位基因,一對同源染色體統(tǒng)一基因座上的一對基因稱為一對等位基因（allele）。 二倍體細胞每一個基因是成對存在的，每一對基因分別來自雙親的染色體的同一位置上，這個位置稱為基因座（locus）。 等位基因之間有相互作用：如完全顯性，不完全顯性等。 非等位基因之間也存在相互作用,復等位基因,在某一種生物的群體中，每一個基因座上可以有兩個以上的等位基因，這就是復等位基因（multiple allele）。 例如人類的血型就是由IA,IB,i 3個復等位基因決定的，這幾個基因各自編碼特定的紅細胞表面抗原,外顯子和內(nèi)含子 基因的結(jié)構(gòu)是斷

3、裂的（split gene,原核生物的基因結(jié)構(gòu)大多數(shù)是連續(xù)的，即基因編碼蛋白質(zhì)的序列是不中斷的。而真核生物基因的編碼序列是不連貫的，即在兩個編碼序列之間有一段不編碼蛋白質(zhì)的非編碼序列。 編碼序列稱為外顯子（exon），非編碼序列稱為內(nèi)含子（intron）。 外顯子是出現(xiàn)在mRNA分子中的基因序列；內(nèi)含子則是不出現(xiàn)在mRNA分子中的基因序列,不同基因的外顯子和內(nèi)含子的數(shù)量及其長度是不等的,突變（mutation）：指遺傳結(jié)構(gòu)本身的變化及其引起的變異 即生物體的遺傳物質(zhì)發(fā)生了突然的、根本的、遺傳的變化，因為這種變化起源于基因和染色體，因此是可遺傳的變異,突變研究簡史,現(xiàn)實生活中,自然界中的自發(fā)突變

4、 轉(zhuǎn)基因的動、植物 各種有害因素引起的突變（物理，生物，化學,突變,誘發(fā)突變,自發(fā)突變：取決于時間、環(huán)境以及在基因 組中位置而隨機變化,人類健康危害,新品種培育、選擇、改良,發(fā)生過程短，頻率高；可為人類利用，也可能對人有害,適應性突變：適者生存（如細菌耐藥性,遺傳毒理學（genetic toxicology,研究化學、物理和生物因素對遺傳物質(zhì)（DNA）及活細胞遺傳過程的作用，以及人類接觸致突變物可能引起的健康效應的學科。 主要研究致突變作用機理 尋找敏感檢測系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)和探究致突變物 提出評價致突變物健康危害的方法,突變是致突變作用的后果 致突變物（mutagen）：能引起突變的物質(zhì)，又稱誘變劑

5、遺傳毒物（genotoxic agent）：因致突變物能引起遺傳物質(zhì)損傷，又稱其為遺傳毒物 遺傳毒性：對基因組的損傷能力，包括對基因組的毒作用引起的致突變性及其他各種不同效應。 致突變性：引起遺傳物質(zhì)發(fā)生突變的能力。在一個實驗群體中突變率可以定量檢測。 （突變率,致突變作用（mutagenesis）：指外來因素特別是化學因子引起細胞核中的遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的能力，而且此種能力可隨同細胞分裂過程而傳遞,直接致突變物（direct-acting mutagen）:具有很高的化學活性，其原型就可引起生物體突變的物質(zhì) 間接致突變物（indirect-acting mutagen）:本身不能引起突變，必須

6、在體內(nèi)經(jīng)過代謝活化才具有致突變性的物質(zhì),第二節(jié) 外源化學物的致突變類型,遺傳 基因突變 染色體結(jié)構(gòu)改變 染色體數(shù)目改變,機理 以DNA為靶的損傷： 基因突變 染色體畸變 不以DNA為靶的損傷 染色體數(shù)目改變,突變的類型,1.本質(zhì)相同，損傷的程度不同 2.基因突變在光學顯微鏡下不能觀察 3.染色體畸變（結(jié)構(gòu)、數(shù)目）可在光學顯微鏡下觀察,mutated type gene：基因內(nèi)存在突變位點的基因 wild type gene：沒有發(fā)生突變的基因,1.基因突變,Genetic mutation：指基因在結(jié)構(gòu)上發(fā)生了堿基對組成和排列序列的改變 兩種：堿基置換、移碼突變,A G T C,腺嘌呤 鳥嘌呤

7、 胸腺嘧啶 胞嘧啶,堿基置換（base substitution,錯誤配對的堿基在下一次DNA復制時按正常規(guī)律配對，于是原來的堿基對被錯誤堿基對所置換,轉(zhuǎn)換（transition）：嘌呤到嘌呤或嘧啶到嘧啶的變化 顛換（transversion）：嘌呤到嘧啶或嘧啶到嘌呤的變化 由某一堿基配對性能改變或脫落而引起的突變,突變的后果,同義突變（ synonymous mutation）:指沒有改變基因產(chǎn)物氨基酸序列的改變 錯義突變（ missense mutation）:指堿基序列的改變引起了產(chǎn)物氨基酸序列的改變 無義突變（nonsense mutation）:指某個堿基的改變使代表某個氨基酸的密碼

8、子變?yōu)榈鞍踪|(zhì)合成的終止密碼子，導致多肽鏈在成熟之前終止合成的改變,Tyrosine (Tyr) 酪氨酸 Serine (Ser)絲氨酸,無義密碼子：UAA，UAG ，UGA,移碼突變（frameshift mutation,指發(fā)生一對或幾對不等于3的倍數(shù)的堿基減少或增加，以致從受損點開始堿基序列完全改變，形成錯誤的密碼，并轉(zhuǎn)譯為不正常的氨基酸 因為堿基序列所形成的一系列三聯(lián)體密碼子相互間無標點符號，于是從受損位點開始密碼子的閱讀框完全改變,移碼突變的結(jié)果,從原始損傷的密碼子開始一直到信息末端的氨基酸序列完全改變 使讀碼框架改變其中某一點形成無義密碼，于是產(chǎn)生一個無功能的肽鏈片段 移碼較易成為致

9、死性突變 如果減少或增加堿基對剛好是3對，則產(chǎn)物的肽鏈中僅減少或增加1個氨基酸，其后果與堿基置換相似，與移碼突變不一樣，不包括在移碼突變范疇,基因突變的案例白化病,一組由黑素合成相關(guān)的基因突變導致眼或眼、皮膚、毛發(fā)黑色素缺乏引起的遺傳性疾病 酪氨酸酶缺乏或功能減退 發(fā)病率，2/1000 常染色體隱性遺傳,基因突變的案例多毛癥,23歲的墨西哥男子丹尼出生后就患有一種罕見的多毛癥，全身都被濃厚的黑色毛發(fā)覆蓋，看起來就像傳說中的恐怖“狼人”。 據(jù)悉，丹尼一家五代人都患有這種“狼人綜合征”，他和26歲的哥哥拉里從小便被當成“怪物”，被關(guān)進籠子中四處展出。 祖母攜帶這種變異基因，將它傳給了后代。哥哥拉里

10、、堂姐妹莉莉和卡拉、親妹妹賈米、6歲侄女丹尼拉等,多毛癥基因曾是人類身上的一種“失傳基因”。當遠古時代的人類還是長滿毛發(fā)的靈長類動物時，身上就存在著這種基因，但當人類漸漸進化后，這種基因變得不再需要，就開始發(fā)生突變而“關(guān)閉”。然而丹尼的家族不知何故，他們體內(nèi)被“關(guān)閉”的多毛癥基因現(xiàn)在又被“打開來了”。 “狼人綜合征”非常罕見，患病概率只有100億分之一，且沒有根治辦法,2.染色體畸變,染色體結(jié)構(gòu)異常（structual chromosome aberration）：指由于染色體或染色單體斷裂，造成染色體或染色單體缺失或引起各種重排，從而出現(xiàn)染色體結(jié)構(gòu)異常,染色體畸變類型,在下一次細胞分裂時斷片

11、因無著絲點，故不能進入分裂的核中而滯留在細胞質(zhì)中，稱為“微核,1）裂隙和斷裂：指染色體上狹窄的非染色帶，過去以寬度超過染色單體寬度為斷裂，反之為裂隙,2）無著絲點斷片和缺失,染色體畸變類型,后果： 穩(wěn)定的畸變(如倒位、易位)：染色體重排，可在機體或細胞群傳遞 不穩(wěn)定畸變（無著絲粒斷片、環(huán)狀染色體）：因喪失重要遺傳物質(zhì)或有絲分裂障礙致細胞死亡,3）環(huán)狀染色體,4）倒位,5）插位和重復,6）易位,3.染色體數(shù)目異常,動物正常體細胞染色體數(shù)目2n為標準 異常：整倍性畸變單倍體、三倍體、四倍體 非整倍性畸變比二倍體多或少一條或多 條染色體,發(fā)病率：1/800，1.25 以13億人口計 1.25x13億

12、=162.5萬。 體征：智力發(fā)育不全，發(fā)育遲緩，面容呆滯，眼 距寬。眼裂小，外眼角上斜，鼻根扁平，張口伸 舌，流涎水缺乏抽象的思維能力，只會發(fā)單音節(jié)。常伴有四肢、五官、內(nèi)臟、皮膚等方面的異常。50%患者伴有先天性心臟病，是死亡的主要原因。白血病的發(fā)病率高于常人20倍,Down 綜合征-為21-三體syndrome,Down（唐氏）綜合征患者,第三節(jié) 外源化學物致突變作用的機制及后果,機理 以DNA為靶的損傷： 基因突變 染色體畸變 不以DNA為靶的損傷 染色體數(shù)目改變-非整倍體、多倍體,突變的DNA變化,堿 基 錯 配,平面大分子嵌入DNA鏈,堿基類似物取代,堿基的化學結(jié)構(gòu)改變或破壞,1,二聚

13、體形成 DNA加合物形成 DNA蛋白交聯(lián)物形成,DNA鏈受損,堿 基 損 傷,2,突變細胞分裂過程改變,其它,3,如甲基黃酸乙脂（EMS）,氮芥(NM),甲基黃酸甲脂（MMS）,亞硝基胍（NG）等，它們的作用是使堿基烷基化，EMS使G的第6位烷化，使T的第4位上烷化，結(jié)果產(chǎn)生的O-6-E-G和 O-4-E-T分別和T、G配對，導致GC對轉(zhuǎn)換成AT對；TA對轉(zhuǎn)換成CG,烷化劑與DNA共價結(jié)合,1.堿基錯配 烷化劑（alkylating agent）：指對DNA和蛋白質(zhì)具有強烈烷化作用的物質(zhì) 一般情況下甲基化乙基化高碳烷基化,引起移嗎突變,2.平面大分子嵌入DNA鏈,嵌入劑（intercalati

14、ng agent）：指能以靜電吸附形式嵌入DNA單鏈的堿基之間或DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的相鄰多核苷酸鏈之間的物質(zhì) 如吖啶類染料分子多數(shù)是多環(huán)的平面結(jié)構(gòu)，特別是三環(huán)結(jié)構(gòu)，其長度為6.8*102nm，恰好是DNA單鏈相鄰堿基距離的兩倍,5-溴尿嘧啶和T很相似，僅在第5個碳元子上由Br取代了甲基， 5-BU有酮式、烯醇式兩種異構(gòu)體，可分別與A及G配對結(jié)合,3.堿基類似物取代,指與堿基結(jié)構(gòu)類似的化學物 堿基類似物能在S期中與天然堿基競爭，并取代其位置,4.堿基的化學結(jié)構(gòu)改變或破壞,化學物可對堿基產(chǎn)生氧化作用，從而破壞或改變堿基的結(jié)構(gòu)，甚至引起鏈斷裂 如甲醛、安吉甲酸乙酯、乙氧咖啡堿等在體內(nèi)可形成有機過氧化物

15、或自由基，可間接使嘌呤的化學結(jié)構(gòu)破壞，出現(xiàn)DNA鏈斷裂,DNA鏈受損,紫外線誘發(fā)胸苷二聚體,阻斷DNA復制,DNA- 環(huán)丁烷嘧啶二聚體和4-6光產(chǎn)物 阻止DNA復制 引起細胞死亡,1.二聚體形成,紫外線,加合物形成可活化癌基因，影響調(diào)節(jié)基因和抑癌基因表達,2.DNA 加合物形成,活性化學物質(zhì)與細胞大分子之間通過共價鍵形成的穩(wěn)定復合物如生物毒素、多環(huán)芳烴和芳香族類致癌物可使DNA形成大加合物，使DNA的立體構(gòu)象發(fā)生明顯變化，阻斷受損部位的半保留復制和轉(zhuǎn)錄.DNA加合物(adduct)的形成被普遍認為是誘變作用的重要事件,3.DNA蛋白交聯(lián)物： （DNA-protein crosslinks，DP

16、C,穩(wěn)定的共價結(jié)合物 對DNA構(gòu)象與功能產(chǎn)生嚴重影響 許多外源化學物均可引起DPC的形成（烷化劑、醛類、重金屬等,4.DNA-DNA交聯(lián)（DNA-DNA crosslinks，DDC）：DNA分子上一條鏈的堿基與互補鏈上的相應堿基形成共價連接,不以DNA 為靶的間接誘變,1.對DNA 高保真復制和修復有關(guān)的酶系統(tǒng)作用,一些氨基酸類似物可使與DNA合成有關(guān)的酶系統(tǒng)遭受破壞而誘發(fā)突變，脫氧核糖核苷三磷酸在DNA合成時的不平衡也可誘發(fā)突變 鈹和錳除可直接與DNA相互作用外，還可與酶促放錯修復系統(tǒng)相作用而產(chǎn)生突變,不以DNA 為靶的間接誘變,2.對紡垂體作用染色體分離異常,與微管蛋白二聚體結(jié)合 與微管

17、上的巰基結(jié)合 破壞已組裝的微管 妨礙中心粒移動 其他作用,突變的后果,突變的后果取決于化學毒物所作用的靶細胞 體細胞：其影響僅能在直接接觸該物質(zhì)的個體身體上表現(xiàn)出來，不可能遺傳到下一代（腫瘤） 生殖細胞：其影響有可能遺傳到下一代 （遺傳性疾病,其它： 致畸 衰老 心腦血管疾病,體細胞突變,腫 瘤,癌基因的活化與抑癌基因失活,生殖細胞突變,顯性致死：使卵子不能受精或突變配子與正常配子結(jié)合后， 在著床前或著床后的早期胚胎死亡。 隱性致死：需要純合子或半合子才能出現(xiàn)死亡效應。 非致死突變 產(chǎn)生遺傳病。 對基因庫的遺傳負荷產(chǎn)生不良影響。 基因庫是指某一物種的生育年齡群體于特定時期能將遺傳信息傳至下一代

18、的基因的總和。 遺傳負荷（genetic load)：指人群中每個個體所攜帶有害基因或致死基因的平均水平,致死性突變將導致死胎，它影響后代的數(shù)量而非質(zhì)量。 非致死性突變主要影響后代的質(zhì)量,對我國人群的影響,我國大約有1600萬新生兒,7080 %涉及遺傳因素,50 %由染色體畸變引起,已存活的兒童，住院就診的約有1/41/3患與遺傳有關(guān)的疾病,精子從產(chǎn)生到成熟需要3個月,人群中，約 3 5 患某種單基因病 約 15 20 患某種多基因病 約 1 患染色體病,體細胞遺傳病中的惡性腫瘤構(gòu)成我國不同地區(qū)人群死亡原因的第一或第二位,我國人群中智力低下的發(fā)生率約為2.2 ，其中1/3以上有多基因、單基因

19、或染色體改變的基礎,遺傳病對我國人群的影響,第四節(jié) 機體對致突變作用的影響,1）損傷耐受機制：DNA遺傳可繞過那些阻止DNA復制。 細菌重組修復 （2）修復機制：直接修復、切除修復,損傷修復,DNA執(zhí)行高保真復制,修復DNA損傷,遺傳信息代代相傳，并且高度保真,指引起DNA損傷的反應是可逆性的,負責較大范圍的損傷修復，將損傷或不正確的甲基去除和替換,重組修復,即雙鏈DNA中的一條鏈發(fā)生損傷，在DNA進行復制時，由于該損傷部位不能成為模板，不能合成互補的DNA鏈，所以產(chǎn)生缺口，而從原來DNA的對應部位切出相應的部分將缺口填滿，從而產(chǎn)生完整無損的子代DNA的這種修復現(xiàn)象,DNA損傷的修復(直接修復

20、,1.光復活（photoreactivation)：修復紫外線損傷產(chǎn)生的胸腺嘧啶二聚體，廣泛存在原核和真核生物體內(nèi)(光裂合酶) 2.“適應性”反應：主要是O6-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（MGMT)修復鳥嘌呤O6位的烷基化損傷,3.切除修復,在E.coli中的切除修復系統(tǒng),損傷：突變的堿基錯配或改變DNA結(jié)構(gòu),剪切：內(nèi)切酶在損傷堿基位點兩側(cè)剪切,切除：外切酶除去切口間的DNA,合成：DNA pol 合成取代DNA,連接酶封閉缺口,DNA損傷修復的一般特點,遺傳多態(tài)性,代謝酶多態(tài)性 修復酶多態(tài)性,1.DNA損傷不僅有外源因素所致，也可以是內(nèi)源因素所致 2.不同類型DNA損傷通過不同DNA修復途

21、徑修復 3.不同DNA損傷修復速度不同 4.DNA損傷修復機制有些是基本的，有些可誘導 5.修復功能存在物種和個體差異 （人的修復能力約比小鼠強10倍,CYP17基因多態(tài)性與乳腺癌關(guān)系的單因素Logistc回歸分析,CYP 17基因編碼的細胞色素P450 17 -羥化酶 ，參與雌激素代謝;A2/A2基因型的婦女與A1/A1基因型者相比，雌激素水平顯著增高,可能影響許多雌激素相關(guān)疾病的發(fā)生與發(fā)展,突 變,外源物質(zhì),終致突變物質(zhì)DNA,解毒,突變模式： DNA損傷-修復-突變,任何DNA損傷，只要修復無誤，突變就不會發(fā)生，如果修復錯誤或未經(jīng)修復，損傷就固定下來，于是發(fā)生突變,DNA損傷修復的一般特

22、點,遺傳多態(tài)性,代謝酶多態(tài)性 修復酶多態(tài)性,1.DNA損傷不僅有外源因素所致，也可以是內(nèi)源因素所致 2.不同類型DNA損傷通過不同DNA修復途徑修復 3.不同DNA損傷修復速度不同 4.DNA損傷修復機制有些是基本的，有些可誘導 5.修復功能存在物種和個體差異,遺傳因素既是化學毒物作用的靶部位，也是決定化學毒物毒作用性質(zhì)和強度的重要因素,第五節(jié) 觀察化學毒物致突變作用的基本方法,致突變試驗的目的,檢測外源化學物的致突變性，鑒定生殖細胞致突變物和體細胞致突變物 預測潛在致癌物 用于環(huán)境遺傳毒物污染的監(jiān)測及評價,觀察項目的選擇,1983年國際環(huán)境致突變物防護委員會（ICPEMC）提出的致突變試驗遺

23、傳學終點,遺傳學終點：指試驗所觀察到的基因突變，染色體畸變以及反映致突變過程中發(fā)生的其他事件 基因突變 染色體畸變 染色體組畸變 DNA原始損傷： DNA完整性的改變 DNA重排或交換,試驗組合原則,一組可靠的試驗系統(tǒng)應包括每一類型的遺傳學終點。 一般認為配套實驗應包括多種進化程度不同的物種，如原核細胞、低等和高等真核細胞。這樣觀察外源化學物在不同系統(tǒng)發(fā)育的多種生物體的致突變性，更具有說服力。 體內(nèi)試驗與體外試驗配合。 體內(nèi)試驗接近實際情況，但由于毒性動力學或其他原因，有時會漏檢致突變物。且在時間、經(jīng)費、人力及物力均比體外試驗花費大。而體外試驗簡便易行，通常檢出率大大優(yōu)于體內(nèi)試驗。它的明顯不足

24、在于生物轉(zhuǎn)化及解毒等方面與體內(nèi)不同,基因突變試驗： 鼠傷寒沙門氏菌回復突變試驗（Ames試驗 ） 、哺乳動物細胞基因突變試驗 染色體畸變試驗： 染色體分析 、微核試驗 DNA損傷試驗 ： 姐妹染色單體交換(SCE)試驗 、程序外DNA合成試驗,化學致突變物的檢測,常用致突變實驗,Ames試驗 （1979年Ames BN建立,檢測受試物誘發(fā)鼠傷寒沙門氏菌組氨酸營養(yǎng)缺陷型突變株(his-)回復突變成野生型(his+)的能力。 試驗菌株都在組氨酸操縱子中有一突變(his-)，不能自行合成組氨酸，在不含組氨酸的最低營養(yǎng)平皿上不能生長，回復突變成野生型后能自行合成組氨酸，可在最低營養(yǎng)平皿上生長成可見菌落

25、。 計數(shù)最低營養(yǎng)平皿上的回變菌落數(shù)來判定受試物是否有致突變性 標準試驗菌株有四種：TA97和TA98檢測移碼突變, TA100檢測鹼基置換突變,TA102對醛、過氧化物及DNA交聯(lián)劑較敏感,用 Ames法檢測誘變劑,結(jié)果判斷,只要一種試驗株得到陽性結(jié)果，即認為受試物是致突變物 只要四種試驗菌株均得到陰性結(jié)果，才能認為受試物可能是非致突變物 不加S9混合液得到陽性結(jié)果直接致突變物 加S9混合液得到陽性結(jié)果間接致突變物,野生型細菌（原養(yǎng)型,突變型細菌（組氨酸缺陷型,正向突變,回復突變,鼠傷寒沙門氏菌,哺乳動物細胞,微核試驗,經(jīng)致突變物作用后，染色體無著絲點斷片或因紡錘體受損傷而丟失的整個染色體在細

26、胞分裂的后期仍留在子細胞的胞質(zhì)內(nèi)，成為一個或幾個規(guī)則的次核，稱為微核。 常用嚙齒類動物骨髓嗜多染紅細胞(PCE)微核試驗。 PCE是紅細胞成熟的一個階段，此時紅細胞的主核已排出，微核容易辯認. 主要檢測DNA斷裂劑和非整倍體誘變劑,微核實驗進展,體外微核：CHL/CHO/V79 外周血微核實驗 雙核細胞法 免疫熒光染色法、熒光原位雜交,單細胞凝膠電泳實驗（SCGE,原理：DNA帶負電 。 在電泳槽中，DNA斷片在電場的作用下，由細胞核中移出，并向陽極泳動，經(jīng)熒光染色后見到細胞核和移出的DNA斷片，形成有如彗星一樣的彗星頭和彗星尾，故稱為彗星實驗（comet test,一條染色體的兩條單體在同一

27、位置發(fā)生同源片段的變換，稱為姐妹染色單體交換。由于交換是對等的，所以染色體的形成沒有改變，但用特殊的培養(yǎng)液和處理方法可以顯示出來,姐妹染色單體交換 Sister-chromatid exchange, SCE,SCE的遺傳學意義還不完全清楚，是否存在自發(fā)的SCE也還有爭議，交換的機理尚未完全闡明，但它顯然與DNA損傷和修復過程有關(guān)。作為一種簡便和敏感的遺傳學指標，它在誘變和腫瘤研究等領域中的應用十分廣泛。例如，目前已知許多環(huán)境誘變劑、職業(yè)有害因素、抗腫瘤藥物、病毒等都可以引起SCE率增加，Bloom綜合征患者和某些腫瘤患者的SCE率也明顯上升,顯性致死試驗Dominant lethal tes

28、t,顯性致死突變指哺乳動物生殖細胞染色體發(fā)生結(jié)構(gòu)和數(shù)目變化，出現(xiàn)的受精卵在著床前死亡和胚胎早期死亡。 它是評價化學毒物對雄性動物的生殖細胞遺傳毒性較好的方法之一,染色體畸變分析chromosome aberration assay,觀察染色體形態(tài)結(jié)構(gòu)和數(shù)目改變，又稱細胞遺傳學試驗。 將觀察細胞停留在細胞分裂中期相，用顯微鏡檢查染色體畸變和染色體分離異常,三、試驗結(jié)果的評定,1.在評定陽性或陰性結(jié)果之前，應首先檢查 實驗的質(zhì)量控制情況。 通過： 盲法觀察； 陰性對照和陽性對照的設立； 資料的統(tǒng)計學分析； 試驗結(jié)果的重現(xiàn)性,2.陰性結(jié)果的判定條件 ： 最高劑量應包括受試物溶解度許可或灌胃 量許可的最大劑量。比較 各劑量的組間差距不應過大，以防漏檢僅在非常狹窄范圍內(nèi)才有突變能力的某些外來化合物,3.陽性結(jié)果的判定條件： 應當具有劑量反應關(guān)系 。 在一個或多個劑量組的觀察值與陰性對照組有顯著性差異。 如果低劑量組或低、中兩劑量組與對照組之間的差異有顯著性，而高劑量組差異無顯著性，則陽性結(jié)果不可信或無意義,4. 無論陽性還是陰性結(jié)果都要求有重現(xiàn)性， 即重復試驗能得到相同結(jié)果,四、致突變試驗中