培養(yǎng)基配方及配制方法

1、培養(yǎng)基配方1 斜面菌種保存培養(yǎng)基 培養(yǎng)基（馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基）稱取200g馬鈴薯，洗凈去皮切碎，加水1000ml煮沸，紗布過(guò)濾， 濾液補(bǔ)足1000ml，再加15g葡萄糖和15-20g瓊脂，充分溶解后趁熱 紗布過(guò)濾，分裝試管，每試管約5-10ml （視試管大小而定），121C滅菌 20 分鐘左右后取出試管擺斜面，冷卻后貯存?zhèn)溆谩?麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基麥芽汁的制備：干麥芽首先進(jìn)行粉碎（不能太粗，也不必太細(xì)。 太粗影響糖化效率， 過(guò)細(xì)影響過(guò)濾速度） ，按麥芽重量的 34 倍加水， 攪拌均勻后，37 C左右浸泡1小時(shí)，然后緩緩加溫至5563C（在升 溫過(guò)程中應(yīng)不斷攪拌使溫度均勻） ，保溫 46 小時(shí)（

2、用摩爾 / 升碘液測(cè) 定為黃色至無(wú)色時(shí)） ，糖化結(jié)束。在糖化過(guò)程中，應(yīng)每小時(shí)攪拌一次。 取過(guò)濾后的清液，加 %瓊脂，分裝試管，每試管約 5-10ml （視試管大 小而定），121C滅菌20分鐘左右后取出試管擺斜面，冷卻后貯存?zhèn)?用。2 基菌落總數(shù)檢測(cè) 平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基將?胰蛋白胨 5.0g 、酵母浸膏 2.5g 、葡萄糖 1.0g 、瓊脂 15.0g 加入蒸餾水1000ml中，煮沸溶解后，調(diào)pH,然后在121 C下滅菌15min, 取出，稍微冷卻后，帶熱倒入培養(yǎng)皿中。3 志賀氏菌檢測(cè)GN 增菌液成分：胰蛋白胨：20g,葡萄糖：1g,甘露醇：2g，檸檬酸鈉：5g, 去氧膽酸鈉0.5g，磷酸二氫

3、鉀4g，磷酸氫二鉀1.5g，氯化鈉5g，蒸 餾水 1000ml。制法：將上述物品加入蒸餾水中，加熱溶解煮沸，調(diào) pH 為，分裝， 在115C高壓滅菌15mi n。HE 瓊脂成分：胨：12g,牛肉膏3g，乳糖12g，蔗糖12g，水楊素2g,膽堿 20g，氯化鈉5g,瓊脂1820g,蒸餾水lOOOmIO, %溴麝香草酚藍(lán)溶 液 16ml, Andrade 指示劑 20ml.，甲液 20ml，乙液 20ml。制法：將上述前七種成分加入 400mI 蒸餾水中作為基礎(chǔ)液， 將瓊脂加 入到 600ml 蒸餾水中加熱溶解，加入甲液乙液到基礎(chǔ)液中，調(diào)pH，再加入指示劑，并與瓊脂液合并，待冷卻至 5055C，傾

4、注澆平板。 注 1 ：此培養(yǎng)基不能高溫滅菌。注 2：甲液的配置：硫代硫酸鈉：34g,檸檬酸鐵鈉：4g,蒸餾水：100ml。注 3：乙液的配置：去氧膽酸鈉：10g,蒸餾水：100ml。注 4： Andrade 指示劑的配置：酸性復(fù)紅：0.5g , 1mol/l的氫氧化鈉溶液：16ml，蒸餾水：100ml。將酸性復(fù)紅溶解于蒸餾水中， 加入氫氧化鈉溶液， 數(shù)小時(shí)后如復(fù)紅褪 色不全，再加氫氧化鈉溶液 12ml。SS 瓊脂3.3.1 基礎(chǔ)培養(yǎng)基：成分：牛肉膏：5g,胨：5g，三號(hào)膽鹽：3.5g，瓊脂：17g，蒸餾水： 1000ml。制法：將牛肉膏蛋白胨，三號(hào)膽鹽加入到 400ml 蒸餾水中，將瓊脂加 入

5、到600ml蒸餾水中，煮沸使其溶解，然后液混合，于 121 C下滅菌 15mi n,保存?zhèn)溆谩?.3.2 完全培養(yǎng)基成分：基礎(chǔ)培養(yǎng)基：1000ml，乳糖：10g,檸檬酸鈉：8.5g，硫代硫 酸鈉： 8.5g , 10%檸檬酸鐵溶液： 10ml, 1%中性紅溶液：, %煌綠溶液：。制法：加熱融化基礎(chǔ)培養(yǎng)基,按比例加入處染料以外的所有成分,攪 拌均勻,調(diào),加入中性紅溶液和煌綠溶液,混合均勻后澆平板。注 1：配制好的培養(yǎng)基宜當(dāng)日使用,或保存于冰箱 48h 內(nèi)使用。注 2：煌綠溶液配好后,應(yīng)在 10 日內(nèi)使用。注3:可以購(gòu)買SS瓊脂的干燥培養(yǎng)基。麥康凱瓊脂成分：蛋白胨：17g,胨：3g，豬膽鹽（牛、羊

6、膽鹽）：5g，氯化鈉：5g，瓊脂：17g,蒸餾水：1000ml，乳糖：10g, %吉晶紫水溶液：10ml，% 中性紅水溶液： 5ml。制法：將蛋白胨、胨、豬膽鹽、氯化鈉溶解于 400ml 蒸餾水中，調(diào)， 將瓊脂加入到600ml蒸餾水中加熱溶解，將兩液混合均勻，于 121 C 下滅菌 15min 備用。臨用時(shí)加熱融化瓊脂，趁熱加入乳糖，等冷卻到 5055C時(shí)，加入結(jié) 晶紫和中性紅水溶液，攪拌均勻后澆平板。注：結(jié)晶紫和中性紅水溶液配好后，須經(jīng)高壓滅菌。伊紅美藍(lán)瓊脂（ EMB）成分：蛋白胨：10g,乳糖：10g，磷酸氫二鉀：2g,瓊脂17g, 2%伊 紅Y溶液：20ml, 9美藍(lán)溶液：10ml，蒸餾

7、水1000ml,。制法：將蛋白胨、磷酸鹽、瓊脂溶解于蒸餾水中，調(diào) pH,于121 C下 滅菌 15min 備用。臨用時(shí)加熱融化瓊脂，并加入乳糖，冷卻至5055C時(shí)加入伊紅和美藍(lán)溶液,混合均勻后澆平板。三精鐵瓊脂成分：蛋白胨：20g,牛肉膏：5g,乳糖：10g,蔗糖：10g，葡萄糖：1g,氯化鈉：5g,六水硫酸亞鐵銨：0.2g，硫代硫酸鈉：0.2g，瓊脂:12g,酚紅：0.025g，蒸餾水：1000ml,制法：將除瓊脂和酚紅以外的各種成分溶解于蒸餾水中，調(diào)pH,然后加入瓊脂,加熱溶解,加入 %酚紅水溶液,搖勻,分裝時(shí)量多一點(diǎn), 于121C下滅菌15mi n,擱高層斜面?zhèn)溆谩Ｆ咸烟前牍腆w發(fā)酵管成分

8、：蛋白胨：1g,牛肉膏：0.3g，氯化鈉：0.5g , %溴甲酚紫酒精溶液：，葡萄糖：1g,瓊脂：0.3g，蒸餾水：100ml,。制法：將蛋白胨，牛肉膏，氯化鈉加入水中，調(diào)pH后，加入瓊脂,煮沸溶解，再加入指示劑和葡萄糖。分裝，于121C下滅菌15mi n.備用。半固體管成分：蛋白胨：1g，牛肉膏：0.3g，氯化鈉：0.5g，瓊脂：0.4g， 蒸餾水： 100ml,。制法：將上述成分溶于水中，加熱煮沸，并調(diào)pH后分裝小試管，121C 高壓滅菌15mi n,直立凝固備用。尿素瓊脂成分：蛋白胨：1g,氯化鈉：5g，葡萄糖1g,磷酸二氫鉀：2g, %酚 紅溶液：3ml，瓊脂：20g,蒸餾水：1000

9、ml, 20%尿素：100ml, 士。制法：將除尿素和瓊脂以外的成分配好，調(diào)pH,加入瓊脂后加熱使其溶化并分裝小瓶，121C高壓滅菌15min,冷卻至5055C后，加入 經(jīng)過(guò)濾滅菌的尿素溶液，最終尿素濃度為 2%最終的pH應(yīng)為士。 分裝于滅菌試管內(nèi)，擱斜面?zhèn)溆?。西蒙氏檸檬酸鹽瓊脂成分：氯化鈉：5g，七水硫酸鎂：0.2g，磷酸二氫銨：1g,磷酸氫二 甲：1g,檸檬酸鈉：5g,瓊脂：20g,蒸餾水：1000ml, %溴麝香草酚 藍(lán)溶液： 40ml,。制法：先將鹽類溶解于水中，調(diào) pH,再加瓊脂，加熱溶化，然后加 入指示劑，混合均勻后分裝試管，121C下滅菌15mi n,擱成斜面。實(shí)驗(yàn)方法：挑取少量

10、瓊脂培養(yǎng)物接種，于 36 C 士 1C培養(yǎng)4天，每天 觀察結(jié)果,陽(yáng)性者斜面上有菌落生長(zhǎng)。培養(yǎng)基由綠色轉(zhuǎn)為藍(lán)色。氰化鉀（KCN培養(yǎng)基成分：蛋白胨：10g,氯化鈉：5g，磷酸二氫鉀：0.225g，磷酸氫二 鈉： 5.64g ，蒸餾水： 1000ml， %氰化鉀溶液： 20ml，。制法：將除氰化鉀以外的成分配好分裝，121 C滅菌15mi n,放在冰 箱內(nèi)使其充分冷卻，每 100ml 培養(yǎng)基加入 %氰化鉀溶液（最后濃度為 1:10000），分裝于12mM 100mm滅菌試管，每管約4ml，立刻用橡皮 塞塞緊，放在4C冰箱內(nèi)，至少可保存兩個(gè)月，同時(shí)將不加氰化鉀的 培養(yǎng)基作為對(duì)照培養(yǎng)基，分裝備用。試驗(yàn)方

11、法：將瓊脂培養(yǎng)物接種于蛋白胨水內(nèi)成作為稀釋菌液，挑取 1 環(huán)接種于氰化鉀培養(yǎng)基，另外挑取 1環(huán)接種于對(duì)照培養(yǎng)基，在 36C 士 1C下培養(yǎng)12天，觀察結(jié)果，如有細(xì)菌生長(zhǎng)，則為陽(yáng)性，經(jīng) 2天 后不生長(zhǎng)則為陰性。注：氰化鉀是劇毒物質(zhì)，使用時(shí)應(yīng)小心，切勿沾染，以免中毒。夏天 分裝培養(yǎng)基應(yīng)在冰箱內(nèi)進(jìn)行， 實(shí)驗(yàn)失敗的主要原因是封口不嚴(yán)， 氰化 鉀逐漸分解，變成氫氰酸氣體逸出，以致藥物濃度降低，細(xì)菌生長(zhǎng)， 造成假陽(yáng)性現(xiàn)象。氨基酸脫羧酶實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基成分：蛋白胨：5g，酵母浸膏：3g，葡萄糖：1g，蒸餾水：1000ml, % 溴甲酚紫乙醇溶液：1ml, L-氨基酸或DL-氨基酸：0.5g或1g/100ml ,。

12、制法：除氨基酸以外的所有成分加熱溶解后，分裝每瓶 100ml，分別 加入各種氨基酸：賴氨酸、精氨酸和鳥(niǎo)氨酸。L-氨基酸按加入，DL- 氨基酸按 1%加入。再調(diào),對(duì)照培養(yǎng)基不加氨基酸。分裝于滅菌的小試管內(nèi)，每管，上面滴加一層液體石蠟。115C高壓滅菌10min實(shí)驗(yàn)方法：從瓊脂斜面上挑取培養(yǎng)物接種，于36 C士 1C下培養(yǎng)1824h,觀察結(jié)果，氨基酸脫羧酶陽(yáng)性者由于產(chǎn)堿，培養(yǎng)基應(yīng)呈紫色。 陰性者因?yàn)閴A性物質(zhì)產(chǎn)生， 但因葡萄糖產(chǎn)酸而是培養(yǎng)基變成黃色， 對(duì) 照管應(yīng)為黃色。蛋白胨水（靛基質(zhì)試驗(yàn)用）成分：蛋白胨或胰蛋白胨：20g,氯化鈉：5g,蒸餾水：1000ml, 制法：將上述成飛混合均勻，分裝小管，1

13、21C滅菌15mi n。 靛基質(zhì)試劑：柯凡克試劑： 將 5g 對(duì)二氨基甲醛溶于 75ml 戊醇中, 然后慢慢加入濃 鹽酸 25ml。歐-波試劑：將1g對(duì)二氨基苯甲醛溶于90ml95%勺乙醇內(nèi)，然后慢慢 加入濃鹽酸 20ml。實(shí)驗(yàn)方法：挑取少量接種物接種，在 36 C士 1C下培養(yǎng)12天，必要 時(shí)可培養(yǎng) 45 天,加入柯凡克試劑約,輕搖試管,陽(yáng)性者試劑層呈深 紅色,或加入歐 - 波試劑,沿管壁流下,覆蓋于培養(yǎng)液表面,陽(yáng)性者 接觸面上呈玫瑰紅色。注：蛋白胨應(yīng)含有豐富勺色氨酸, 每批蛋白胨買來(lái)后應(yīng)用已知菌種實(shí) 驗(yàn)。糖發(fā)酵管成分：牛肉膏：5g，蛋白胨：10g,氯化鈉：3g，十二水磷酸氫二鈉：2g, %溴麝香草酚藍(lán)溶液：12ml，蒸餾水：1000ml,葡萄糖發(fā)酵管按上述成分配好后，按 %加入葡萄糖，分裝于有一個(gè)倒置小管的小試管內(nèi)，121C滅菌15mi n。其他各種糖發(fā)酵管可按上述成分配好后，分裝每瓶 100ml, 121 C滅 菌15min,另將各種糖類配好10%溶液，一同滅菌，將5ml糖溶液加 入到 100ml 液體培養(yǎng)基中，以無(wú)菌操作分裝小試管。注：蔗糖不純,加熱后會(huì)自行水解者,應(yīng)采用過(guò)濾法除菌。實(shí)驗(yàn)方法：從瓊脂斜面上挑取小量培