生化干擾試驗(yàn) 課件

1、實(shí)驗(yàn)十實(shí)驗(yàn)十 VC對酶法測定（CHOD-PAP法） 膽固醇 的的干擾干擾 臨床生化教研室：臨床生化教研室： 雷雷 燕燕 鄒家瓊鄒家瓊 干擾試驗(yàn)干擾試驗(yàn) l是測定實(shí)驗(yàn)方法特異性誤差和干擾引起是測定實(shí)驗(yàn)方法特異性誤差和干擾引起 的誤差的誤差 l首先確定被試物質(zhì)是否引起誤差，再探首先確定被試物質(zhì)是否引起誤差，再探 討誤差的來源是方法特異性差還是干擾討誤差的來源是方法特異性差還是干擾 l是衡量方法準(zhǔn)確度的方法學(xué)評價試驗(yàn)之是衡量方法準(zhǔn)確度的方法學(xué)評價試驗(yàn)之 一，在加入一定濃度干擾物的條件下一，在加入一定濃度干擾物的條件下,形形 成恒定誤差成恒定誤差,干擾物濃度不同干擾物濃度不同,誤差大小不誤差大小不 同

2、同. 目的要求目的要求 掌握：干擾試驗(yàn)的原理和用途掌握：干擾試驗(yàn)的原理和用途 熟悉：熟悉：1.干擾試驗(yàn)的設(shè)計(jì)與具體操作干擾試驗(yàn)的設(shè)計(jì)與具體操作 2.干擾值和干擾率的計(jì)算干擾值和干擾率的計(jì)算 了解：注意事項(xiàng)和消除干擾的常用方法了解：注意事項(xiàng)和消除干擾的常用方法 檢測原理檢測原理 l干擾試驗(yàn)對干擾物不作分析，只測定它對方法的干擾試驗(yàn)對干擾物不作分析，只測定它對方法的 干擾作用干擾作用，以評價分析方法的，以評價分析方法的準(zhǔn)確性準(zhǔn)確性。 l干擾物產(chǎn)生的誤差屬干擾物產(chǎn)生的誤差屬恒定系統(tǒng)誤差恒定系統(tǒng)誤差，它的大小隨，它的大小隨 干擾物的濃度而異。干擾物的濃度而異。 l常見干擾物有：血常見干擾物有：血紅紅蛋

3、白、甘油三酯、蛋白、甘油三酯、膽紅素、膽紅素、 肌酐、防腐劑、抗凝劑、藥物如肌酐、防腐劑、抗凝劑、藥物如 VC等。等。 本實(shí)驗(yàn)選用本實(shí)驗(yàn)選用VC做做酶法測定（酶法測定（CHOD-PAP 法）法）的干擾試驗(yàn)，因的干擾試驗(yàn)，因VC可與可與CHOD催化生成催化生成 的的H2O2發(fā)生反應(yīng)，使第二步發(fā)生反應(yīng)，使第二步POD的偶聯(lián)反的偶聯(lián)反 應(yīng)顯色強(qiáng)度減弱，產(chǎn)生應(yīng)顯色強(qiáng)度減弱，產(chǎn)生負(fù)負(fù)的測定誤差。的測定誤差。 檢測原理檢測原理 膽固醇酯膽固醇酯+H2O CEH膽固醇膽固醇+脂肪酸脂肪酸 膽固醇膽固醇 +O2 COD 4膽甾烯酮膽甾烯酮+H2O2 2 H2O2 +4-AAP +酚酚 POD 醌亞胺醌亞胺+4

4、H2O 特異性特異性 膽紅素、維生素膽紅素、維生素C、尿、尿 酸、酸、Hb負(fù)干擾負(fù)干擾 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 標(biāo)本標(biāo)本 ： 肝素抗凝血漿肝素抗凝血漿 校準(zhǔn)品：校準(zhǔn)品：膽固醇膽固醇標(biāo)準(zhǔn)液標(biāo)準(zhǔn)液 5.17 mmol/L 干擾物干擾物： VC溶液溶液 1.1.濃度濃度50.050.0m mg g/ /dldl 2.2.濃度濃度100.0100.0m mg g/ /dldl 3.3.濃度濃度200.0200.0m mg g/ /dldl 儀器儀器 ： 半自動生化分析儀半自動生化分析儀( (型號型號) ) 【器材器材】 半自半自動生化分析儀、試管、吸管、加樣器動生化分析儀、試管、吸管、加樣器 【試劑試劑】

5、1.試劑組成試劑組成 R1： 酚酚 12mmolL 膽酸鈉膽酸鈉 1.20mmolL 抗壞血酸氧化酶抗壞血酸氧化酶 1.0KUL POD 12.0KUL R2： CEH 1.0KUL COD 0.5KUL 4-AAP 1.20mmolL 樣品制備樣品制備 基礎(chǔ)樣品：基礎(chǔ)樣品： 血漿血漿450ul+ H2O50ul 干擾樣品干擾樣品1：血漿血漿450ul+濃度濃度1VC50ul 干擾樣品干擾樣品2：血漿血漿450ul+濃度濃度2VC50ul 干擾樣品干擾樣品3：血漿血漿450ul+濃度濃度3VC50ul 實(shí)驗(yàn)操作實(shí)驗(yàn)操作 n取取6支試管分別標(biāo)明空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、支試管分別標(biāo)明空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、 基礎(chǔ)

6、基礎(chǔ) 樣品、干擾樣品樣品、干擾樣品1、干擾樣品、干擾樣品2、干、干 擾樣品擾樣品3 n分別吸取相應(yīng)的分別吸取相應(yīng)的樣本樣本各各10ul n向各管加工作液向各管加工作液1.0ml，混勻混勻 n置置37恒溫恒溫10min n505nm波長測定各管的吸光度波長測定各管的吸光度 計(jì)算計(jì)算 干擾率干擾率（）（）( (干擾值基礎(chǔ)值干擾值基礎(chǔ)值) )100100 干擾值干擾值干擾管測定值干擾管測定值 干擾物加后濃度干擾物加后濃度 V干干 V總總 干擾物加前濃干擾物加前濃度度 基礎(chǔ)管測定值基礎(chǔ)管測定值 樣樣 品品 膽固醇值膽固醇值 （mmol/L) 加后維加后維C值值 （mg/dl） 干擾值干擾值 （mmol

7、/L） 干擾率干擾率 （） 基礎(chǔ)樣品基礎(chǔ)樣品 干擾樣品干擾樣品1 干擾樣品干擾樣品2 干擾樣品干擾樣品3 干擾試驗(yàn)的數(shù)據(jù)處理干擾試驗(yàn)的數(shù)據(jù)處理 結(jié)果判斷結(jié)果判斷 當(dāng)干擾物引起的當(dāng)干擾物引起的偏差偏差1/4 總允許誤差總允許誤差 （TEA）時，則不會影響測定結(jié)果的臨床應(yīng)用）時，則不會影響測定結(jié)果的臨床應(yīng)用 價值，可近似地認(rèn)為當(dāng)干擾物濃度低于該濃度價值，可近似地認(rèn)為當(dāng)干擾物濃度低于該濃度 時不影響測定結(jié)果。時不影響測定結(jié)果。 注明注明:TC的的TEA：10（參照美國參照美國CLI88CLI88標(biāo)準(zhǔn)）標(biāo)準(zhǔn)） 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) 加入量要加入量要準(zhǔn)確準(zhǔn)確。 加入物體積應(yīng)只加入物體積應(yīng)只占很小占很小的比例

8、（的比例（小于小于1/101/10）。）。 可疑干擾物濃度，加入的干擾物的濃度明顯干擾可疑干擾物濃度，加入的干擾物的濃度明顯干擾 常見濃度上限，尤其是達(dá)到病理標(biāo)本最高值。常見濃度上限，尤其是達(dá)到病理標(biāo)本最高值。 分析物溶液可使用標(biāo)準(zhǔn)液，最好采用病人標(biāo)本。分析物溶液可使用標(biāo)準(zhǔn)液，最好采用病人標(biāo)本。 增加測定次數(shù)，減少隨機(jī)誤差。增加測定次數(shù)，減少隨機(jī)誤差。 消除干擾的常用方法消除干擾的常用方法 l設(shè)立設(shè)立試劑空白試劑空白和標(biāo)本空白和標(biāo)本空白 l用物理或化學(xué)方法，除去干擾物用物理或化學(xué)方法，除去干擾物 l雙波長或多波長雙波長或多波長檢測排除干擾檢測排除干擾 l誤差較大又無法消除，則需對方法進(jìn)行誤差較大又無法