保健食品中總蒽醌的測定(精).doc

1、保健食品中總蒽醌的測定1 儀器及試劑1.1 儀器(1 分析天平 (感量 0.00001g ;(2 分光光度計(jì) (751 型 ;(3 水浴鍋 ;(4 刻度吸管。1.2 試劑1.2.1 對照品 :1, 8-二羥基蒽醌 (中國生物制品鑒定所;1.2.2 5%氫氧化鈉 2%氫氧化銨混合堿液 :10%氫氧化鈉溶液與4%氫氧化銨溶液等量混合 ;1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)品溶液 :精密城區(qū) 25mg 1, 8 二羥基蒽醌對照品 ,置 200ml 容量瓶中 , 用乙醚溶解并稀釋至刻 度,搖勻 ,備用 ;1.2.4 氯仿 ;1.2.5 乙醚 ;1.2.6 5N 硫酸 ;1.2.7 蒸餾水。2 測定步驟中2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的

2、繪制 :精密量取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液 1ml 、 2ml 、 3ml 、 4ml 、 5ml , 分別至于 25ml 容量瓶中 ,在水浴 上揮凈乙醚 ,放涼 ,分別加 5%氫氧化鈉 2%氫氧化銨混合堿液至刻度 ,搖勻 ,以 5%氫氧化鈉 2%氫氧化 銨混合堿液為空白對照,在490nm 下 ,以 1cm 比色杯測定吸光度 ,用回歸法求標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。2.2 供試品溶液的制備及總蒽醌含量的測定 :取本品 50 粒 , 傾出內(nèi)容物 , 精密稱定供試品內(nèi)容物 3g , 于 250ml 燒瓶中 ,加 5N 硫酸 45ml ,直火加熱水解 2h ,加入氯仿 40ml ,萃取 3 次(40ml , 30ml , 30

3、ml ,萃取液用 蒸餾水洗滌 2 次 (20ml , 20ml ,再用 5% 氫氧化鈉 2%氫氧化銨混合堿液振搖萃取 4 次 (30ml , 20 ml , 20ml , 20ml ,合并萃取液 ,用氯仿洗滌數(shù)次至氯仿層無色 ,棄去氯仿層 ,用 5%氫氧化鈉 2%氫氧化銨混合堿液定容至 100ml ,搖勻 ,以 5%氫氧化鈉 2%氫氧化銨混合堿液為空白對照 ,在 490nm 下 ,以 1cm 比 色杯測定吸光度 ,由線性方程計(jì)算即得供試品溶液的濃度。2.3 結(jié)果計(jì)算 :C1( g/ml 5ml 100mlC2 = ( g/100mgm 10C=C21100(g/Kg式中C :1kg 分析樣品中

4、含蒽醌量 (gC2:100mg 分析樣品中含蒽醌量 ( gC1:由回歸方程計(jì)算所得5ml 容量瓶中蒽醌的濃度 ( g/mlM : 所用分析樣品的重量 (g蒽醌類化合物按結(jié)構(gòu)的不同可分成羥基蒽醌類、氧化蒽酚及蒽酚類、二蒽酮類。目前其提取方法主要采用溶劑提取法 ,如浸漬、滲漉、連續(xù)回流提取等方式,所用的溶劑主要有乙醇、甲醇、氯仿、乙醚、苯、石油醚、吡啶、丙酮、硫酸溶液、鹽酸溶液及氫氧化鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉、氫氧化銨等溶液。其含量測定方法有重 量法、熒光法、比色法、極譜法、薄層掃描法、高效液相色譜法等 ,而單味植物藥或其復(fù)方制劑中的蒽醌化 合物含量 ,一般以大黃素或大黃酸、 1, 8-二羥基蒽醌為標(biāo)

5、準(zhǔn)測定游離蒽醌或總蒽醌 ,結(jié)合蒽醌的量等于總蒽 醌減去游離蒽醌。1 比色法根據(jù)蒽醌類及其苷大多數(shù)是黃色或橙紅色的 , 羥基蒽醌能溶于堿溶液中而顯紅或紫紅色 ; 蒽酚和二蒽醌與 堿液不顯紅色 ,只能呈黃色 ,需經(jīng)氧化成羥基蒽醌后才與堿作用顯紅色 ;羥基蒽醌類因結(jié)構(gòu)不同與醋酸鎂的甲醇溶液反應(yīng)可顯橙、紅、藍(lán)、紫等色的性質(zhì)而比色測定。1.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 :取經(jīng)五氧化二磷干燥 24 h 的大黃素 (或大黃酸、 1, 8-二羥基蒽醌 對照品適量用堿 液 (1 mol/L 氫氧化鈉溶液或其與 2%氫氧化銨溶液的混合溶液 或 0.5%1%醋酸鎂甲醇溶液定溶 ,在 500 550 nm波長處掃描 , 在最大

6、吸收波長處測定吸收度 , 以吸收度對濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 , 線性范圍 424 g/ml。 1.2 游離蒽醌的測定 :取藥物細(xì)粉或其制劑粉末適量 (約相當(dāng)于游離蒽醌 1.5 mg 加乙醚 (或氯仿 溶解或用 索氏提取器回流提取至提取液無色。將乙醚揮干 ,殘?jiān)眉状既芙?,加醋酸鎂甲醇溶液至定容 ;或?qū)⒁颐烟?取液移入分液漏斗中 ,用堿液提取并定容 1, 比色測定 , 依標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算含量。1.3 總蒽醌的測定1.3.1 先水解后提取 :取供試品適量 (約相當(dāng)于總蒽醌 1.5 mg ,用酸液 (17.5 mol/L 硫酸溶液或 1.56 mol/L 鹽酸溶液 2030 ml2, 3, 4,水浴回流 1

7、2 h,以使結(jié)合態(tài)的蒽醌苷水解 ,使蒽醌游離 ,再用乙醚 (或氯仿 萃取 ,并將過濾的藥物殘?jiān)盀V紙經(jīng)50干燥后用乙醚回流提取 ,待索氏提取器內(nèi)提取液無色 ,合 并乙醚液 ,照游離蒽醌測定法測定。對含還原型蒽酮苷 (如番瀉苷 的樣品 ,根據(jù)其可被三氯化鐵氧化 ,酸水解成氧化型蒽醌苷元這一原理 ,稱 取供試品適量 , 加水 30 ml 超聲處理 1530 min(提高溶解、提取效率 , 大大縮短溶解、提取時(shí)間 , 加 10.5%三氯化鐵溶液 20 ml,回流 2060min3, 再加鹽酸 13 ml 繼續(xù)回流 30 min,放冷 ,再進(jìn)行萃取與測定。因蒽醌類與堿液顯色后 , 過氧化氫不能使其褪色 , 而其它有色物質(zhì)可被其氧化褪色的原理 , 對含有干擾測 定成分的堿萃取液 2, 加 1%過氧化氫溶液少量 ,在沸水浴中加熱 4 min 氧化 , 冷卻 ,定容 ,比色測定。 1.3.2 先提取后水解 :取供試品適量 , 加甲醇 (或乙醇、 氯仿等 , 對含蒽醌的浸膏制劑 , 超