細(xì)菌室消化道感染病原體檢驗(yàn)操作規(guī)程.doc

1、細(xì)菌室消化道感染病原體檢驗(yàn)操作規(guī)程1、糞便標(biāo)本中常見病原菌革蘭陽性菌金黃色葡萄球菌革蘭陰性菌傷寒及其它沙門菌結(jié)核分支桿菌難辨梭菌志賀菌屬致病大腸埃希菌白色念珠菌EPEC、EIEC、EHEC)(ETEC 、弧菌屬菌種氣單胞、鄰單胞菌種小腸結(jié)腸炎耶爾森菌彎曲菌2、標(biāo)本采集2.1、自然排便采集法：自然排便后，挑取膿血、粘膜部分的糞便 23g，液體糞便取絮狀物置于大便培養(yǎng)管或增菌液中送檢。2.2、直腸肛管法：用大便培養(yǎng)用的肛管直接插入肛門成人 4 5cm，幼兒 23cm，輕輕在直腸內(nèi)旋轉(zhuǎn)數(shù)次，目的是使直腸表面粘液能通過肛管孔進(jìn)入肛管內(nèi)。然后拔出放入大便培養(yǎng)管中送檢。3、檢驗(yàn)步驟3.1、涂片檢查糞便標(biāo)本

2、因各種正常菌群含量甚多而一般不作直接涂片找致病菌，只有懷疑霍亂弧菌及菌群失調(diào)所致腹瀉時(shí)，才作直接涂片檢查。3.2、各項(xiàng)的涂片檢驗(yàn)均按染色方法進(jìn)行，但大便檢查霍亂弧菌的處理程序：3.2.1、染色檢查：將米泔樣的標(biāo)本涂 2 張片用乙醇固定后染色，觀察弧菌有無呈魚群狀排列。3.2.2 懸滴檢查：取患者糞便制成懸滴涂片，霍亂弧菌古典型和 EL-Tor 型均呈現(xiàn)極活潑的穿梭狀運(yùn)動。3.2.3 制動檢驗(yàn)：運(yùn)動活潑的弧菌涂片加人霍亂弧菌診斷血清后，在顯微鏡下觀察，若原運(yùn)動活潑的現(xiàn)象停止，為制動試驗(yàn)陽性。3.3、大便標(biāo)本的培養(yǎng)目的是培養(yǎng)致病菌或追蹤病人有否菌群失調(diào)現(xiàn)象，無特殊要求作一般致病菌培養(yǎng)的標(biāo)本接種麥康

3、凱、 SS 平板各一個(gè)。3.4、菌群失調(diào)的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)：選用多種培養(yǎng)基包括 SS、麥康凱、血平板、高鹽甘露醇鹽瓊脂平板、Campy-BA 血瓊脂平板和沙氏瓊脂等，目的是使更多的菌群得到生長，以利于檢查腸道的細(xì)菌情況。3.5、霍亂弧菌的培養(yǎng)：直接取患者米泔樣糞便0.5ml，接種于堿性蛋白胨水增菌液和 4 號平板， 35 培養(yǎng) 68h，再轉(zhuǎn)種一只 4 號平板。35 培養(yǎng) 1824h后形成較大、菌落中間為灰黑色、有光澤、隆起、濕潤的菌落，如潑水狀。挑取可疑菌落510 個(gè)與霍亂多價(jià)“ O”血清作凝集試驗(yàn)。診斷血清作玻片凝集試驗(yàn)，如為陽性，則立即報(bào)告，并將可疑菌送疾病控制中心確認(rèn)。3.6、真菌培養(yǎng)：真菌性腹瀉多繼發(fā)于抗生素治療后，常見的真菌腹瀉多由白色假絲酵母菌引起。將標(biāo)本接種于沙氏平板及血平板上，置27和 35培養(yǎng)1824h，根據(jù)形態(tài)染色、 菌落特征， 做真菌鑒定和藥敏試驗(yàn)。4、檢驗(yàn)程序便或肛拭子增菌培養(yǎng)分離培養(yǎng)涂片檢查沙門氏菌、志賀氏菌革蘭氏染色觀察動力霍亂弧菌SS、麥康凱平板沙氏平板、血平板等菌落觀察涂片檢查鑒定、藥敏試驗(yàn)報(bào)告5、結(jié)果報(bào)告糞便培養(yǎng)的報(bào)告方式應(yīng)以分離目的菌種的結(jié)果而定，如：目前常規(guī)以 SS 培養(yǎng)基分離糞便中的致病菌，陽性者