植物組織中維生素C含量測(cè)定

1、-作者xxxx-日期xxxx植物組織中維生素C含量測(cè)定【精品文檔】植物組織中維生素C含量測(cè)定 維生素C(又稱(chēng)抗壞血酸，Vc)是植物材料中普遍存在的一類(lèi)酸性、還原性物質(zhì)，也是維持人類(lèi)健康所必需的維生素類(lèi)物質(zhì)之一。維生素C含量的多少與果蔬的品質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、抗病及抗衰老能力直接相關(guān)。所以，研究中經(jīng)常需要測(cè)定維生素C的含量。維生素C可分為還原型和脫氫型兩種。根據(jù)其具有還原性的性質(zhì)，有多種方法可以測(cè)定維生素C含量。此處介紹三種方法：2，6二氯靛酚滴定法、熒光比色法和鉬藍(lán)比色法。前者用于測(cè)定還原型維生素C，后兩種用于測(cè)定總維生素C含量。三、鉬藍(lán)比色法【原理】鉬酸銨在SO42-和PO43-存在下與維生素C反

2、應(yīng)，生成藍(lán)色絡(luò)合物(鉬藍(lán))，在760 nm處有最大吸收。當(dāng)維生素C濃度在240gmL-1范圍內(nèi)，符合朗伯-比爾定律。新鮮植物樣品中的還原糖及常見(jiàn)的還原物質(zhì)不干擾測(cè)定，而且反應(yīng)迅速，專(zhuān)一性好?！緝x器設(shè)備】 1分光光度計(jì)。 2勻漿器或玻璃研缽。 325 mL具塞刻度試管。4100 mL容量瓶。 5刻度吸液管。 6離心管。 7離心機(jī)。【試劑】15鉬酸銨溶液：稱(chēng)取5 g鉬酸銨溶于蒸餾水中，并定容至100 mL。2草酸EDTA溶液：稱(chēng)取630 g草酸和075 g EDTANa2溶于蒸餾水中并定容至l 000 mL。35(體積分?jǐn)?shù))H2SO4。4偏磷酸一乙酸溶液：取棒狀偏磷酸3 g加20冰醋酸48 mL，

3、溶解后加蒸餾水稀釋至100 mL(必要時(shí)過(guò)濾)，在冰箱中可保存3 d。5維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液：精確稱(chēng)取分析純維生素C 100 mg，置100 mL容量瓶中，加適量草酸EDTA溶液溶解后，再用該溶液定容到100 mL刻度，即成1 mgmL-l之標(biāo)準(zhǔn)液，此溶液隨配隨用(如果維生素C純度不夠，應(yīng)進(jìn)行標(biāo)定)?！静牧稀扛鞣N新鮮植物組織或器官?！痉椒ú襟E】1制作標(biāo)準(zhǔn)曲線：取7支25 mL具塞刻度試管，按下表加入各種試劑：試劑試管號(hào)123456維生素C標(biāo)準(zhǔn)液mL0草酸EDTAmL偏磷酸一乙酸mL1：19 H2SO4mL5鉬酸銨mL維生素C含量mg020406080100加完試劑搖勻后，置30水浴中保溫15 mi

4、n，用蒸餾水稀釋到25 mL刻度，將溶液混勻，用1號(hào)空白管調(diào)零，在760 nm波長(zhǎng)下比色，記錄吸光度，以標(biāo)準(zhǔn)維生素C含量為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。2樣品提取與測(cè)定：稱(chēng)取小麥葉片或其他植物組織25 g(根據(jù)維生素C含量而定)，加5 mL草酸EDTA溶液研磨成勻漿，并仔細(xì)轉(zhuǎn)入25 mL容量瓶中，再用提取介質(zhì)沖洗研缽及研錘23次，沖洗液合并于25 mL容量瓶中。取一部分勻漿液經(jīng)3 000 r/min離心10 min后，取1 mL上清液與標(biāo)準(zhǔn)管同法測(cè)定。若樣品顯色液中出現(xiàn)沉淀時(shí)，可過(guò)濾后進(jìn)行比色，不影響測(cè)定結(jié)果。3結(jié)果計(jì)算植物組織中維生素C含量(mg100 g-1FW)= 式中，C：標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得樣品中維生素含量(mg)；Vt：樣品提取液總體積(mL)；Vs：測(cè)定時(shí)用樣品提取液體積(mL)；FW：植物組織鮮重(g)?！靖阶ⅰ繙囟葘?duì)顯色有影響，顏色強(qiáng)度隨時(shí)間的延長(zhǎng)而加深，因此顯色溫度和加入顯色劑后的時(shí)間要求一致?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1宋治軍，紀(jì)重光現(xiàn)代分析儀器與測(cè)定方法西安：西北大學(xué)出版社，19952黃偉坤等食品檢驗(yàn)與分析北京：中國(guó)輕工業(yè)出版社，19933西北農(nóng)業(yè)大學(xué)植物