《蛋白質(zhì)氨基酸》ppt課件

1、第第4 4章章 蛋白質(zhì)、氨基酸含量的檢測(cè)蛋白質(zhì)、氨基酸含量的檢測(cè)主要內(nèi)容主要內(nèi)容 第一節(jié)第一節(jié) 蛋白質(zhì)的定量測(cè)定方法蛋白質(zhì)的定量測(cè)定方法 第二節(jié)第二節(jié) 氨基氮含量的檢測(cè)方法氨基氮含量的檢測(cè)方法 第三節(jié)第三節(jié) 多種氨基酸的分別和測(cè)定多種氨基酸的分別和測(cè)定 第四節(jié)第四節(jié) 味精純度的測(cè)定方法味精純度的測(cè)定方法第一節(jié)第一節(jié) 蛋白質(zhì)含量的測(cè)定蛋白質(zhì)含量的測(cè)定一、蛋白質(zhì)概略一、蛋白質(zhì)概略 蛋白質(zhì)是含氮的有機(jī)化合物，分子量很大。蛋白質(zhì)是含氮的有機(jī)化合物，分子量很大。主要由主要由C C、H H、O O、N N、S S五種元素組成。某些蛋白質(zhì)五種元素組成。某些蛋白質(zhì)中還含有微量的中還含有微量的 P P、CuCu

2、、FeFe、I I 等。等。 樣品中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定，主要也是最常用樣品中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定，主要也是最常用的用凱氏定氮法測(cè)定總氮量，然后乘一個(gè)蛋白質(zhì)的用凱氏定氮法測(cè)定總氮量，然后乘一個(gè)蛋白質(zhì)換算系數(shù)。這里也包括非蛋白的氮，所以只能稱為換算系數(shù)。這里也包括非蛋白的氮，所以只能稱為粗蛋白的含量。粗蛋白的含量。詳細(xì)測(cè)定方法詳細(xì)測(cè)定方法一凱氏定氮法一凱氏定氮法最常用的，國(guó)內(nèi)外運(yùn)用普遍最常用的，國(guó)內(nèi)外運(yùn)用普遍 GB/T5009.52021 GB/T5009.52021 第一法。第一法。二分光光度法二分光光度法GB/T5009.52021 GB/T5009.52021 第二法第二法三電位滴定法三電位滴定法

3、四雙縮脲反響四雙縮脲反響五杜馬斯熄滅法五杜馬斯熄滅法(SN/T2115-2021)(SN/T2115-2021) 進(jìn)出口食品和飼料中總氮及粗蛋白的檢測(cè)方法進(jìn)出口食品和飼料中總氮及粗蛋白的檢測(cè)方法杜馬斯熄滅法杜馬斯熄滅法 二二 、 蛋白質(zhì)含量的定量測(cè)定蛋白質(zhì)含量的定量測(cè)定 一些蛋白質(zhì)的含氮量普通為一些蛋白質(zhì)的含氮量普通為 15%-17.6%， 有的上下浮動(dòng)有的上下浮動(dòng) 可以測(cè)出總氮可以測(cè)出總氮 N一凱氏定氮法一凱氏定氮法 丹麥化學(xué)家丹麥化學(xué)家Johan Kieldahl Johan Kieldahl 克達(dá)爾克達(dá)爾(1849-1900)(1849-1900)研制了今天人所共知的分析研制了今天人所共

4、知的分析有機(jī)物中氮含量的凱氏法。于有機(jī)物中氮含量的凱氏法。于18831883年提出，年提出，現(xiàn)開展為常量、微量、自動(dòng)定氮儀法及改現(xiàn)開展為常量、微量、自動(dòng)定氮儀法及改良凱氏法。只引見(jiàn)前三種。良凱氏法。只引見(jiàn)前三種。16%N= N= N6.25 = 6.25 = 蛋白質(zhì)含量蛋白質(zhì)含量 丹麥分析化學(xué)家。丹麥分析化學(xué)家。18491849年生于亞格普里斯年生于亞格普里斯,1900,1900年年7 7月月1818日卒于齊斯維勒萊厄。日卒于齊斯維勒萊厄。 1873 1873年在哥本哈根大學(xué)畢業(yè)年在哥本哈根大學(xué)畢業(yè)后后, ,做過(guò)農(nóng)業(yè)中學(xué)的教師。做過(guò)農(nóng)業(yè)中學(xué)的教師。18751875年任卡爾斯堡研討所化年任卡爾斯

5、堡研討所化學(xué)部擔(dān)任人學(xué)部擔(dān)任人,1876,1876年任所長(zhǎng)年任所長(zhǎng), ,在研討所任務(wù)近在研討所任務(wù)近2020年。他年。他是丹麥皇家科學(xué)院院士是丹麥皇家科學(xué)院院士,1884,1884年哥本哈根大學(xué)授予他聲年哥本哈根大學(xué)授予他聲譽(yù)博士學(xué)位。他主要研討發(fā)酵化學(xué)。譽(yù)博士學(xué)位。他主要研討發(fā)酵化學(xué)。18831883年發(fā)明測(cè)定年發(fā)明測(cè)定有機(jī)化合物中氮含量的方法有機(jī)化合物中氮含量的方法: :他將一定質(zhì)量的試樣與硫他將一定質(zhì)量的試樣與硫酸作用酸作用, ,使試樣中的氮全部轉(zhuǎn)變?yōu)榱蛩徜@使試樣中的氮全部轉(zhuǎn)變?yōu)榱蛩徜@, ,然后往硫酸然后往硫酸銨溶液中參與堿銨溶液中參與堿, ,再將生成的氨蒸餾到一定體積的規(guī)范再將生成的氨

6、蒸餾到一定體積的規(guī)范酸溶液中酸溶液中, ,再滴定過(guò)量的酸再滴定過(guò)量的酸, ,就能測(cè)出試樣的含氮量。就能測(cè)出試樣的含氮量。此法普遍用于化學(xué)和醫(yī)學(xué)研討及農(nóng)業(yè)消費(fèi)和藥物工業(yè)。此法普遍用于化學(xué)和醫(yī)學(xué)研討及農(nóng)業(yè)消費(fèi)和藥物工業(yè)。后人稱此法為克氏定氮法。此法所用的儀器是一種梨后人稱此法為克氏定氮法。此法所用的儀器是一種梨形長(zhǎng)頸燒瓶形長(zhǎng)頸燒瓶, ,容量通常約容量通常約300300毫升毫升, ,微量分析用的可以小微量分析用的可以小到到1010毫升毫升, ,后人稱這種燒瓶為克氏燒瓶。后人稱這種燒瓶為克氏燒瓶。 常量凱氏定氮法常量凱氏定氮法1. 1. 原理原理 樣品與濃硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋樣品與濃硫酸和催

7、化劑一同加熱消化，使蛋白質(zhì)分解，其中碳和氫被氧化為二氧化碳和水逸白質(zhì)分解，其中碳和氫被氧化為二氧化碳和水逸出，而樣品中的有機(jī)氮轉(zhuǎn)化為氨與硫酸結(jié)合成硫出，而樣品中的有機(jī)氮轉(zhuǎn)化為氨與硫酸結(jié)合成硫酸銨。然后加堿蒸餾，使氨蒸出。酸銨。然后加堿蒸餾，使氨蒸出。用用H3BO3H3BO3吸收后再以規(guī)范鹽酸溶液滴定。根吸收后再以規(guī)范鹽酸溶液滴定。根據(jù)規(guī)范酸耗費(fèi)量可以計(jì)算出蛋白質(zhì)的含量。據(jù)規(guī)范酸耗費(fèi)量可以計(jì)算出蛋白質(zhì)的含量。也可以用過(guò)量的規(guī)范也可以用過(guò)量的規(guī)范H2SO4H2SO4或規(guī)范鹽酸溶液或規(guī)范鹽酸溶液吸收后再以規(guī)范吸收后再以規(guī)范NaOHNaOH溶液滴定過(guò)量的酸。溶液滴定過(guò)量的酸。整個(gè)過(guò)程分三步：消化、蒸餾

8、、吸收與滴定整個(gè)過(guò)程分三步：消化、蒸餾、吸收與滴定、消化、消化 總反響式：總反響式：1 1加硫酸鉀加硫酸鉀 作為增溫劑，提高溶液沸點(diǎn)，作為增溫劑，提高溶液沸點(diǎn)，純硫酸沸點(diǎn)純硫酸沸點(diǎn) 340 340，參與硫酸鉀之后可以提高，參與硫酸鉀之后可以提高至至400400以上。也可參與硫酸鈉，氯化鉀等提以上。也可參與硫酸鈉，氯化鉀等提高沸點(diǎn)，但效果不如硫酸鉀。高沸點(diǎn)，但效果不如硫酸鉀。2NH2CH22COOH+13H2SO4 NH42SO4+6CO2+12SO2+16H2O一定要用濃硫酸一定要用濃硫酸98%2 2 加硫酸銅加硫酸銅 作為催化劑。還可以作消化作為催化劑。還可以作消化終點(diǎn)指示劑做蒸餾時(shí)堿性指示

9、劑。還可以終點(diǎn)指示劑做蒸餾時(shí)堿性指示劑。還可以加氧化汞、汞均有毒，價(jià)錢貴、硒粉、二加氧化汞、汞均有毒，價(jià)錢貴、硒粉、二氧化鈦。氧化鈦。3 3加氧化劑加氧化劑 如雙氧水、次氯酸鉀等加速有如雙氧水、次氯酸鉀等加速有機(jī)機(jī) 物氧化速度。物氧化速度。右圖為消化安右圖為消化安裝裝、蒸餾、蒸餾 消化液消化液 + 400g/L氫氫氧化鈉加氧化鈉加熱蒸餾，熱蒸餾，放出氨氣。放出氨氣。、 吸收與滴定吸收與滴定1用用20g/L硼酸吸收，用鹽酸規(guī)范溶液硼酸吸收，用鹽酸規(guī)范溶液滴定，指示劑用混合指示劑甲基紅滴定，指示劑用混合指示劑甲基紅溴甲酚綠混合指示劑或亞甲基藍(lán)溴甲酚綠混合指示劑或亞甲基藍(lán)甲甲基紅?；t。 指示劑指示

10、劑 紫紅色紫紅色 亮綠色亮綠色 暗暗灰色灰色 酸酸 堿堿 酸酸 2NH3 + 4H3BO3 =NH42B4O7 + 5H2ONH42B4O7 + 2HCl + 5H2O = 2NH4Cl + 4H3BO3或或2用過(guò)量的用過(guò)量的 H2SO4 或或 HCl 規(guī)范溶液規(guī)范溶液吸收，再用吸收，再用 NaOH 規(guī)范溶液滴定過(guò)剩的規(guī)范溶液滴定過(guò)剩的酸液。酸液。吸收吸收 滴定滴定結(jié)果計(jì)算：結(jié)果計(jì)算：蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)%= 100 留意：留意：F氮換算為蛋白質(zhì)的系數(shù)，普通為氮換算為蛋白質(zhì)的系數(shù)，普通為 6.25，玉米、高粱為，玉米、高粱為6.24，大豆及其制品為，大豆及其制品為5.71，大，大麥為麥為5.83。 闡

11、明：闡明： 整個(gè)消化過(guò)程要在通風(fēng)櫥進(jìn)展。整個(gè)消化過(guò)程要在通風(fēng)櫥進(jìn)展。消化時(shí)不要用強(qiáng)火，應(yīng)堅(jiān)持和緩沸騰，以免粘貼在消化時(shí)不要用強(qiáng)火，應(yīng)堅(jiān)持和緩沸騰，以免粘貼在凱氏瓶?jī)?nèi)壁上的含氮化合物在無(wú)硫酸存在的情況下凱氏瓶?jī)?nèi)壁上的含氮化合物在無(wú)硫酸存在的情況下消化不完全而呵斥氮損失。消化不完全而呵斥氮損失。 消化時(shí)，作空白實(shí)驗(yàn)。消化時(shí)，作空白實(shí)驗(yàn)。FmcVV014.0)(0 消化時(shí)應(yīng)留意不時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)凱氏燒瓶，以便利用冷消化時(shí)應(yīng)留意不時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)凱氏燒瓶，以便利用冷凝酸液將附在瓶壁上的固體殘?jiān)聪拢⒋龠M(jìn)其消凝酸液將附在瓶壁上的固體殘?jiān)聪?，并促進(jìn)其消化完全?；耆?。當(dāng)樣品消化液不易廓清透明時(shí)，可將凱氏燒瓶當(dāng)樣品消化液不

12、易廓清透明時(shí)，可將凱氏燒瓶冷卻，參與冷卻，參與3030過(guò)氧化氫過(guò)氧化氫 2-3 mL 2-3 mL 后再繼續(xù)加后再繼續(xù)加熱消化。熱消化。普通消化至呈透明后，繼續(xù)消化普通消化至呈透明后，繼續(xù)消化3030分鐘即可，分鐘即可，但對(duì)于含有特別難以氨化的氮化合物的樣但對(duì)于含有特別難以氨化的氮化合物的樣品如含賴氨酸、組氨酸、色氨酸、酪氨酸或品如含賴氨酸、組氨酸、色氨酸、酪氨酸或脯氨酸等時(shí)，需適當(dāng)延伸消化時(shí)間。有機(jī)物如脯氨酸等時(shí)，需適當(dāng)延伸消化時(shí)間。有機(jī)物如分解完全，消化液呈藍(lán)色或淺綠色，但含鐵量分解完全，消化液呈藍(lán)色或淺綠色，但含鐵量多時(shí)，呈較深綠色。多時(shí)，呈較深綠色。 蒸餾安裝不能漏氣。蒸餾安裝不能漏氣

13、。 蒸餾前假設(shè)加堿量缺乏，消化液呈藍(lán)色不生成蒸餾前假設(shè)加堿量缺乏，消化液呈藍(lán)色不生成氫氧化銅沉淀，此時(shí)需再添加氫氧化鈉用量。氫氧化銅沉淀，此時(shí)需再添加氫氧化鈉用量。 蒸餾終了后，應(yīng)先將冷凝管下端提離液面清洗蒸餾終了后，應(yīng)先將冷凝管下端提離液面清洗管口，再蒸管口，再蒸1 1分鐘后關(guān)掉熱源否那么能夠呵斥吸分鐘后關(guān)掉熱源否那么能夠呵斥吸收液倒吸。收液倒吸。 硼酸吸收液的溫度不能超越硼酸吸收液的溫度不能超越4040。 混合指示劑在混合指示劑在pH5.2pH5.2時(shí)為紫紅色，時(shí)為紫紅色， pH5.4 pH5.4時(shí)為時(shí)為暗灰色，暗灰色， pH5.6 pH5.6時(shí)為亮綠色，時(shí)為亮綠色， 變色點(diǎn)為變色點(diǎn)為pH

14、5.4pH5.4，指示劑變色范圍很窄，靈敏度高。指示劑變色范圍很窄，靈敏度高。微量凱氏定氮法微量凱氏定氮法1 1、原理及適用范圍同前、原理及適用范圍同前2 2、與常量法不同點(diǎn)：、與常量法不同點(diǎn)：參與硼酸量由參與硼酸量由50 ml 10 ml,50 ml 10 ml,滴定用鹽酸濃度由滴定用鹽酸濃度由0.1 mol/L 0.01 mol/L ,0.1 mol/L 0.01 mol/L ,常量法全量蒸餾，微量法少部分蒸餾。常量法全量蒸餾，微量法少部分蒸餾。微量法用微量滴定管滴定。微量法用微量滴定管滴定。3 3、蒸餾安裝以下圖、蒸餾安裝以下圖 。 問(wèn)題：用微量凱氏定氮法測(cè)定一樣品的蛋白質(zhì)含量問(wèn)題：用微

15、量凱氏定氮法測(cè)定一樣品的蛋白質(zhì)含量時(shí)，測(cè)定結(jié)果比實(shí)踐值偏低，試分析其能夠的緣由？時(shí)，測(cè)定結(jié)果比實(shí)踐值偏低，試分析其能夠的緣由？ 運(yùn)用實(shí)例：運(yùn)用實(shí)例： 1 1、醬油中全氮含量的測(cè)定、醬油中全氮含量的測(cè)定 2 2、乳與乳制品中非蛋白氮含量的測(cè)定、乳與乳制品中非蛋白氮含量的測(cè)定 GB/T GB/T 21704-202121704-2021 3 3、麥芽中庫(kù)爾巴哈值、麥芽中庫(kù)爾巴哈值; ;蛋白質(zhì)區(qū)分蛋白質(zhì)區(qū)分 1 1庫(kù)爾巴哈值：制麥過(guò)程中蛋白質(zhì)的溶解度，庫(kù)爾巴哈值：制麥過(guò)程中蛋白質(zhì)的溶解度，用可溶性氮占總氮的比值表示。用可溶性氮占總氮的比值表示。 2 2啤酒中蛋白質(zhì)區(qū)分啤酒中蛋白質(zhì)區(qū)分自動(dòng)凱氏定氮法自

16、動(dòng)凱氏定氮法1 1、原理及適用范圍、原理及適用范圍: : 同前同前 2 2、特點(diǎn)：、特點(diǎn)：1 1消化安裝用優(yōu)質(zhì)玻璃制成的凱氏消化瓶，紅消化安裝用優(yōu)質(zhì)玻璃制成的凱氏消化瓶，紅外線加熱的消化爐。外線加熱的消化爐。2 2快速：一次可同時(shí)消化快速：一次可同時(shí)消化8-248-24個(gè)樣品。個(gè)樣品。3 3自動(dòng)：自動(dòng)加堿蒸餾，自動(dòng)吸收和滴定，自自動(dòng)：自動(dòng)加堿蒸餾，自動(dòng)吸收和滴定，自動(dòng)數(shù)字顯示安裝?？捎?jì)算總氮百分含量并記錄，動(dòng)數(shù)字顯示安裝。可計(jì)算總氮百分含量并記錄，幾分鐘完成幾分鐘完成1 1個(gè)樣。個(gè)樣。 福斯2300北京福德泰和科技北京福德泰和科技產(chǎn)品稱號(hào)：產(chǎn)品稱號(hào)： 凱氏定氮儀凱氏定氮儀 二分光光度法乙酰丙酮

17、比色法二分光光度法乙酰丙酮比色法 1 1、原理、原理 1 1樣品消化樣品消化 硫酸銨。硫酸銨。 2 2在在pH4.8pH4.8的乙酸鈉的乙酸鈉- -乙酸緩沖溶液中，乙酸緩沖溶液中，銨與乙酰丙酮和甲醛反響生成黃色的銨與乙酰丙酮和甲醛反響生成黃色的3,5-3,5-二乙二乙酰酰-2,6-2,6-二甲基二甲基-1,4-1,4-二氫化吡啶化合物。二氫化吡啶化合物。 3 3在波長(zhǎng)在波長(zhǎng)400nm400nm處測(cè)定吸光度，與規(guī)范處測(cè)定吸光度，與規(guī)范系列比較定量。系列比較定量。 4 4結(jié)果乘以換算系數(shù)，即為蛋白質(zhì)含量。結(jié)果乘以換算系數(shù)，即為蛋白質(zhì)含量。 2 2、方法特點(diǎn)、方法特點(diǎn) 1 1操作簡(jiǎn)便操作簡(jiǎn)便 2 2

18、適宜大批量樣品蛋白質(zhì)的測(cè)定適宜大批量樣品蛋白質(zhì)的測(cè)定三電位滴定法三電位滴定法 1 1、原理、原理 1 1樣品消化樣品消化 硫酸銨。硫酸銨。 2 2中和樣品至中和樣品至pH8.2pH8.2。 3 34 NH4 + +6HCHO (CH2)6N4+2H+ 4 NH4 + +6HCHO (CH2)6N4+2H+ +6H2O +6H2O 4 42H+ +OH- H2O2H+ +OH- H2O 2 2、方法特點(diǎn)、方法特點(diǎn)四雙縮脲法四雙縮脲法 傳統(tǒng)的凱氏定氮法運(yùn)用范圍廣，傳統(tǒng)的凱氏定氮法運(yùn)用范圍廣，靈敏度高、準(zhǔn)確，不要大儀器，但費(fèi)靈敏度高、準(zhǔn)確，不要大儀器，但費(fèi)時(shí)間，有環(huán)境污染。時(shí)間，有環(huán)境污染。 新開發(fā)

19、的：雙縮脲法由農(nóng)業(yè)部于新開發(fā)的：雙縮脲法由農(nóng)業(yè)部于2021.10.202021.10.20發(fā)布并實(shí)施發(fā)布并實(shí)施 適宜于乳與乳制品中蛋白質(zhì)含適宜于乳與乳制品中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定。量的測(cè)定。 1.1.原理原理脲尿素脲尿素NH2CONH2 NH2CONH2 加熱至加熱至150160150160時(shí)，時(shí)，兩分子縮合成雙縮脲。兩分子縮合成雙縮脲。雙縮脲能和硫酸銅的堿性溶液生成紫色絡(luò)合物，這雙縮脲能和硫酸銅的堿性溶液生成紫色絡(luò)合物，這種反響叫雙縮脲反響。縮二脲反響種反響叫雙縮脲反響?？s二脲反響蛋白質(zhì)分子中含有肽鍵蛋白質(zhì)分子中含有肽鍵 CONH CONH 與雙縮脲構(gòu)造與雙縮脲構(gòu)造類似。在同樣條件下也有呈色反響，

20、在一定條件下，類似。在同樣條件下也有呈色反響，在一定條件下，其顏色深淺與蛋白質(zhì)含量成正比，可用分光光度計(jì)其顏色深淺與蛋白質(zhì)含量成正比，可用分光光度計(jì)來(lái)測(cè)其吸光度，確定含量。來(lái)測(cè)其吸光度，確定含量。540nm540nmNH2CONHCONH2 + NH3NH2CONH2 + NH2CONH22.2.運(yùn)用運(yùn)用 NY/T NY/T 1678-20211678-2021五五 杜馬斯熄滅法杜馬斯熄滅法 1 1、原理、原理 待測(cè)樣本在純氧待測(cè)樣本在純氧99.99%99.99%環(huán)境中高溫環(huán)境中高溫熄滅，將其所含的有機(jī)氮和無(wú)機(jī)氮全部轉(zhuǎn)化成熄滅，將其所含的有機(jī)氮和無(wú)機(jī)氮全部轉(zhuǎn)化成氮的氧化物后被復(fù)原劑復(fù)原成氮?dú)狻?/p>

21、最后，用氮的氧化物后被復(fù)原劑復(fù)原成氮?dú)狻Ｗ詈?，用TCDTCD檢測(cè)器檢測(cè)氮?dú)夂?，?jì)算蛋白質(zhì)含量。檢測(cè)器檢測(cè)氮?dú)夂?，?jì)算蛋白質(zhì)含量。 2 2、特點(diǎn)：杜馬斯熄滅法不僅可以在、特點(diǎn)：杜馬斯熄滅法不僅可以在4 46 6分鐘分鐘內(nèi)準(zhǔn)確地測(cè)定出樣品的總氮含量，而且還能測(cè)內(nèi)準(zhǔn)確地測(cè)定出樣品的總氮含量，而且還能測(cè)定出凱氏法所不能測(cè)定的硝態(tài)氮。還能減少對(duì)定出凱氏法所不能測(cè)定的硝態(tài)氮。還能減少對(duì)環(huán)境的污染以及對(duì)人類安康的危害。環(huán)境的污染以及對(duì)人類安康的危害。 第二節(jié)第二節(jié) 氨基氮含量的檢測(cè)方法氨基氮含量的檢測(cè)方法一、甲醛滴定法一、甲醛滴定法 1. 1.原理：氨基酸本身既有堿性原理：氨基酸本身既有堿性 NH2 N

22、H2，又有又有 酸性酸性 COOH COOH ，成中性內(nèi)鹽，成中性內(nèi)鹽，參與甲醛溶液后，與參與甲醛溶液后，與 NH2 NH2 結(jié)結(jié)合，堿性消逝，再用強(qiáng)堿來(lái)滴合，堿性消逝，再用強(qiáng)堿來(lái)滴定定 COOH COOH 基。基。 2 2特點(diǎn)：適用于發(fā)酵工業(yè)，如發(fā)酵液中含氨基氮量，特點(diǎn)：適用于發(fā)酵工業(yè)，如發(fā)酵液中含氨基氮量，其發(fā)酵過(guò)程中氨基氮量減少情況等適于游離氨基其發(fā)酵過(guò)程中氨基氮量減少情況等適于游離氨基酸的測(cè)定酸的測(cè)定 。3 3、運(yùn)用實(shí)例、運(yùn)用實(shí)例 釀造醬油釀造醬油GB18186-2000 GB18186-2000 氨基氮含量的測(cè)定氨基氮含量的測(cè)定 1 1試劑試劑 a) a) 甲醛溶液：甲醛溶液：373

23、74040； b) 0.05mol/L b) 0.05mol/L氫氧化鈉規(guī)范滴定溶液氫氧化鈉規(guī)范滴定溶液 2 2分析步驟分析步驟 汲取汲取5.0mL5.0mL樣品，置于樣品，置于100mL100mL容量瓶中，加水至刻度，容量瓶中，加水至刻度，混勻后汲取混勻后汲取20.0mL20.0mL，置于，置于200mL200mL燒杯中，加水燒杯中，加水60mL60mL水，開動(dòng)磁力攪拌器，用氫氧化鈉規(guī)范溶液水，開動(dòng)磁力攪拌器，用氫氧化鈉規(guī)范溶液c(NaOH)=0.05mol/Lc(NaOH)=0.05mol/L滴定至酸度計(jì)指示滴定至酸度計(jì)指示pHpH8.28.2記下耗費(fèi)氫氧化鈉規(guī)范滴定溶液記下耗費(fèi)氫氧化鈉規(guī)

24、范滴定溶液0.05mol/L0.05mol/L的毫升數(shù)，可計(jì)算總酸含量的毫升數(shù)，可計(jì)算總酸含量 。 參與參與10.0mL10.0mL甲醛溶液，混勻。再用氫氧化鈉規(guī)范滴甲醛溶液，混勻。再用氫氧化鈉規(guī)范滴定溶液定溶液0.05mol/L0.05mol/L繼續(xù)滴定至繼續(xù)滴定至pHpH9.2, 9.2, 記下耗記下耗費(fèi)氫氧化鈉規(guī)范滴定溶液費(fèi)氫氧化鈉規(guī)范滴定溶液0.05mol/L0.05mol/L的毫升數(shù)。的毫升數(shù)。 同時(shí)取同時(shí)取80mL80mL水，先用氫氧化鈉溶液水，先用氫氧化鈉溶液0.05mol/L0.05mol/L調(diào)理調(diào)理pHpH為為8.28.2，再參與，再參與10.0mL10.0mL甲醛溶液，用氫

25、氧化甲醛溶液，用氫氧化鈉規(guī)范滴定溶液鈉規(guī)范滴定溶液0.05mol/L0.05mol/L滴定至滴定至pH=9.2pH=9.2，同，同時(shí)做試劑空白實(shí)驗(yàn)。時(shí)做試劑空白實(shí)驗(yàn)。 二、茚三酮比色法二、茚三酮比色法 1 1、 原理：茚三酮與樣品中的原理：茚三酮與樣品中的-氨基氮反氨基氮反響，得到復(fù)原茚三酮，再與氨和未復(fù)原的茚三響，得到復(fù)原茚三酮，再與氨和未復(fù)原的茚三酮反響，生成藍(lán)紫色絡(luò)合物，其顏色深淺與酮反響，生成藍(lán)紫色絡(luò)合物，其顏色深淺與-氨基氮含量成正比。在氨基氮含量成正比。在570nm570nm下，測(cè)定吸光下，測(cè)定吸光度，計(jì)算樣品中的度，計(jì)算樣品中的-氨基氮含量。氨基氮含量。 2 2、操作過(guò)程、操作過(guò)

26、程1 1取取7 7支試管并編號(hào)，于支試管并編號(hào)，于0 0號(hào)試管中參與蒸餾號(hào)試管中參與蒸餾水水2.00 mL2.00 mL，于，于1 1、2 2、3 3號(hào)試管中分別參與樣液號(hào)試管中分別參與樣液2.00 mL2.00 mL，4 4、5 5、6 6號(hào)試管中分別參與甘氨酸規(guī)號(hào)試管中分別參與甘氨酸規(guī)范運(yùn)用液范運(yùn)用液2.00 mL2.00 mL。2 27 7支試管中各參與發(fā)色劑支試管中各參與發(fā)色劑1.00 mL1.00 mL，混勻，混勻，蓋塞，將試管放入沸水浴中，準(zhǔn)確加熱蓋塞，將試管放入沸水浴中，準(zhǔn)確加熱16min16min，3 3在在2020水浴中冷卻水浴中冷卻20min20min。再各參與碘酸鉀。再各

27、參與碘酸鉀稀釋溶液稀釋溶液5.00 mL5.00 mL，充分搖勻。，充分搖勻。4 4用空白液管調(diào)理儀器零點(diǎn)，于用空白液管調(diào)理儀器零點(diǎn)，于570nm570nm波長(zhǎng)下，波長(zhǎng)下，丈量吸光度。丈量吸光度。 3 3、計(jì)算、計(jì)算 4 4、運(yùn)用、運(yùn)用 啤酒消費(fèi)中：麥汁、麥芽中啤酒消費(fèi)中：麥汁、麥芽中-氨氨基氮的測(cè)定基氮的測(cè)定 第三節(jié)第三節(jié) 多種氨基酸的分別和測(cè)定多種氨基酸的分別和測(cè)定 一、氨基酸自動(dòng)分析儀法一、氨基酸自動(dòng)分析儀法 原理：原理： 1 1、運(yùn)用陽(yáng)離子交換樹脂聚苯乙、運(yùn)用陽(yáng)離子交換樹脂聚苯乙烯經(jīng)交聯(lián)再磺化在色譜柱進(jìn)展分別；烯經(jīng)交聯(lián)再磺化在色譜柱進(jìn)展分別； 2 2、洗脫下來(lái)的氨基酸可用茚三酮、洗脫下來(lái)的