試驗(yàn)三細(xì)菌的分布與消毒滅菌

1、實(shí)驗(yàn)三細(xì)菌的分布與消毒滅菌【目的】 了解細(xì)菌廣泛分布于自然界及正常人體，樹(shù)立“有菌觀念”，從而認(rèn)識(shí)無(wú)菌操作 對(duì)于微生物學(xué)及醫(yī)學(xué)實(shí)踐的重要性。 了解正常人體中寄居著種類(lèi)繁多的細(xì)菌，正常情況下不引起人類(lèi)疾病，稱為正常 菌群。 熟悉外界因素對(duì)細(xì)菌的影響，學(xué)習(xí)常用的消毒滅菌方法。 了解不同細(xì)菌對(duì)外界因素具有不同的抵抗力。一、細(xì)菌的分布檢查（一）空氣中的細(xì)菌檢查【材料】普通瓊脂平板培養(yǎng)基?！痉椒ā?取普通瓊脂平板一只開(kāi)啟皿蓋，培養(yǎng)基面向上放于實(shí)驗(yàn)桌上，暴露530min后蓋好。 置37°C培養(yǎng)1824小時(shí)后觀察結(jié)果?！窘Y(jié)果】（填表10-1 ）平板培養(yǎng)基表面或多或少有菌落生長(zhǎng)。（二）地面水中的細(xì)菌

2、檢查【材料】地面水（河水、井水或池水）、高層瓊脂培養(yǎng)基、1ml無(wú)菌吸管、滅菌培養(yǎng)皿。【方法】 以無(wú)菌吸管吸取1ml地面水，加入滅菌平皿中。 將已溶化且冷至45C左右的高層瓊脂傾注人上述平皿中，加蓋后輕輕搖動(dòng)，使水 與瓊脂充分混勻，靜凝。 37C 24小時(shí)后取出觀察，計(jì)數(shù)菌落?！窘Y(jié)果】（填表10-1 ）（三）衣服、票證、頭發(fā)、手指皮膚上的細(xì)菌檢查【材料】普通瓊脂平板培養(yǎng)基?！痉椒ā咳∑胀ㄆ桨逡粋€(gè)，用蠟筆在平板背面玻璃上劃成四等分，并貼上標(biāo)簽（圖10-1）。然后以無(wú)菌操作法，用衣袖角、票證、頭發(fā)及手指或指甲內(nèi)污物，在平板培養(yǎng)基表面相應(yīng) 部位輕輕涂抹，置37C培養(yǎng)24小時(shí)，觀察并記錄結(jié)果?！窘Y(jié)果】填

3、表培養(yǎng)基表面涂抹處有菌落生長(zhǎng)。衣服、票證、頭發(fā)、手 指皮膚上的細(xì)菌檢查（四）正常人體咽喉部的細(xì)菌檢查【材料】血液瓊脂平板培養(yǎng)基、滅菌棉拭、接種環(huán)、酒精燈?！痉椒ā咳缇奘靡恢В诒粰z查者咽喉部輕輕涂擦后，再涂于血液瓊脂培養(yǎng)基一側(cè)，然 后改用滅菌接種環(huán)作分離劃線接種。蓋上皿蓋，37C孵育24小時(shí)（或者采用咳喋法）【結(jié)果】（填表10-1 ）瓊脂平板表面有菌落生長(zhǎng)。其中占優(yōu)勢(shì)的是一種細(xì)小菌落，其周?chē)胁菥G色的不完 全溶血環(huán)。此為咽喉部的正常菌群一甲型鏈球菌。（五）實(shí)驗(yàn)結(jié)果觀察（填表）細(xì)菌分布的實(shí)驗(yàn)結(jié)果檢杳材料空 氣水衣角票證頭發(fā)手指咽喉部細(xì)菌生長(zhǎng) 情況菌落個(gè)數(shù)實(shí)驗(yàn)體會(huì)二、消毒火菌試驗(yàn)（一）煮沸與高

4、壓滅菌法【原理】高溫對(duì)細(xì)菌有明顯的致死作用，主要機(jī)制是凝固菌體蛋白質(zhì)，也可能與細(xì)菌DNA單螺旋斷裂、細(xì)菌細(xì)胞膜功能受損及菌體內(nèi)電解質(zhì)濃縮有關(guān)。濕熱滅菌法所需溫度比干熱法為低，時(shí)間較短。尤其是高壓蒸氣滅菌，因增加壓力 而提高沸點(diǎn)，滅菌效果最佳。有芽胞的細(xì)菌由于對(duì)熱的抵抗力比無(wú)芽胞細(xì)菌強(qiáng)，所以只 有采用高壓蒸氣滅菌法才能將芽胞徹底殺滅?！静牧稀凯傊桨鍍蓧K、肉湯管兩支、大腸埃希菌和枯草芽胞桿菌肉湯培養(yǎng)物。【方法】 取瓊脂平板兩塊，用記號(hào)筆分別在二平板底部玻面上，注明大腸埃希菌和枯草芽 胞桿菌，并分別將二塊平板底玻璃面劃分三等份，于每塊平板的三等份上分別注明對(duì)照、 加熱 100C 10min 及加熱

5、 121C 20min。 取肉湯管二支，分別注明加熱 100C lOmin及加熱121C 20min，用毛細(xì)吸管吸 取大腸埃希菌肉湯培養(yǎng)物，于上述二支肉湯管中各加入菌液一滴。混勻，再用接種環(huán)于 二支肉湯管的任何一管中取一環(huán)菌液接種于大腸埃希菌平板的對(duì)照處，然后分別將肉湯 管加熱100C l0min及加熱121C 20min（高壓蒸氣15磅、20min），再各取一接種環(huán)分別 接種于平板的相應(yīng)部位。枯草芽胞桿菌以同法試驗(yàn)。 將二塊瓊脂平板接種物置37C培養(yǎng)24小時(shí)，比較培養(yǎng)基上二種細(xì)菌的生長(zhǎng)情況?！窘Y(jié)果觀察】（填表10-2）表10-2 煮沸和高壓滅菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果 細(xì)菌名稱I100C 10分I 121

6、C 20分| 未加熱（對(duì)照）枯草芽胞桿菌大腸埃希菌結(jié)果分析（二）紫外線殺菌法【原理】波長(zhǎng)265266nm的紫外線因與DNA吸收光譜-致而有明顯的殺菌作用。其機(jī)制是使 細(xì)菌DNA相鄰的胸腺嘧啶形成二聚體，從而破壞 DNA勾型，干擾其正常復(fù)制，導(dǎo)致細(xì)菌 死亡。紫外線殺菌力雖強(qiáng)，但穿透力弱，故只能用于實(shí)驗(yàn)室、病房或手術(shù)室內(nèi)空氣及物體 表面的消毒滅菌。另外，殺菌波長(zhǎng)的紫外線對(duì)人體皮膚、眼睛等有損傷作用，應(yīng)注意防 護(hù)?！静牧稀看竽c埃希菌培養(yǎng)物、瓊脂平板、接種環(huán)、酒精燈、紫外線燈。【方法】 以滅菌接種環(huán)挑取大腸埃希菌培養(yǎng)物，于瓊脂平板上作來(lái)回密集劃線接種。 半啟皿蓋（將皿蓋遮住涂面的1/2），置于紫外線燈

7、下Im以內(nèi)接受照射30分鐘 蓋上皿蓋，于37 C培養(yǎng)24小時(shí)后觀察結(jié)果?！窘Y(jié)果觀察】（填空）平板上用黑紙遮蓋部分 菌生長(zhǎng)，未遮蓋部分菌生長(zhǎng)。這說(shuō)明紫外線具有作用，但力弱（三）化學(xué)消毒法1、皮膚消毒試驗(yàn)【原理】乙醇可使菌體蛋白脫水凝固或與菌體蛋白、酶蛋白等結(jié)合而使之變性失活。70%75 %乙醇在1530秒即將細(xì)菌殺死。但95%的乙醇消毒效果反不如70%75%為好, 因高濃度乙醇使菌體蛋白表面迅速凝固，影響乙醇繼續(xù)進(jìn)入菌體內(nèi)發(fā)揮作用。的碘酒 可使菌體酶蛋白中的硫氫基（-SH）改變，使酶失去活性，導(dǎo)致機(jī)能障礙而死亡。【材料】普通瓊脂平板一個(gè)、碘酒、75%乙醇?！痉椒ā咳∑胀ō傊桨逡粋€(gè)，用蠟筆在平板

8、背面玻璃上劃成五等分，并貼上標(biāo)簽；兩人用手在培養(yǎng)基上各涂一格，然后用碘酒、75%乙醇消毒手指后再各涂另一格，留一格作對(duì)照，蓋好平板，置37C溫箱中培養(yǎng)24小時(shí)觀察結(jié)果?！窘Y(jié)果】（填表）皮膚消毒試驗(yàn)結(jié)果37C 24h培養(yǎng)細(xì)菌生長(zhǎng)情況結(jié)果解釋消毒前手指皮 膚消毒后手指皮 膚對(duì)照（不接種）2、化學(xué)消毒劑對(duì)細(xì)菌的影響【原理】有些化學(xué)藥品濃度高時(shí)能殺滅病原微生物，稱為化學(xué)消毒劑；濃度低時(shí)能抑制細(xì)菌 生長(zhǎng)，稱為防腐劑。由于化學(xué)消毒劑對(duì)人體細(xì)胞往往具有毒性作用，故只能外用。不同 細(xì)菌對(duì)不同的化學(xué)消毒劑具有不同的敏感性?！静牧稀?%龍膽紫、2%碘酒、2%紅汞、1:1000新潔爾滅、無(wú)菌濾紙片、葡萄球菌培養(yǎng)液、

9、 大腸埃希菌培養(yǎng)液、瓊脂平板、無(wú)齒小鑷子?！痉椒ā咳…傊桨鍍蓧K，分別在其底部注明葡萄球菌及大腸埃希菌。同時(shí)將每塊平皿底部 玻璃面劃分4等分，并分別標(biāo)明龍膽紫、碘酒、紅汞、新潔爾滅。（操作方法與藥敏試驗(yàn) 相似）三、抗生素的抗菌試驗(yàn)（藥敏試驗(yàn)，紙片法）【原理】抗生素主要是指某些微生物（大多數(shù)為放線菌和真菌、極少數(shù)為細(xì)菌）在生 長(zhǎng)繁殖過(guò)程中產(chǎn)生的一種合成代謝產(chǎn)物。此種有機(jī)化合物具有抗生物作用，能抑制或殺 滅某些生物細(xì)胞，主要是一些微生物和腫瘤細(xì)胞。一種抗生素只對(duì)一定種類(lèi)的生物細(xì)胞 具有選擇性拮抗作用，這種作用范圍稱為抗菌譜?？股氐目咕囼?yàn)（藥敏試驗(yàn)）是指在體外測(cè)定藥物抑制或殺死細(xì)菌能力的試驗(yàn)?！?/p>

10、材料】 金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、瓊脂平板培養(yǎng)基。 抗生素紙片（青、鏈、氯、慶大霉素、磺胺等）、尖頭鑷子、酒精燈、接種環(huán)?！痉椒ā?取瓊脂平板培養(yǎng)基二塊，于其底部玻璃上用標(biāo)簽紙注明本人所接種的菌株名稱 （或 將平板底部以蠟筆劃為六等分，分別在靠近邊緣處注明青、鏈、氯、慶大等字樣）。 以滅菌接種環(huán)挑取菌液，在培養(yǎng)基表面作密集劃線接種。 將鑷子火焰滅菌，待冷后再取各藥物紙片，分別牢貼于種有細(xì)菌的平板培養(yǎng)基表面相應(yīng)位置，每次貼片后鑷子均應(yīng)經(jīng)火焰燒灼滅菌。每張紙片間距不少于24mm紙片中心距平皿邊緣不少于15mm并分別作好標(biāo)記。在直徑90mn的平板上均勻擺放藥敏紙片的樣板 37C孵育1824h后，分

11、別測(cè)量各紙片抑菌環(huán)直徑（包括紙片在內(nèi)）（mm），抑菌環(huán) 的邊緣以肉眼見(jiàn)不到細(xì)菌明顯生長(zhǎng)為限。判定其敏感度?！窘Y(jié)果觀察記錄】填表。藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果判斷參考標(biāo)準(zhǔn):抗菌藥物耐藥抑菌圈直徑（mm中度敏感敏感青霉素v 1010-12> 13鏈霉素v 1010-14> 15其它抗生素v 1010-15> 16敏感：表示常規(guī)劑量的藥物在體內(nèi)所達(dá)到的濃度能抑制或殺滅待測(cè)菌；中度敏感:指提高測(cè)定藥物的劑量或在該藥物濃集部位，細(xì)菌生長(zhǎng)可被抑制；耐藥：表示常規(guī)劑量 的藥物在體內(nèi)所達(dá)到的濃度不能抑制或殺滅待測(cè)菌。藥物敏感試驗(yàn)（紙片擴(kuò)散法）結(jié)果抗生素大腸埃布菌金黃色葡萄球菌抑菌圈直徑（cm）敏感度抑菌

12、圈直徑（cm）敏感度青霉素紅霉素慶大霉素先鋒霉素氯霉素四、口腔內(nèi)微生物檢查（口腔專(zhuān)業(yè)）【方法】 滴一滴墨汁于潔凈玻片的一端； 用牙簽取齒間牙垢少許在墨汁中涂勻； 用玻片推成推片，干燥后油鏡觀察、繪圖 【結(jié)果】（繪圖）可見(jiàn)黑色背景中有著色發(fā)亮的細(xì)菌、螺旋體等微生物五、常用消毒滅菌器及無(wú)菌室介紹（一）高壓蒸氣滅菌器【構(gòu)造】高壓蒸氣滅菌器是雙層的金屬圓筒，蓋旁附有螺旋，借以緊閉蓋門(mén)，使蒸氣不外溢。 因而當(dāng)蒸氣壓力升高時(shí)，其溫度亦相應(yīng)地增高，高壓蒸氣滅菌器上裝有排氣門(mén)、安全活 塞，以調(diào)節(jié)器內(nèi)壓力。還有溫度表和壓力表，以顯示內(nèi)部的溫度和壓力。二者的關(guān)系見(jiàn) 表10-5。器內(nèi)裝有帶孔的金屬擱板，用以放置欲滅

13、菌物品?！居梅ā考舆m量水于器內(nèi)，放入欲滅菌物品，將蓋關(guān)上，轉(zhuǎn)緊螺旋使之密閉。滅菌器底部用 電爐加熱，同時(shí)打開(kāi)排氣門(mén)，使器內(nèi)冷氣完全排出，否則壓力表上所示壓力并非全部為 蒸氣壓力，再維持該壓力20分鐘后，停止加壓。蒸氣壓力與溫度的關(guān)系千帕斯卡千克/平方厘米磅/平方寸溫度2（kPa） （kg/cm）（lb/（C）58101520【注意事項(xiàng)】1. 必須待壓力逐漸自行下降至零時(shí)，才可開(kāi)蓋取物。切不可突然打開(kāi)排氣門(mén)，放氣 減壓，以免瓶?jī)?nèi)液體沖出外溢。2. 用于耐高溫和耐濕物品的滅菌，如普通培養(yǎng)基、手術(shù)器械、手術(shù)衣及敷料等。（二）干熱滅菌器（干烤箱）【構(gòu)造】箱壁為雙層，兩層間襯以石棉板隔熱，底部裝有電熱線

14、圈，箱壁有溫度調(diào)節(jié)器和時(shí) 間調(diào)節(jié)器，箱頂有溫度計(jì)調(diào)節(jié)孔，滅菌開(kāi)始時(shí)關(guān)閉調(diào)節(jié)孔。開(kāi)啟電源后，箱內(nèi)溫度逐漸 升高，可保持恒溫?！居梅ā繉⒋郎缇锲钒b妥當(dāng)，放人箱內(nèi)金屬架上，關(guān)好玻璃門(mén)和金屬門(mén)，開(kāi)啟電源，調(diào) 節(jié)溫度（160170C）和時(shí)間（2小時(shí)）?！咀⒁馐马?xiàng)】 溫度不可超過(guò)180C，以免燒焦棉塞及包裝紙。 滅菌后須待溫度下降至接近室溫時(shí)方可打開(kāi)箱門(mén)，否則因冷空氣驟進(jìn)會(huì)引起玻璃 器皿破裂。 干烤滅菌主要應(yīng)用于玻璃、陶瓷制品、凡士林、液體石蠟等物品。（三）流通蒸氣滅菌器其構(gòu)造原理同一般的蒸鍋，底層盛水，器內(nèi)有一至二層的帶孔隔板，以放置待滅菌 的物品。加熱水后沸騰產(chǎn)生蒸氣。在普通大氣壓下，蒸氣溫度只能

15、達(dá)到100C，維持此溫度30分鐘左右，只能殺死細(xì)菌繁殖體，而芽胞不一定死亡。所以使用流通蒸氣滅菌器時(shí)， 必須行間歇滅菌法，即每日一次，每次 100C蒸30分鐘，取出置37C孵箱培養(yǎng)過(guò)夜，使 未死亡的芽胞發(fā)育成繁殖體。如此連續(xù)滅菌三次可達(dá)滅菌目的。本法用于一些不耐高溫 的培養(yǎng)基之滅菌。（四）濾菌器濾菌器是用以除去細(xì)菌的器具，它含有微細(xì)小孔，只允許液體及氣體通過(guò)，而大于 孔徑的物體不能通過(guò)。濾菌器可以除去細(xì)菌，但不能除去病毒、支原體、 衣原體及細(xì)菌 L 型等微生物。濾過(guò)除菌主要用于一些不耐高溫的血清、抗生素、藥液、酶制劑等。常用 的濾器有蔡氏濾器和玻璃濾器。（五） 煮沸消毒器煮沸100C 5min

16、，能殺死一切細(xì)菌的繁殖體，煮沸消毒器可用于一般器械（剪刀、注 射器） 等的消毒。（ 六 ） 紫外線燈 常用于手術(shù)室、病房、無(wú)菌室、嬰兒室等的空氣消毒，其消毒效果與照射的時(shí)間、 距離和強(qiáng)度有關(guān)，一般要求燈管離地面約 3米高處，照射12小時(shí)。（七） 無(wú)菌室及無(wú)菌工作臺(tái)的工作原理及使用 為避免環(huán)境和空氣中的細(xì)菌污染培養(yǎng)物，一般較為細(xì)致的細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)菌培養(yǎng)的操 作均應(yīng)在紫外線消毒后的無(wú)菌室或超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。一些不能經(jīng)受高壓、高溫消毒的 試劑可用濾器濾膜除菌，器皿可用紫外線照射、 75%乙醇或的十二烷基磺酸鈉（SDS）浸 泡消毒。1、無(wú)菌室 無(wú)菌室或稱潔凈室，是在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部安裝的與外界隔離的用于無(wú)菌操

17、作 的實(shí)驗(yàn)室。簡(jiǎn)單的無(wú)菌室可用木結(jié)構(gòu)和玻璃制成，室內(nèi)應(yīng)有空氣過(guò)濾裝置，應(yīng)安裝恒溫 恒濕的空氣調(diào)節(jié)器、紫外線殺菌燈、照明燈、電源和煤氣嘴等。無(wú)菌室必須經(jīng)常保持整潔，一般進(jìn)入無(wú)菌室時(shí)，應(yīng)著隔離衣、帽和專(zhuān)用鞋。用前必 須先經(jīng)紫外線殺菌燈照射3060mi n；操作結(jié)束后應(yīng)擦拭臺(tái)面，并再經(jīng)紫外線殺菌燈照射 處理，隨時(shí)保持室內(nèi)的無(wú)菌狀態(tài)。緩沖間是其它實(shí)驗(yàn)室與無(wú)菌室隔室的中間區(qū)域，它能保持無(wú)菌操作的環(huán)境，可與更 衣間為同一間，其間設(shè)吹風(fēng)機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱和小型低速離心機(jī)等。另外，無(wú)菌室應(yīng)避免日光直射，天花板不宜過(guò)高，一般為左右，以確保紫外線的消 毒作用。2、無(wú)菌工作臺(tái) 無(wú)菌工作臺(tái)又稱超凈工作臺(tái)，系在接種罩的基礎(chǔ)

18、上設(shè)計(jì)出來(lái)的無(wú)菌 工作臺(tái)。目前多采用垂直層流的氣流形式，通過(guò)變速離心風(fēng)機(jī)將負(fù)壓箱內(nèi)經(jīng)過(guò)預(yù)濾器過(guò) 濾的空氣壓入靜壓箱，再經(jīng)高效過(guò)濾器進(jìn)行二級(jí)過(guò)濾，從出風(fēng)面吹出的潔凈風(fēng)流 ，以一 定的和均勻的斷面風(fēng)速通過(guò)工作區(qū)時(shí)，將塵埃顆粒和微生物顆粒帶走，從而形成無(wú)塵無(wú) 菌的工作環(huán)境。使用時(shí)應(yīng)提前 50min 打開(kāi)紫外線殺菌燈， 30min 后關(guān)閉并啟動(dòng)送風(fēng)機(jī)。 凈化區(qū)內(nèi)嚴(yán)禁 存放不必要的物件，以保持潔凈氣流型不受干擾。應(yīng)定期用電風(fēng)速計(jì)測(cè)量工作區(qū)平均風(fēng) 速（每月1次），保持其在s。每23個(gè)月將預(yù)濾器中無(wú)紡布濾料拆下進(jìn)行清洗或予以 更換，每3個(gè)月用塵埃粒子計(jì)數(shù)器測(cè)定工作臺(tái)的潔凈度（w顆/L）和平板法測(cè)定其平均菌

19、落數(shù)（ 0 .5個(gè)/皿時(shí)）。當(dāng)加大風(fēng)機(jī)輸入電壓已不能使凈化工作區(qū)平均風(fēng)速達(dá)到規(guī)定參數(shù) 時(shí)，應(yīng)更換高效過(guò)濾器。六、醫(yī)院感染的微生物學(xué)監(jiān)測(cè)（醫(yī)院見(jiàn)習(xí)）（一） 壓力蒸氣滅菌效果的監(jiān)測(cè)目前應(yīng)用的壓力蒸氣滅菌器有兩種：一種是普通的下排氣式壓力蒸氣滅菌器，另一種是近年來(lái)出現(xiàn)的預(yù)真空高壓蒸氣滅菌器。前者一次滅菌全過(guò)程需時(shí)70min,而后者只需 20mi n。對(duì)于壓力蒸氣滅菌效果的檢查包括：1操作步驟檢查遵守操作規(guī)程，儀表的檢查（壓力表、留點(diǎn)溫度計(jì)、溫度記錄、定時(shí)器等）；2、 化學(xué)指標(biāo)檢查應(yīng)用指示劑顏色的改變進(jìn)行監(jiān)測(cè)。如三 M指示紙；某些物質(zhì)的 熔解，如琥珀酸酐120C熔解、苯甲酸121123C熔解。3、 生

20、物指標(biāo)的監(jiān)測(cè)為直接檢查滅菌效果，通常應(yīng)用嗜熱脂肪芽胞桿菌（NCTCI0003或ATCC7953, SSIK 31），有市售商品藥片供應(yīng)，菌片含菌量為5X1056/片，此菌在121C ± 0.5 C飽和蒸汽中存活時(shí)間39min,殺滅時(shí)間為v 19min。滅菌前于滅菌器中選擇五 點(diǎn)放置（通常將菌片放于小試管中，小試管置于滅菌器不同位置），滅菌后以無(wú)菌手續(xù)將菌片取出，放于溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基中于 55C培養(yǎng)48h。如培養(yǎng)基不變色，外觀澄 清說(shuō)明無(wú)細(xì)胞生長(zhǎng)；如外觀混濁且培養(yǎng)基變?yōu)辄S色則說(shuō)明有菌生長(zhǎng)，滅菌不徹底，需查 找原因并重新滅菌。（二）紫外線殺菌效果的監(jiān)測(cè) 紫外線燈：常用于手術(shù)室、病房

21、、無(wú)菌室、嬰兒室等的空氣消毒，其消毒效果與照射的時(shí)間、距離和強(qiáng)度有關(guān)，一般要求燈管離地面約3米高處，照射12小時(shí)。 紫外線消毒效果監(jiān)測(cè)：包括日常監(jiān)測(cè)、紫外燈管照射強(qiáng)度監(jiān)測(cè)和生物監(jiān)測(cè)。日常監(jiān)測(cè)包括燈管應(yīng)用時(shí)間、累計(jì)照射時(shí)間和使用人簽名。對(duì)新的和使用中的紫外燈管應(yīng)進(jìn)行 照射強(qiáng)度監(jiān)測(cè)，新燈管的照射強(qiáng)度不得低于100uW/c使用中燈管不得低于70uW/cm照射強(qiáng)度，監(jiān)測(cè)應(yīng)每半年一次。生物監(jiān)測(cè)必要時(shí)進(jìn)行，經(jīng)消毒后的物品或空氣中的自然 菌應(yīng)減少以 上，人工染菌殺滅率應(yīng)達(dá)到。生物學(xué)監(jiān)測(cè)應(yīng)用枯草芽胞桿菌黑色變種 （ATCC9372）,有市售菌片供應(yīng)，含菌量為 1056/片。（三）消毒劑的使用監(jiān)測(cè)1、 消毒劑鑒

22、定試驗(yàn)包括消毒劑定性試驗(yàn)和消毒劑定量消毒試驗(yàn)。2、 消毒劑使用過(guò)程中污染菌的監(jiān)測(cè)以及常用消毒劑的中和劑。（四）微生物污染監(jiān)測(cè)1、 物體表面細(xì)菌污染監(jiān)測(cè) 采樣方法為應(yīng)用大小為5cmX 5cm的正方形無(wú)菌規(guī)格扳， 放于物體表面，用浸有生理鹽水的棉拭子在規(guī)格扳內(nèi)往返涂抹 10次，將取完標(biāo)本的棉拭 子放入盛有定量無(wú)菌鹽水的試管中，之后進(jìn)行稀釋數(shù)菌并計(jì)算出細(xì)菌的數(shù)量（可用傾碟法），按衛(wèi)生部要求醫(yī)院各類(lèi)病房物體表面細(xì)菌數(shù)不得超過(guò)8個(gè)/cm3。計(jì)算公式如下：菌落數(shù)/cm2=F均平板菌落數(shù)x 2、空氣中細(xì)菌監(jiān)測(cè)室內(nèi)空氣中微生積的發(fā)生源主要為人和動(dòng)物。人可不斷地從呼 吸道、消化道、皮膚、毛發(fā)等排出微生物進(jìn)入空氣

23、中。一般情況下，人體排菌量每分鐘 不超過(guò)1000個(gè)，但患者的排泄物和分泌物，如飛沫、痰液等含有大量的病原菌，可嚴(yán)重 污染空氣和物體表面。當(dāng)人們?cè)谶M(jìn)行各種工作時(shí)也會(huì)污染空氣，如醫(yī)療操作、醫(yī)療用品 和衛(wèi)生用品生產(chǎn)、微生物試驗(yàn)、穿衣、鋪床等都可使微生物進(jìn)入空氣中。空氣中微生物學(xué)監(jiān)測(cè)是通過(guò)空氣采樣、細(xì)菌培養(yǎng)來(lái)了解各種場(chǎng)所空氣中所含微生物 的數(shù)量，從而評(píng)價(jià)衛(wèi)生狀況，以便有的放矢地采取對(duì)策。此外，通過(guò)對(duì)某種消毒措施使用前后的采樣及分析，以評(píng)價(jià)消毒效果。根據(jù)采樣原理可將采樣方法分為沉降、固體撞擊、液體沖擊和過(guò)濾4種。本實(shí)驗(yàn)介紹自然沉降平板采樣法用于細(xì)菌總數(shù)的檢測(cè)。其中應(yīng)用重力沉降作用捕獲空氣中的氣溶 膠粒子是沉降法中最簡(jiǎn)便的方法?！静牧稀糠蛛x培養(yǎng)基：營(yíng)養(yǎng)瓊脂平