甘油果糖注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的建立【藥學(xué)論文開題報(bào)告】

1、藥學(xué)論文甘油果糖注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的建立作者：孟麗麗，張琳，葉琳，龔文明，鄧驥【關(guān)鍵詞】廿油果糖注射液；，細(xì)菌內(nèi)毒素；，熱原摘要：目的硏究甘油果糖注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查（bet）的干擾實(shí)驗(yàn)，建立 用（bet）代替熱原檢查（pt）。方法根據(jù)中國藥典2005年版h部收載的細(xì) 菌內(nèi)毒素檢查法的要求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果將甘油果糖注射液經(jīng)2倍稀釋可消除干擾 因素，用標(biāo)示靈敏度為0.25euml-1的蜜試劑檢測(cè)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查是有效的。 結(jié)論可以用細(xì)菌內(nèi)毒索檢查法代替家兔法來控制甘油果糖注射液的質(zhì)量。關(guān)鍵詞：甘油果糖注射液；細(xì)菌內(nèi)毒素；熱原abstract ： objectiveto study the int

2、erference factors of bet for glycerol and fructose injection and establish a method for bacterial endotoxin test(bet)instead of the pyrogen test(pt)methodsthe experiment was implemented according to the loacterial test endotoxins in china pharmacopoeia (ii ,2005cd).rcsultsthc test showed that the in

3、terference elements could be excluded by dilut ing glycerol and fructose inj ect ion 2 times,and it was effective that endotoxin could be tested by amebocyte lysate wi th accuracy of 0.25eu/ml .conclusionbacterial endotoxin test can be used in place of rabbit method for pyrogen monitor of glycerol a

4、nd fructose inject ion.key words : glycerol and fructose inject ion ； bacterial endotoxin ； pyrogen甘油果糖注射液為含有甘油、果糖和氯化鈉的注射液，是安全而有效的滲透 性脫水劑。主要適用于腦血管病、腦外傷、腦腫瘤、顱內(nèi)炎癥及其他原因引起的 急慢性顱內(nèi)壓增高、腦水腫等癥。中國藥典2005年版h部規(guī)定該注射液用 家兔法做熱原檢查。細(xì)菌內(nèi)遠(yuǎn)素檢查法檢查藥品中的細(xì)菌內(nèi)逆素，與傳統(tǒng)的家兔 法相比，具有靈敏度高、重現(xiàn)性好、樣品用量少、時(shí)間短、費(fèi)用低等優(yōu)點(diǎn)，本實(shí) 驗(yàn)探討以細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法取代熱原檢查法檢測(cè)甘油果

5、糖注射液的可行性。1試藥與儀器1.1試藥賞試劑（tal），靈敏度0.25eu規(guī)格0.1 ml/支，批號(hào)050715廈門鯊試劑廠；靈敏度0.25eu mll，規(guī)格0 .lml/支，批號(hào)050820,湛江安度斯生物有限公司。細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品，10eu/支，批號(hào)050621，廈 門賞試劑廠。細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（bet水），2 ml/支，批號(hào)050110，廈門賞 試劑廠。甘油果糖注射液:250 ml，批號(hào)051011，051203，051229，西安萬 隆制藥有限公司。1.2儀器電熱恒溫水浴箱（江蘇沙洲醫(yī)療器械廠）；旋渦混合器（上海滬 西分析儀器廠）。實(shí)驗(yàn)用玻璃器皿經(jīng)180°c烘烤2 h

6、以上。2方法與結(jié)果12.1樣品細(xì)菌內(nèi)毒素限値確定根據(jù)l=k/m，其中k二5oeu（kgh）1，它 是細(xì)菌內(nèi)毒素的致熱閾；m為本品熱原檢查的兔劑量210 mg - kg-1 »故 l=km二5/10二0.5eu mll 。22樣品最大有效稀釋倍數(shù)的確定市售tal常用靈敏度（入）在0.5 eu mll0.03 eu范圍內(nèi)，根據(jù)mvi上入/l得mvd0.5為1倍，mvd0.25為2 倍，mvd0.03 為 16.7 倍。2.3 tal靈敏度復(fù)核實(shí)驗(yàn)按中國藥典2005年版h部附錄操作，對(duì)標(biāo)示 靈敏度為0.25 euml1的兩批tal進(jìn)行復(fù)核。結(jié)果見表1。表1 tal靈敏度復(fù)核結(jié)果（略）表1結(jié)

7、果表明，兩批tal靈敏度復(fù)核結(jié)果入c均在0520入（即0125 0.5 eumll）間，符合規(guī)定，可用于實(shí)驗(yàn)。24樣品干擾預(yù)實(shí)驗(yàn)為排除甘油果糖注射液本身對(duì)tal與細(xì)菌內(nèi)毒素凝膠 反應(yīng)可能存在的干擾，分取供試品原液和1 ： 2，1 ：4稀釋液將細(xì)菌內(nèi)毒素工作 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成2入（0.5eumll）濃度，用入二0.25eumll的tal進(jìn)行實(shí)驗(yàn)， 同時(shí)做陽性和陰性對(duì)照。結(jié)果見表2。表2樣品干擾預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）表2結(jié)果表明，甘油果糖注射液原液對(duì)tal凝膠反應(yīng)存在抑制作用，而1 ：2，1 ： 4稀釋液則無干擾。25樣品干擾實(shí)驗(yàn)經(jīng)預(yù)試，本品2倍稀釋液對(duì)實(shí)驗(yàn)無干擾作用，故以2倍 樣品稀釋液進(jìn)行干擾實(shí)驗(yàn)。本文

8、選用3個(gè)批號(hào)經(jīng)熱原檢查合格的樣品，用bet 水將其2倍稀釋，選用0.25 eum 11的鯊試劑，觀察對(duì)實(shí)驗(yàn)有無干擾作用。按 標(biāo)準(zhǔn)1規(guī)定，用eet水和2倍的樣品稀釋液將同一支細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品 分別制成含細(xì)菌內(nèi)毒素2.0，1.0，0.5，0.25a 4種濃度的內(nèi)毒素溶液，分別用 上述兩個(gè)廠家的tal觀察樣品在2倍濃度時(shí)對(duì)實(shí)驗(yàn)的干擾情況，每一濃度平行做 4管，同時(shí)另取bet水和2倍樣品稀釋液各做兩支陰性對(duì)照。結(jié)果見表3。表3樣品（2倍稀釋液）干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）表3結(jié)果表明,es，et均在0.52.0入范圍內(nèi)且es與et的比値在0.520范圍內(nèi)，說明3批樣品經(jīng)2倍稀釋對(duì)不同廠家的tal均無干擾作用

9、。26樣品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查將3批樣品分別用bet水稀釋2倍濃度，用標(biāo)示 靈敏度為0.25 eummtal （批號(hào)050715，050820）按中國藥典2005年版 ii部附錄操作。結(jié)果3批樣品均為合格，與家兔檢查結(jié)果一致。結(jié)果見表4。表4樣品細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)結(jié)果（略）3討論藥物能否采用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的先決條件是證明其在滿足限度檢查要求濃 度下對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素不產(chǎn)生干擾作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，將甘油果糖注射液稀釋2 倍'選用靈敏度為0.25 eumlltal進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素實(shí)驗(yàn)不產(chǎn)生干擾'可用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法代替家兔法。細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法具有靈敏度高，重現(xiàn)性好，快速、 簡(jiǎn)便，費(fèi)用低等優(yōu)點(diǎn)，能快速準(zhǔn)確地檢出熱原。蚩試劑檢測(cè)甘油果糖注射液的熱 原是可行的。甘油采糖注射液的細(xì)菌內(nèi)毒