牙周組織發(fā)育期上皮剩余組織學(xué)觀察

1、牙周組織發(fā)育期上皮剩余組織學(xué)觀察【摘要】目的：觀察牙周組織形成過(guò)程中上皮剩余細(xì)胞 的組織形態(tài)、細(xì)胞增殖凋亡。方法：tunel (tdt-mediated-dutp nick end labeling, tunel)法原位 細(xì)胞凋亡檢測(cè)牙周組織發(fā)育中上皮剩余細(xì)胞凋亡的情況。sp 免疫組化法檢測(cè)增殖核抗原(pcna)和凋亡抑制基因bel-2、 骨橋素(opn)和骨涎蛋白(bsp)的表達(dá)。結(jié)果：牙周膜牙 骨質(zhì)側(cè)可見(jiàn)上皮剩余(the epithelial rest of malassez) 沿牙骨質(zhì)表面成簇分布，根分叉和牙頸部較多，細(xì)胞數(shù)量不 等，可見(jiàn)不規(guī)則核，簇內(nèi)細(xì)胞相互重疊、排列無(wú)規(guī)則，tunel

2、 結(jié)果示上皮剩余中可找到凋亡陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞。免疫組化可見(jiàn) 上皮剩余細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)0pn,但pcna和bsp在此期上皮剩余 細(xì)胞中為陰性表達(dá)。結(jié)論：在牙周發(fā)育過(guò)程中，伴隨牙槽骨 的改建和牙周膜纖維束走向的調(diào)整，上皮剩余經(jīng)歷塑形過(guò) 程，細(xì)胞凋亡在這一過(guò)程中發(fā)揮重要作用。上皮剩余細(xì)胞的 0pn陽(yáng)性表達(dá)提示其在此過(guò)程中可能參與牙骨質(zhì)的發(fā)育。【關(guān)鍵詞】上皮剩余；細(xì)胞凋亡；牙周發(fā)育上皮剩余是成熟牙周膜中唯一的上皮結(jié)構(gòu)，上皮剩余的 在牙周組織修復(fù)再生、內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定等方面的可能作用已得更 多研究人員的重視1,但目前對(duì)上皮剩余的研究仍比較匱 乏，本文觀察牙周組織發(fā)育期的上皮剩余細(xì)胞形態(tài)分布，研 究該期上皮剩余細(xì)胞的增

3、殖、凋亡及opn和bsp的表達(dá)。1材料與方法1. 1 試劑與儀器原位細(xì)胞凋亡試劑盒(roche german)； 0pn 和 bsp 多克隆抗體由 larry w. fisher 博士 (national institute of dental and craniofacial research, maryland, usa)饋贈(zèng)；pcna 和 bcl-2 單克隆抗 體、sp免疫組化試劑盒、dab顯色劑(北京中杉)；tris/hci (sigma usa),蛋白酶 k (merk german)； olympus 顯微鏡 及照相系統(tǒng)(japan)。1.4 細(xì)胞凋亡檢測(cè)采用原位末端標(biāo)記 (tdt

4、-mediated-dutp nick end labeling, tunel)法，石 蠟切片常規(guī)脫蠟水化至水，按照細(xì)胞凋亡原位檢測(cè)試劑盒說(shuō) 明書(shū)操作，常規(guī)脫水封片，鏡下觀察照相。以pbs液代替tunel 反應(yīng)液作陰性對(duì)照。凋亡細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)位于細(xì)胞核，為覆蓋 整個(gè)細(xì)胞核的棕黃色或褐色著色。2結(jié)果2. 1 he染色上皮剩余細(xì)胞靠近牙骨質(zhì)表面呈簇狀分 布，主要分布于牙頸部和根分叉，簇內(nèi)細(xì)胞數(shù)量不等，排列 無(wú)規(guī)則，相互重疊，部分細(xì)胞界限不清，胞核不規(guī)則呈較強(qiáng) 的嗜蘇木精染色(圖1)。3討論上皮根鞘(hertwig' s epithelial root sheath)的 誘導(dǎo)功能結(jié)束后，發(fā)生斷

5、裂，部分上皮細(xì)胞離開(kāi)根面，遷入 牙周膜，形成上皮剩余。牙周發(fā)育期牙槽骨改建活躍、牙周 膜主纖維走向調(diào)整，上皮根鞘斷裂后最終形成上皮剩余，所 以上皮根鞘斷裂后所經(jīng)歷的更新或塑形形成上皮剩余也是 牙周組織正常發(fā)育的一部分。本研究結(jié)果表明，牙周組織發(fā) 育過(guò)程中，上皮剩余細(xì)胞與牙周組織中的成骨細(xì)胞和成纖維 細(xì)胞一樣都可觀察到細(xì)胞凋亡。成熟的牙周組織中的上皮剩 余細(xì)胞在受到炎癥等信號(hào)刺激后呈現(xiàn)增殖活性，可參與牙源 性囊腫的發(fā)生2。牙周組織發(fā)育期上皮剩余細(xì)胞可發(fā)生細(xì) 胞凋亡，但我們研究結(jié)果未發(fā)現(xiàn)此時(shí)上皮剩余細(xì)胞出現(xiàn)明顯 的增殖活性，提示其可能缺乏相關(guān)刺激因素，從而為表現(xiàn)明 顯增殖活性。有研究證實(shí)，伴隨牙齒

6、萌出，建合期在咬合力 作用下上皮剩余表現(xiàn)出明顯增殖的活性3。細(xì)胞培養(yǎng)證實(shí)上皮剩余細(xì)胞可分泌前列腺素 (prostaglandins) 和骨吸收因子(bone resorbing factor),從而 認(rèn)為上皮剩余可能有抑制骨性結(jié)合，維持牙周膜間隙的作用 4。hasegawa等5發(fā)現(xiàn)在牙骨質(zhì)修復(fù)中，上皮剩余細(xì)胞表 現(xiàn)pcna活性，其可能參與牙骨質(zhì)的修復(fù)。0pn和bsp都是骨 礦化相關(guān)因子，在骨質(zhì)的形成和礦化中發(fā)揮重要作用，這些 骨礦化相關(guān)蛋白可能在牙骨質(zhì)的形成中發(fā)揮一定作用，有研 究已證實(shí)0pn在牙骨質(zhì)的形成發(fā)揮重要作用6。本研究結(jié) 果證實(shí)，牙周發(fā)育期的上皮剩余細(xì)胞也表達(dá)opn,與他們的 實(shí)驗(yàn)結(jié)

7、果相一致。上皮剩余并不是完全無(wú)用的剩余結(jié)構(gòu)，在 某些特定時(shí)期或刺激因素下可表現(xiàn)出積極的生物學(xué)性狀，從 而發(fā)揮某些生物學(xué)功能，不過(guò)其機(jī)制有待深入研究。參考文獻(xiàn)1 haku k, muramatsu t, hara a, et al. epithelial cell rests of malassez modulate cell proliferation， differentiation and apoptosis via gap junctional communicationunder mechanical stretching invitro j. bull tokyo dent coll

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