土壤磷酸酶(酸性、中性和堿性磷酸酶

1、土壤磷酸酶(酸性、中性和堿性磷酸酶1.土壤有機磷轉(zhuǎn)化受多種因子制約，尤其是磷酸酶的參與，可加速有機磷的脫磷 速度。在PH4-9的土壤中均有磷酸酶。積累的磷酸酶對土壤磷素的有效性具有重要作用。研究證明，磷酸酶與土壤碳、氮含量呈正相關(guān)，與有效磷含量及pH也有關(guān)。磷酸酶活性 是評價土壤磷素生物轉(zhuǎn)化方向與強度的指標。2.Kroll等(1955)最早提出用苯基磷酸鹽作基質(zhì)，以酚的釋放量表示磷酸酶活 性。測定磷酸酶主要根據(jù)酶促作用生成的有機基團量或無機磷量訃算磷酸酶活性。前一 種通稱為有機基團含量法，是LI前較為常用的測定磷酸酶的方法。后一種稱為無機磷含量 法。研究證明，磷酸酶有三種最適pH： 4-5,

2、6-7和8-10o所以，測定酸性、中性 和堿性反應(yīng)土壤的磷酸酶，要提供相應(yīng)的pH緩沖液才能測出該土壤的磷酸酶最大活 性。測定磷酸酶常采用的pH緩沖體系有醋酸鹽緩沖液(pH5. 0-5.4),檸檬酸鹽緩沖液(PH7.0),三疑中基氨基中烷緩沖液(pH7. 0-8.5)，硼酸緩沖液(pH9-10)。測定磷酸酶時，用各種磷酸一酯作為基質(zhì)。常用的基質(zhì)有苯磷酸二鈉、酚酥磷 酸鈉、甘油磷酸鈉、ci或B蔡酚磷酸鈉、p-硝基苯磷酸鈉等。（用緩沖液配制）；取0. 125g 2. 6-二漠苯釀氯酰亞胺，用10mL 96%乙醇溶解，貯于棕色瓶中，存放在冰箱里。保存的黃色溶液未變褐色之前均可使 用；一取血重蒸酚溶于蒸

3、懈水中，稀釋至1L,貯于棕色瓶中；一取10mL酚原液稀釋至1L （每毫升含0.01毫克酚）；取1、3、5、7、9、11和13mL酚工作液，置于50mL容量瓶中，每瓶加入5mL緩沖液和4滴氯代二漠對苯醍亞胺試劑，顯色后稀釋至刻度，即得0.0002、0.0006、0.0010、0.0014、T濃度的酚標準溶液梯度。30min后比色測定。繪制標準曲0. 0018、0. 0022 和 0.0026mg?g線。5g風干土置于200mL三角瓶中，加2. 5mL 'P苯，輕搖13min后，加入20mL0.5%磷酸苯二鈉（酸性磷酸酶用醋酸鹽緩沖液；中性磷酸酶用檸檬酸鹽緩沖液；堿性磷 酸酶用硼酸鹽緩沖液），仔細搖勻后放入恒溫箱，在37?下培養(yǎng)24h。后于培養(yǎng)液中加100mL0.3%硫酸鋁溶液并過濾。吸取3mL濾液于50mL容量瓶中，然后按繪制標準曲線所述方法顯色。用硼酸 緩沖液時,呈現(xiàn)藍色，在風光光度計上于660nm處比色。磷酸酶活性，以24h后lg 土壤中釋放處的酚的毫克數(shù)表示。cts, , 50, 1 酚()=mgg, m-1 一標準曲線上查得的酚濃度,mg?mL：顯色液體積，mL：一分取倍數(shù)(