高中生物___檢測生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質(zhì)

1、第二章第二章 細(xì)胞的分子組成細(xì)胞的分子組成第第6 6節(jié)節(jié) 有機化合物及生物大分子有機化合物及生物大分子實驗實驗1：檢測生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質(zhì)：檢測生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質(zhì)實驗：檢測生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質(zhì)實驗：檢測生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質(zhì)實驗原理：實驗原理：某些化學(xué)試劑能夠使生物組織中的有關(guān)某些化學(xué)試劑能夠使生物組織中的有關(guān)有機化合物產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)。有機化合物產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)。化學(xué)試劑化學(xué)試劑+ +有機化合物有機化合物特定的顏色特定的顏色還原糖還原糖 + 斐林試劑斐林試劑 磚紅色沉淀磚紅色沉淀脂肪脂肪 + 蘇丹蘇丹（或蘇丹（或蘇丹）染液）染液橘黃色（或紅色）橘黃

2、色（或紅色） 蛋白質(zhì)蛋白質(zhì) + 雙縮脲試劑雙縮脲試劑紫色紫色淀粉淀粉 + 碘碘藍(lán)色藍(lán)色水浴加熱水浴加熱一、可溶性還原糖的檢測：一、可溶性還原糖的檢測：（1）原理：還原糖）原理：還原糖 + 斐林試劑斐林試劑 磚紅色沉淀。磚紅色沉淀。（2）選材：蘋果、梨、白蘿卜。含糖量較高，顏色為）選材：蘋果、梨、白蘿卜。含糖量較高，顏色為白色或近于白色的植物組織。白色或近于白色的植物組織。（3）檢測過程：）檢測過程：水浴加熱水浴加熱振蕩混勻振蕩混勻5065水浴水浴加熱加熱2min2mL組織組織樣液樣液剛配制的斐剛配制的斐林試劑林試劑2mL呈現(xiàn)淺藍(lán)色呈現(xiàn)淺藍(lán)色變成磚紅色（變成磚紅色（Cu2O）還原糖：含有半縮醛羥

3、基的糖類，主要是葡萄糖、果糖和還原糖：含有半縮醛羥基的糖類，主要是葡萄糖、果糖和麥芽糖。蔗糖、淀粉和纖維素屬于非還原糖。麥芽糖。蔗糖、淀粉和纖維素屬于非還原糖。 當(dāng)質(zhì)量濃度為當(dāng)質(zhì)量濃度為0.1g/mL的氫氧化鈉溶液與質(zhì)量的氫氧化鈉溶液與質(zhì)量濃度為濃度為0.05g/mL的硫酸銅溶液混合后，立即生成淡的硫酸銅溶液混合后，立即生成淡藍(lán)色的藍(lán)色的Cu（OH）2懸濁液。懸濁液。 Cu（OH）2與葡萄糖、與葡萄糖、果糖、麥芽糖等可溶性還原糖共熱，能夠生成磚紅果糖、麥芽糖等可溶性還原糖共熱，能夠生成磚紅色的色的Cu2O沉淀。因此，利用該反應(yīng)，可證明樣液中沉淀。因此，利用該反應(yīng)，可證明樣液中含可溶性還原糖。含

4、可溶性還原糖。RCHO+2Cu(OH)RCHO+2Cu(OH)2 2RCOOH+CuRCOOH+Cu2 2O+2HO+2H2 2O O甲液乙液等量混合，現(xiàn)用現(xiàn)配，切不可分開滴甲液乙液等量混合，現(xiàn)用現(xiàn)配，切不可分開滴加，或者久置后才用。加，或者久置后才用。制備組織樣液制備組織樣液梨或蘋果梨或蘋果研磨研磨取取5g，放入研缽中，放入研缽中洗凈、去皮、切塊洗凈、去皮、切塊過濾過濾濾液濾液（用單層紗布）（用單層紗布）顯色反應(yīng)顯色反應(yīng) 向試管中加入向試管中加入2ml組織樣液組織樣液向試管中加入向試管中加入2ml新配制的斐林試劑新配制的斐林試劑振蕩混勻振蕩混勻5065水水浴加熱浴加熱2min觀察現(xiàn)象觀察現(xiàn)象

5、 觀察溶液顏色變化：淺藍(lán)色觀察溶液顏色變化：淺藍(lán)色棕色棕色磚紅色磚紅色結(jié)論：生成磚紅色沉淀，說明梨或蘋果中含有還原糖。結(jié)論：生成磚紅色沉淀，說明梨或蘋果中含有還原糖。磚紅色的糖（還原糖）非（斐林試劑）常好吃磚紅色的糖（還原糖）非（斐林試劑）常好吃2 ml組織樣液組織樣液1 ml新配制的斐林試劑新配制的斐林試劑50 65水浴加熱水浴加熱約約2min觀察顏色變化觀察顏色變化磚紅色磚紅色淺藍(lán)色淺藍(lán)色棕棕 色色【斐林試劑斐林試劑】：甲液：甲液：0.1g/mL的的NaOH溶液，乙液：溶液，乙液：0.05 g/mL的的CuSO4溶液，使用前等體積混合均勻（生成淺藍(lán)色溶液，使用前等體積混合均勻（生成淺藍(lán)色的

6、的Cu（OH）2懸濁液），現(xiàn)配現(xiàn)用（時間一長，懸濁液），現(xiàn)配現(xiàn)用（時間一長，Cu（OH）2 沉淀在溶液底部無法發(fā)生反應(yīng)。且需要水浴加熱。沉淀在溶液底部無法發(fā)生反應(yīng)。且需要水浴加熱。還原糖的檢測結(jié)果還原糖的檢測結(jié)果斐林試劑與可溶性還原糖在水浴熱的條件下，生成磚紅色的斐林試劑與可溶性還原糖在水浴熱的條件下，生成磚紅色的Cu2O沉淀。沉淀。-CHO+Cu(OH)2懸濁液懸濁液-COOH+Cu2O（磚紅色磚紅色）二、脂肪的檢測二、脂肪的檢測（1）選材：經(jīng)浸泡去種皮的花生種子。）選材：經(jīng)浸泡去種皮的花生種子。（2）檢測過程：）檢測過程：制片制片選取最薄的切片置于潔凈的載玻片中央選取最薄的切片置于潔凈的載

7、玻片中央制成臨時裝片：滴制成臨時裝片：滴1 2滴蒸餾水，蓋上蓋玻片滴蒸餾水，蓋上蓋玻片染色：在薄片上滴加染色：在薄片上滴加2 3滴蘇丹滴蘇丹染液染液，染色，染色2 3min洗去浮色：用吸水紙吸去染液，滴加體積分?jǐn)?shù)為洗去浮色：用吸水紙吸去染液，滴加體積分?jǐn)?shù)為50%的酒精的酒精1 2滴滴鏡檢觀察：鏡檢觀察：在低倍鏡下尋找到已著色的在低倍鏡下尋找到已著色的圓形小顆粒，然后用高倍鏡觀察。圓形小顆粒，然后用高倍鏡觀察。蘇三（蘇丹蘇三（蘇丹）送了我一個橘黃色的胭脂（脂肪）送了我一個橘黃色的胭脂（脂肪）切片：切片：花生種子（浸泡花生種子（浸泡h），去皮，將子葉削成薄片。），去皮，將子葉削成薄片。視野中視野中

8、有橘黃有橘黃色顆粒色顆粒橘黃色小圓顆粒橘黃色小圓顆粒即為脂肪顆粒即為脂肪顆粒脂肪脂肪 + 蘇丹蘇丹（或蘇丹（或蘇丹）染液）染液 橘黃色（或紅色）橘黃色（或紅色）注意事項：注意事項：（1）若用花生種子作實驗材料，必須提前浸泡若用花生種子作實驗材料，必須提前浸泡34小時，浸小時，浸泡時間短了，不容易切片，浸泡時間過長，則組織太軟，切泡時間短了，不容易切片，浸泡時間過長，則組織太軟，切下的薄片不易成形，切片要盡可能的薄。下的薄片不易成形，切片要盡可能的薄。（2）染色后一定要用）染色后一定要用50%的酒精溶液洗去浮色（酒精能溶解的酒精溶液洗去浮色（酒精能溶解蘇丹蘇丹），染色和洗浮色時間不宜過長。），染

9、色和洗浮色時間不宜過長。三、蛋白質(zhì)的檢測：三、蛋白質(zhì)的檢測：（1）原理：蛋白質(zhì)）原理：蛋白質(zhì) + 雙縮脲試劑雙縮脲試劑 紫色絡(luò)合物紫色絡(luò)合物（2）選材：黃豆、雞蛋清（稀釋）、牛奶、豆?jié){）選材：黃豆、雞蛋清（稀釋）、牛奶、豆?jié){（3）檢測過程：）檢測過程：2 ml組織樣液組織樣液2 ml雙縮脲試劑雙縮脲試劑A液，搖勻液，搖勻3-4滴雙縮脲試劑滴雙縮脲試劑B液，搖勻液，搖勻觀察顏色變化觀察顏色變化紫色紫色雙（雙縮脲）子（紫色）彈（蛋白質(zhì)）雙（雙縮脲）子（紫色）彈（蛋白質(zhì)） 將尿素加熱，兩分子尿素放出一分子氨而縮合成雙縮脲。將尿素加熱，兩分子尿素放出一分子氨而縮合成雙縮脲。反應(yīng)式為反應(yīng)式為: 雙縮脲（

10、雙縮脲（H2NOC-NH-CONH2）在）在堿性堿性環(huán)境（環(huán)境（NaOH）中）中能能和和Cu2+作用生成紫作用生成紫色的絡(luò)色的絡(luò)化物，這個反應(yīng)叫做雙縮脲反應(yīng)?；?，這個反應(yīng)叫做雙縮脲反應(yīng)。蛋蛋白質(zhì)分子中含有的肽鍵結(jié)構(gòu)與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似，因此，蛋白白質(zhì)分子中含有的肽鍵結(jié)構(gòu)與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似，因此，蛋白質(zhì)也可質(zhì)也可與雙縮脲試劑發(fā)生顏色與雙縮脲試劑發(fā)生顏色反應(yīng)。反應(yīng)。雙縮脲雙縮脲雙縮脲試劑雙縮脲試劑無色無色紫色紫色（創(chuàng)造堿性條件）（創(chuàng)造堿性條件）（提供（提供Cu2+）雙縮脲試雙縮脲試劑劑B 3-4滴滴雙縮脲試雙縮脲試劑劑A 2mL2mL組織組織樣液樣液在堿性條件（在堿性條件（NaOH）下，蛋白質(zhì)中的肽鍵

11、）下，蛋白質(zhì)中的肽鍵與與Cu2作用生生紫色絡(luò)合物。因此，操作時，應(yīng)先加作用生生紫色絡(luò)合物。因此，操作時，應(yīng)先加A再加再加B，且且A多多B少，如果少，如果B過量，過量， Cu2的藍(lán)色就會遮蓋生成的紫色。的藍(lán)色就會遮蓋生成的紫色。制備組織樣液制備組織樣液黃豆組織樣液（或雞蛋清稀釋液）黃豆組織樣液（或雞蛋清稀釋液）黃豆黃豆浸泡浸泡研磨研磨過濾過濾濾液濾液去皮、切片去皮、切片蛋清液蛋清液雞蛋雞蛋雞蛋清稀釋液雞蛋清稀釋液稀釋稀釋顯色反應(yīng)顯色反應(yīng)向試管中注入向試管中注入2ml組織樣液組織樣液向試管中注入向試管中注入2ml雙縮脲試劑雙縮脲試劑A加入加入3-4滴雙縮滴雙縮脲試劑脲試劑B觀察現(xiàn)象觀察現(xiàn)象觀察顏色

12、變化：無觀察顏色變化：無紫色紫色結(jié)論：加入雙縮脲試劑結(jié)論：加入雙縮脲試劑A后，顏色呈現(xiàn)為無色，加入后，顏色呈現(xiàn)為無色，加入B后，變?yōu)楹螅優(yōu)樽仙?，說明雞蛋清中有蛋白質(zhì)存在。紫色，說明雞蛋清中有蛋白質(zhì)存在。蛋白質(zhì)的檢測結(jié)果蛋白質(zhì)的檢測結(jié)果注意事項：注意事項：（1）如果用雞蛋清作為材料，則必須進(jìn)行充分稀釋，否則反應(yīng)）如果用雞蛋清作為材料，則必須進(jìn)行充分稀釋，否則反應(yīng)后的產(chǎn)物會粘固在試管內(nèi)壁上，使反應(yīng)不徹底，且試管不易洗后的產(chǎn)物會粘固在試管內(nèi)壁上，使反應(yīng)不徹底，且試管不易洗刷干凈。刷干凈。 （2）【雙縮脲試劑雙縮脲試劑】：A液液：0.1g/mL NaOH，B液：液：0.01g/mL CuSO4。先加

13、。先加A液后加液后加B液，且液，且B不能過量，不需要加熱。不能過量，不需要加熱。（3）過量的雙縮脲試劑）過量的雙縮脲試劑B會與試劑會與試劑A反應(yīng)，使溶液呈藍(lán)色，而反應(yīng)，使溶液呈藍(lán)色，而掩蓋生成的紫色。掩蓋生成的紫色。（4）先加入）先加入A液液2ml，搖勻；再加入，搖勻；再加入B液液3-4滴，搖勻。滴，搖勻。四、淀粉的檢測：四、淀粉的檢測：（2）選材：馬鈴薯勻漿）選材：馬鈴薯勻漿（1）原理：淀粉）原理：淀粉 + 碘碘 藍(lán)色藍(lán)色（3）檢測過程：）檢測過程：2 ml組織樣液組織樣液2滴碘液滴碘液觀察顏色變化觀察顏色變化藍(lán)色藍(lán)色藍(lán)（藍(lán)色）點（淀粉）點（碘）藍(lán)（藍(lán)色）點（淀粉）點（碘）制備組織樣液制備組

14、織樣液馬鈴薯塊莖馬鈴薯塊莖研磨研磨取取5g，放入研缽中，放入研缽中洗凈、去皮、切塊洗凈、去皮、切塊過濾過濾濾液濾液顯色反應(yīng)顯色反應(yīng)向試管中注入向試管中注入2ml組織樣液組織樣液加入加入5滴碘滴碘-碘化鉀碘化鉀觀察現(xiàn)象觀察現(xiàn)象觀察溶液顏色變化：無色觀察溶液顏色變化：無色藍(lán)色藍(lán)色結(jié)論：溶液變藍(lán)，說明馬鈴薯組織中有淀粉存在。結(jié)論：溶液變藍(lán)，說明馬鈴薯組織中有淀粉存在。鑒定物質(zhì)鑒定物質(zhì)生物材料生物材料所用試劑所用試劑顏色變化顏色變化還原糖還原糖脂肪脂肪蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)淀粉淀粉蘋果、梨、白蘿卜蘋果、梨、白蘿卜斐林試劑斐林試劑磚紅色沉淀磚紅色沉淀花生種子花生種子蘇丹蘇丹染液染液蘇丹蘇丹染液染液橘黃色橘黃色紅色

15、紅色豆?jié){、牛奶、雞蛋清豆?jié){、牛奶、雞蛋清雙縮脲試劑雙縮脲試劑紫色紫色面粉、馬鈴薯勻漿液面粉、馬鈴薯勻漿液碘液碘液藍(lán)色藍(lán)色注：鑒定還原糖需加熱；脂肪的鑒定不一定要用顯注：鑒定還原糖需加熱；脂肪的鑒定不一定要用顯微鏡，要觀察脂肪顆粒，則必須用顯微鏡。微鏡，要觀察脂肪顆粒，則必須用顯微鏡。五、觀察五、觀察DNA、RNA在細(xì)胞中的分布在細(xì)胞中的分布實驗原理：實驗原理：（1）DNA主要分布在細(xì)胞核內(nèi)，主要分布在細(xì)胞核內(nèi)，RNA大部分存在于細(xì)胞質(zhì)中。大部分存在于細(xì)胞質(zhì)中。（2）甲基綠和吡羅紅兩種染色劑對）甲基綠和吡羅紅兩種染色劑對DNA和和RNA的親和力不同，的親和力不同，甲基綠使甲基綠使DNA呈現(xiàn)綠色，

16、吡羅紅使呈現(xiàn)綠色，吡羅紅使RNA呈現(xiàn)紅色。呈現(xiàn)紅色。（3）利用甲基綠、吡羅紅混合染色劑將細(xì)胞染色，可以顯示）利用甲基綠、吡羅紅混合染色劑將細(xì)胞染色，可以顯示DNA和和RNA在細(xì)胞中的分布。在細(xì)胞中的分布。（4） 鹽酸能夠改變細(xì)胞膜的通透性，加速染色劑進(jìn)入細(xì)胞，鹽酸能夠改變細(xì)胞膜的通透性，加速染色劑進(jìn)入細(xì)胞，同時使染色體中的同時使染色體中的DNA和蛋白質(zhì)分離，有利于和蛋白質(zhì)分離，有利于DNA和染色劑結(jié)和染色劑結(jié)合。合。甲基綠使甲基綠使DNA呈現(xiàn)綠色，吡羅紅使呈現(xiàn)綠色，吡羅紅使RNA呈現(xiàn)紅色，通過觀呈現(xiàn)紅色，通過觀察兩種顏色出現(xiàn)的部位來判斷察兩種顏色出現(xiàn)的部位來判斷DNA和和RNA在細(xì)胞中的分布。

17、在細(xì)胞中的分布。方法步驟：方法步驟：（1）取材和制片）取材和制片在潔凈的載玻片上滴在潔凈的載玻片上滴1滴滴0.9%NaCl溶液溶液用消毒牙簽刮口腔內(nèi)側(cè)壁后涂抹在液滴上用消毒牙簽刮口腔內(nèi)側(cè)壁后涂抹在液滴上將涂有將涂有口腔上皮細(xì)胞口腔上皮細(xì)胞的載玻片在酒精燈上烘干的載玻片在酒精燈上烘干（2）水解：）水解：將烘干的載玻片放入盛有將烘干的載玻片放入盛有30 mL 8%鹽酸鹽酸的小燒杯中，的小燒杯中，30水浴保溫水浴保溫5 min（3）沖洗涂片：用蒸餾水的緩水流沖洗載玻片）沖洗涂片：用蒸餾水的緩水流沖洗載玻片10秒秒（4）染色）染色吸水紙吸去載玻片上的水分吸水紙吸去載玻片上的水分在載玻片上滴加兩滴在載玻

18、片上滴加兩滴2滴用吡羅紅甲基綠染色劑，染色滴用吡羅紅甲基綠染色劑，染色5分鐘分鐘吸去多余的染色劑，蓋上蓋玻片吸去多余的染色劑，蓋上蓋玻片（5）觀察：）觀察：先先低倍鏡：選染色均勻，色澤淺的區(qū)域，移到視野中央低倍鏡：選染色均勻，色澤淺的區(qū)域，移到視野中央 。后。后高倍鏡：觀察細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)的染色情況。高倍鏡：觀察細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)的染色情況。0.9%生理鹽水？生理鹽水？人口腔上皮細(xì)胞人口腔上皮細(xì)胞8%鹽酸？鹽酸？蒸餾水蒸餾水30水浴水浴吡羅紅甲基綠染色劑吡羅紅甲基綠染色劑取材取材水解水解沖洗沖洗染色染色觀察觀察思考與討論：思考與討論：（1）9%Nacl溶液的作用？溶液的作用？ 保持空腔上皮細(xì)胞的正常

19、形態(tài)。保持空腔上皮細(xì)胞的正常形態(tài)。（2） 8%鹽酸的作用？鹽酸的作用？ 殺死細(xì)胞，改變細(xì)胞膜的通透性，加速染色劑進(jìn)入細(xì)胞；殺死細(xì)胞，改變細(xì)胞膜的通透性，加速染色劑進(jìn)入細(xì)胞；使染色體中的使染色體中的DNA與蛋白質(zhì)分離，有利于與蛋白質(zhì)分離，有利于DNA與染色劑結(jié)合。與染色劑結(jié)合。（3）吡羅紅甲基綠染色劑要現(xiàn)用現(xiàn)配。該實驗不宜選用綠色）吡羅紅甲基綠染色劑要現(xiàn)用現(xiàn)配。該實驗不宜選用綠色植物葉肉細(xì)胞（有顏色）和其他有顏色的細(xì)胞（如雞血細(xì)胞）植物葉肉細(xì)胞（有顏色）和其他有顏色的細(xì)胞（如雞血細(xì)胞）作為實驗材料，因其會干擾顏色觀察。作為實驗材料，因其會干擾顏色觀察。雙縮脲反應(yīng)：含有兩個或兩個以上肽鍵的化合物與

20、堿性硫酸雙縮脲反應(yīng)：含有兩個或兩個以上肽鍵的化合物與堿性硫酸銅作用，生成藍(lán)紫色的復(fù)合物銅作用，生成藍(lán)紫色的復(fù)合物斐林試劑與雙縮脲試劑的比較斐林試劑與雙縮脲試劑的比較斐林試劑斐林試劑雙縮脲試劑雙縮脲試劑甲液甲液乙液乙液A液液B液液成分成分0.1 g/mL NaOH溶液溶液0.05 g/mL CuSO4溶液溶液0.1 g/mL NaOH溶液溶液0.01 g/mL CuSO4溶液溶液鑒定鑒定物質(zhì)物質(zhì)可溶性還原糖可溶性還原糖蛋白質(zhì)或多肽蛋白質(zhì)或多肽添加添加順序順序甲乙兩液等量混勻后立即甲乙兩液等量混勻后立即使用（現(xiàn)配現(xiàn)用）使用（現(xiàn)配現(xiàn)用）先加入先加入A液液1 mL，搖勻，搖勻，再加入再加入B液液4滴（不能過滴（不能過量），搖勻量），搖勻反應(yīng)反應(yīng)條件條件5065 水浴加熱水浴加熱不需加熱，搖勻即可不需加熱，搖勻即可反應(yīng)反應(yīng)現(xiàn)象現(xiàn)象樣液變磚紅色沉淀樣液變磚紅色沉淀樣液變紫色樣液變紫色斐林試劑用的是甲液和乙液，須現(xiàn)配現(xiàn)用，混合均勻，水斐林試劑用的是甲液和乙液，須現(xiàn)配現(xiàn)用，混合均勻，水浴加熱。雙縮脲試劑用的是浴加熱。雙縮脲試劑用的是A液和液和B液，先加液，先加A液，后滴液，后滴B液，不用水浴加熱。液，不用水浴加熱。比較項目比較項目斐林試劑斐林試劑雙縮脲試劑雙縮脲試劑不不同同點點使用方法使用方法甲液和乙液混合均勻后方可甲液和乙液混合均勻后方可使用，且使用，且現(xiàn)配現(xiàn)用現(xiàn)配現(xiàn)用使用時先加使用時