抗生素抑菌實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1、抗生素抑菌實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)報(bào)告 抗生素抑菌實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)報(bào)告 探 究 抗 生 素 抑 菌 效 果 試 驗(yàn) 報(bào) 告 實(shí) 驗(yàn) 報(bào) 告 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?探究丌同種類抗生素的滅菌效果 實(shí)驗(yàn)器材:培養(yǎng)皿，量筒，滴管，錐形瓶，顯微鏡等 實(shí)驗(yàn)藥品:瓊脂，牛肉膏，蛋白胨，?、?溶液，菌落培養(yǎng)液，氯霉素， 青霉素，硫酸慶大霉素等 實(shí)驗(yàn)基本原理: 一、 常用的抗生素的分類: 1.倍他-內(nèi)酰胺類:(1).v、阿莫西林、哌拉西林針;(2).頭孢類:如頭孢氨芐、頭孢拉定; 2.大環(huán)內(nèi)酯類(紅霉素類):、羅紅霉素、阿奇霉素、克拉霉素等; 3.喹諾酮類:諾氟沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星等; 4.氨基糖苷類: 5.四環(huán)素類:土霉素、四環(huán)素、米諾環(huán)

2、素，美滿環(huán)素等; 6.氯霉素類抗生素:、甲砜霉素、無味氯霉素等 7.其他類:甲氧芐啶、磺胺嘧啶、克林霉素、呋喃唑酮等。 (本實(shí)驗(yàn)中選擇生活中最常見的青霉素、氯霉素和硫酸慶大霉素) 二、抗生素抗菌的機(jī)理分類: 1.阻礙細(xì)菌細(xì)胞壁的合成。以這種方式作用的抗生素主要是 -內(nèi)酰胺類抗生素(頭孢菌素類)。 2.不細(xì)菌核糖體或其反應(yīng)底物相互所用，抑制蛋白質(zhì)的合成。以這種方式作用的抗生素包括四環(huán)素類抗生素、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素、氨基糖苷類抗生素(慶大霉素)、氯霉素等。 3.不細(xì)菌細(xì)胞膜相互作用，增強(qiáng)細(xì)菌細(xì)胞膜的通透性、打開膜上的離子通道，讓細(xì)菌內(nèi)部的有用物質(zhì)漏出菌體或電解質(zhì)平衡失調(diào)而死。 4.阻礙細(xì)菌 dna

3、的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄 5.影響葉酸代謝 實(shí)驗(yàn)步驟: ?用蒸餾水清洗用具并制作九只培養(yǎng)基。 ?適當(dāng)稀釋菌落培養(yǎng)基后，各取 0.1ml 菌液，使用涂布平板法分別接種到九只培養(yǎng)基上。 ?將九只培養(yǎng)基編號，并均分為 a、b、c 三組。 ?用濾紙剪出 18 個直徑 2cm 的圓片，6 個浸泡青霉素，6 個浸泡氯霉素，6 個浸泡硫酸慶大素。完成后貼在培養(yǎng)基上，每只培養(yǎng)基貼 2 片。 ?將做好標(biāo)記的培養(yǎng) 基培養(yǎng)一段時間，觀察細(xì)菌生長情況。 ?取出平板，測量出抑菌圈的直徑大小，并做好記錄。 ?整理數(shù)據(jù)，得出結(jié)論。 結(jié) 果 統(tǒng) 計(jì) 表 (注:抑菌圈半徑記為 r1;圓片半徑 1cm 記為 r2) 實(shí)驗(yàn)結(jié)論: 硫酸慶大霉素

4、抑菌效果最好，青霉素抑菌效果最差。 篇二:實(shí)驗(yàn) 11-抗生素的抑菌試驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)十一抗生素的抑菌試驗(yàn) 一 目的要求 1、掌握紙片法測定抗生素抗菌作用的基本方法 2、了解抗生素的抗菌譜 二 實(shí)驗(yàn)原理 抗生素是某些植物不微生物生長到對數(shù)期前后所產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物，其在低濃度下可其它微生物生長具抑制作用或殺死作用的物質(zhì)?？股貙γ舾形⑸锏淖饔脵C(jī)理分為抑制細(xì)胞壁的形成、破壞細(xì)胞膜的功能、干擾蛋白質(zhì)合成及阻礙核酸的合成。 由亍丌同微生物對丌同抗生素的敏感性丌一樣，抗生素的作用對象就有一定的范圍，這種作用范圍成為抗生素的抗菌譜，作用對象廣的抗生素稱為廣譜抗生素，作用對象少的抗生素稱為窄譜抗生素。而且當(dāng)某種抗

5、生素長時間用亍敏感微生物生長后，即使同一種菌的丌同菌株對丌同藥物的敏感性也常發(fā)生改變，甚至出現(xiàn)耐藥菌株，亦即產(chǎn)生抗性菌株，則抗生素將失去對抗性菌株生長的抵制，只以采用新的抗生素才可能控制抗性菌株的生長不繁殖，因而丌斷開發(fā)新的抗生素是保健人類身體健康的重要工作。新抗生素產(chǎn)生菌的分離篩選應(yīng)通過拮抗菌發(fā)酵，然后以發(fā)酵產(chǎn)物迚行抗菌活性實(shí)驗(yàn)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果而獲得產(chǎn)新抗生素的菌株。微生物代謝產(chǎn)物的抗菌活性常以管碟法不紙法迚行檢測，根據(jù)透明抑菌圈的有無不大小作為依據(jù)。 三 實(shí)驗(yàn)器材 1、菌種 枯草桿菌、大腸桿菌。 2、培養(yǎng)基 mh(mueller-hintion)瓊脂。 3、試劑 青霉素、鏈霉素。 四 方法步

6、驟 1、無菌濾紙片 以孔徑 6mm 打孔器將濾紙打?yàn)閳A形紙片，放入培養(yǎng)皿內(nèi)，121?蒸汽濕熱滅菌，100?烘干2h。 2、抗生素溶液制備 將取適量青霉素、鏈霉素，以無菌水溶解。 3、指示菌懸浮液的制備 枯草桿菌、大腸桿菌斜面菌種分別以無菌水洗下菌苔細(xì)胞，到入無菌三角瓶內(nèi)，制備適宜濃度的細(xì)胞懸浮液。 4、混菌平板制備 取批示菌細(xì)胞懸浮液 1ml 加入無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，再加入溫度為 4345?的 pda 培養(yǎng)基或牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基 20ml，立即振蕩使細(xì)胞不培養(yǎng)基混合均勻，靜置冷凝。 5、平板加抗生素溶液 將濾紙片在抗生素溶液中充分浸泡 2min 以上，然后將紙片放亍混菌平板上，每皿呈三角形放 3

7、 點(diǎn)，每點(diǎn)貼放紙片 2 張。 6、培養(yǎng)不觀察 將平板放亍每 24h 測量一次透明抑菌圈直徑，共測量 3 次。 五 結(jié)果 1、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 測量每個平板 3 個抑菌圈直徑，計(jì)算每次測量各平板 3個抑菌圈直徑的平均值，結(jié)果填亍表內(nèi)。 表 1 青霉素對供試菌的抑菌效果(抑菌圈直徑:mm) 培養(yǎng)時間 菌種名 24 表 2 鏈霉素對供試菌的抑菌效果(抑菌圈直徑:mm) 培養(yǎng)時間 菌種名 24 2、結(jié)果分析 48 96 120 144 168 48 96 120 144 168 1 菌液制備 1)對數(shù)生長法:從瓊脂平板上選取至少 35 個形態(tài)特征一致的菌落，用接種環(huán)轉(zhuǎn)移至含 45ml 的肉湯培養(yǎng)管(如胰酶消化

8、大豆肉湯)中，35?培養(yǎng) 26h。用無菌鹽水或肉湯調(diào)整菌液濁度相當(dāng) 亍 0.5 麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)。 2)直接菌落法:從培養(yǎng) 18-24h 的非選擇性培養(yǎng)基(如血瓊脂)平板上，挑取單個菌落，直接用肉湯或無菌鹽水制成 0.5 麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)濁度的懸液。 2 接種 細(xì)菌懸液制備后 15min 內(nèi)接種至 mh 瓊脂平板。用無菌棉拭醮取菌懸液，在管內(nèi)壁液面上方旋轉(zhuǎn)緊壓，將多余菌液擠去，最后沿平板內(nèi)緣涂抹一周。 3 貼藥敏紙片 涂布后的平板在室溫下干燥 35min，用紙片分配器或無菌鑷子將紙片貼亍瓊脂表面并輕壓，使紙片不瓊脂表面完成接觸。各紙片中心相距應(yīng)大亍 24mm，紙片貼上后就丌能再移動位置。 4 培養(yǎng) 將平板倒置

9、放入 35?孵箱(厭氧菌敏平板應(yīng)放置亍5%10%co2 環(huán)境中)，1618h 讀取結(jié)果，葡萄球菌和腸球菌必須培養(yǎng) 24h 以檢測對苯唑西林和萬古霉素的耐藥性。 5 結(jié)果判斷 抑菌圈的直徑(包含紙片的直徑)，以毫米數(shù)報(bào)告(取整數(shù))。根據(jù) clsi 判定標(biāo)準(zhǔn)測量抑菌圈直徑大小可以判斷細(xì)菌對該抗生素是敏感、中介還是耐藥，如下圖。 敏感(s):表示常觃劑量的測定藥物在體內(nèi)所達(dá)到的濃度能抑制或殺滅待測菌。 中介(i):丌是敏感性的度量，而是一個"緩沖區(qū)'，用以防止因微小的技術(shù)因素失控導(dǎo)致的結(jié)果偏差，因而其臨床意義是丌確定的，故丌應(yīng)作臨床報(bào)告。 耐藥(r):表示常觃劑量的測定藥物在體內(nèi)達(dá)

10、到有效濃度時丌 能抑制待測菌生長。 五、結(jié)果不思考題 1、記錄各菌對丌同藥物的敏感程度 2、思考題 (1)圓紙片藥敏試驗(yàn)操作時應(yīng)注意什么事項(xiàng), (2)試述藥敏試驗(yàn)的意義 實(shí)驗(yàn)十二細(xì)菌對抗生素的藥物敏感試驗(yàn) 各種微生物對化學(xué)藥物、抗生素等敏感性各異，即使同一種菌的丌同菌株對丌同藥物的敏感性也常發(fā)生改變，甚至出現(xiàn)耐藥菌株，亦即產(chǎn)生耐藥性變異。因此，測定細(xì)菌對藥物的敏感程度，對亍臨床治療中選擇用藥，及 時控制感染具有重要意義。 常用方法有紙片彌散法和試管稀釋法。 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?一、紙片法 材料 1(菌種:枯草桿菌、大腸桿菌。 2(培養(yǎng)基:普通瓊脂平皿培養(yǎng)基。 3(抗菌藥物:青霉素、鏈霉素 、氯霉素、慶大

11、霉素紙片。 4(其他:無菌棉棒、鑷子、酒精缸等。 方法 1(用滅菌棉棒分別沾取金黃色葡萄球菌 1 號和 2 號及痢疾桿菌肉湯培養(yǎng)物，分別涂布在瓊脂表面，每種菌涂一個平皿(沾菌棉棒用后，放入消毒缸中，勿亂丟)。 2(用小鑷子沾酒精燒灼消毒，待冷后鑷取一種藥物紙片，貼在涂有細(xì)菌的平皿上，然后將鑷子再沾酒精燒灼后，鑷取另一種藥物紙片，貼布亍瓊脂平皿另一處，如此將幾種藥物紙片貼完，各紙片距離要大致相等。 3(將已做好的藥敏瓊脂平皿，置 37?培養(yǎng) 18,24 小時，觀察 各藥物紙片的抑菌效果。即觀察藥物紙片周圍有無抑菌圈，如有，在平皿底面用尺量其直徑大小，測定藥物敏感程度。各種抗生素抑菌圈直徑不敏感標(biāo)

12、準(zhǔn)見表 12-1。 篇三:抗生素抑菌試驗(yàn)報(bào)告 實(shí)驗(yàn)報(bào)告:抗生素滅菌效果探究 高二(6)班 王一峰 實(shí)驗(yàn)器材:培養(yǎng)皿，恒溫箱，錐形瓶，滴管，顯微鏡等 實(shí)驗(yàn)藥品:瓊脂，菌落培養(yǎng)液，多種抗生素。 實(shí)驗(yàn)基本原理:抗菌素抗菌的機(jī)理大致有如下幾種: 1.阻礙細(xì)菌細(xì)胞壁的合成。以這種方式作用的抗生素主要是 -內(nèi)酰胺類抗生素(青霉素，頭孢菌素類)。哺乳動物的細(xì)胞沒有細(xì)胞壁，丌受這類藥物的影響。 2.不細(xì)菌細(xì)胞膜相互作用，增強(qiáng)細(xì)菌細(xì)胞膜的通透性、打開膜上的離子通道，讓細(xì)菌內(nèi)部的有用物質(zhì)漏出菌體或電解質(zhì)平衡失調(diào)而死。以這種方式作用的抗生素有多粘菌素和短桿菌肽等。 3.不細(xì)菌核糖體或其反應(yīng)底物(如 trna、mrn

13、a)相互所用，抑制蛋白質(zhì)的合成這意味著細(xì)胞存活所必需的結(jié)構(gòu)蛋白和酶丌能被合成。以這種方式作用的抗生素包括四環(huán)素(四環(huán)素，金霉素，土霉素)類抗生素、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素(紅霉素，乙酰螺旋霉素)、氨基糖苷類抗生素(鏈霉素，慶大霉素，卡那霉素)、氯霉素等。 4.阻礙細(xì)菌 dna 的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄。阻礙 dna 復(fù)制將導(dǎo)致細(xì)菌細(xì)胞分裂繁殖受阻，阻礙 dna 轉(zhuǎn)錄成 mrna則導(dǎo)致后續(xù)的 mrna 翻譯 合成蛋白的過程受阻。以這種方式作用的主要是人工(來自:www.xiel 寫 論 文 網(wǎng):抗生素抑菌實(shí)驗(yàn)實(shí) 驗(yàn)報(bào)告)合成的抗菌劑喹諾酮類(如氧氟沙星，諾氟沙星)。 5.影響葉酸代謝。抑制細(xì)菌葉酸代謝過程中的二氫葉

14、酸合成酶和二氫葉酸還原酶，妨礙葉酸代謝。因?yàn)槿~酸是合成核酸的前體物質(zhì)，葉酸缺乏導(dǎo)致核酸合成受阻，從而抑制細(xì)菌生長繁殖，主要是磺胺類和甲氧芐啶。 通過觀察培養(yǎng)皿上涂抹抗生素后產(chǎn)生的抑菌圈大小，同時結(jié)合顯微鏡的觀察，比較丌同抗菌機(jī)理的抗生素的抑菌效果。 實(shí)驗(yàn)步驟: 1.用蒸餾水洗凈培養(yǎng)皿。在培養(yǎng)皿底部的紗布上放一塊薄瓊脂片。用滴管均勻低價菌落培養(yǎng)液(內(nèi)含大腸桿菌，化膿鏈球菌，金黃色葡萄球菌，霉菌等等)。菌落大致形成直徑為 20mm 的圓。 2.制做多個基本相當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)皿。分別滴加 23 滴抗生素: (1)阿莫西林(或盤尼西林)溶液 (2)諾氟沙星溶液 (3)紅霉素軟膏浸液 (4)鹽酸林可霉素注射液 抗生素覆蓋區(qū)均為直徑為 5mm 的圓。 3.其中，第一種方案作用機(jī)理是阻礙細(xì)菌細(xì)胞壁合成，第二種方案是阻礙 dna 轉(zhuǎn)錄和復(fù)制，第三和第四種方案都是通過不細(xì)菌核糖體或反應(yīng)底物結(jié)合抑制蛋白質(zhì)合成。 4.將四個培養(yǎng)皿放在恒溫箱中，等待結(jié)果。 實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象:四個培養(yǎng)皿均出現(xiàn)大小丌一的抑菌圈，光學(xué)顯微鏡成像顯示，抑菌圈是以抗生素為圓心的同心圓，抑菌圈范圍內(nèi)細(xì)菌生長明顯受到抑制或消失。抑菌圈外的菌落存在細(xì)菌生長。 通過尺可以量得，阿莫西林的抑菌效果最佳，抑菌圈直徑約為 8mm。而諾氟沙星抑菌圈直徑約為 6mm，紅霉素和林可霉素抑菌圈直徑和諾氟沙星為代表的喹諾酮