人胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)

1、人胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關液體樣本中人胚胎 性硫糖蛋白抗原(FSA)含呈。實驗原理：本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)水平。用純化的人 胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入 胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA),再與HRP標記的胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)抗體結(jié)合，形成抗 體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化 成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的胚胎

2、性硫糖蛋白抗原 (FSA)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品 中人胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)濃度。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2 片(48)2 片(96)密封袋1個1個酶標包被板1x481x962-8°C保存標準品0. 5m 1x1 瓶0. 5m 1x1 瓶2-8°C保存標準品稀釋液1.5m 1x1 瓶1.5m 1x1 瓶2-8 °C保存酶標試劑3 mlx1 瓶6 mlx1 瓶2-8°C保存樣品稀釋液3 mlx1 瓶6 mlx1 瓶2-89保存顯色劑A液3 mlx1 瓶6

3、 mlx1 瓶2-8°C保存顯色劑B液3 mlx1 瓶6 mlx1 瓶2-8 °C保存終止液3m1x1 瓶6m1x1 瓶2-8°C保存濃縮洗滌液(20m 1x20 倍)x1 瓶(20m 1x30 倍)x1 瓶2-8°C保存樣本處理及要求：1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集 上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。2血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、者檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后, 離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再 次

4、離心。3尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上潸，保存過程 中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/ 分)。仔細收集上潸。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS (PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液，細胞濃度 達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右 （2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。5組織標本：切割標本后，稱取重呈。加入一定量的PBS, PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?用。標

5、本融化后仍然保持2-8°C的溫度。加入一定呈的PBS （PH7.4）,用手工或勻漿器將標 本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測， 其余冷凍備用。操作步驟：1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔io孑L,在第一、第二孔中分別加標準 品loom,然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液50M,混勻；然后從第一孔、第二孔中各 取loom分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液5om,混勻；然 后在第三孔和第四孔中先各取50M棄掉，再各取50M分別加到第五、第六孔中，再在第五、 第六孔中分別加標準品稀釋液50111,

6、混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50山分別加到第 七' 第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50卩1,混勻后從第七' 第八孔中分 別取50卩1加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50卩1,混勻后從第九 第十孔中各取50卩1棄掉。2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣 品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40M,然后再加待測樣品10M （樣品最 終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡呈不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3. 溫育：用封板膜封板后置37°C溫育30分鐘。4. 配液：將30 （

7、48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸憾水30 （48T的20倍）倍稀釋后備用。5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重 復5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶標試劑50卩1,空白孔除外。7. 溫育：操作同3。8. 洗滌：操作同5。9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50pl,再加入顯色劑B50pl,輕輕震蕩混勻，37°C避光顯色15 分鐘.10. 終止：每孔加終止液50卩1,終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測呈各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終 止液后15分鐘以內(nèi)進行。注意事項：1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取岀

8、應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未 用完，板條應裝入密封袋中保存。2. 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析岀，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。3. 各步加樣均應使用加樣器，井經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好 控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4. 請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含呈過高（樣本OD值 大于標準品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算 時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（XnX5）。5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6. 底物請避光保存。7. 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.8. 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。9. 本試劑不同批號組分不得混用o10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。計算：以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪岀標準曲線，根據(jù)樣品