乙型肝炎病毒感染的免疫應答.

1、乙型肝炎病毒感染的免疫應答乙型肝炎病毒（HBV 屬嗜肝病毒科，其疫苗早已應用于臨床，但是HBV 在亞洲與非洲的感染率仍居高不下，嚴重威脅著人們的身體健康。HBV 感染導致肝病的嚴重程度有顯著個體差異性，有些 HBV 感染者病毒消除效果好、沒有明顯臨 床癥狀或者急性感染期過后很快恢復到無癥狀期，而另一些HBV 感染者則很難清除病毒或演變?yōu)槁愿腥?。當然，大部?HBV 慢性感染者仍沒有嚴重臨床癥 狀或者說沒有危及生命的肝病，只有 10%30 的患者發(fā)展為肝硬化，甚至進一步發(fā)展為肝癌。成人 HBV 慢性感染率低 （約 5%甚至更低），新生兒 HBV 慢性感染率則相對較高1。目前 HBV 感染的宿主

2、范圍還僅限于人與黑猩猩，感 染結(jié)果由病毒本身與宿主兩方面特性決定，其發(fā)病機制還不完全清楚。通過其 他嗜肝病毒感染動物以及轉(zhuǎn)基因小鼠模型研究，揭示一些與HBV 感染有關(guān)的重要環(huán)節(jié)。細胞量化技術(shù)的應用，極大加深了對 HBV 感染發(fā)病機制的認識，以及 發(fā)現(xiàn)了許多有趣的免疫學現(xiàn)象。本文著重討論 HBV 感染的免疫方式，病毒學特 性對免疫方式的影響，以及病毒清除與病毒持續(xù)感染者免疫的異同。1 早期事件天然免疫系統(tǒng)在感染后限制病原體擴散與有效啟動獲得性免疫應答起到關(guān)鍵作 用。在病毒感染早期的天然免疫應答主要表現(xiàn)為細胞因子IFN-a/B的釋放，天然殺傷細胞活化是通過生物大分子的強烈誘導和（或）感染細胞表面M

3、HC-I類分子的調(diào)理2。病毒感染小鼠模型研究，演繹出病毒增殖的普遍模式與隨后 天然免疫應答的快速啟動方式。而 HBV 感染后的病毒學與免疫學模式則完全不 同機體感染病毒后 47 周，HBVt啟動有效增殖，血清或肝組織中才檢測到 HBV-DNA 和 HBV 抗原。HBV 增殖動力學特征的研究一直處于被忽視狀態(tài)， 直到最近才逐漸引起人們的高度重視。黑猩猩動物實驗表明：丙型肝炎病毒（HCV 在感染后能迅速增殖，而 HBV 要到感染后 45 周才進入指數(shù)擴增階段。HBV擴增初始停滯期并不意味著是由機體天然免疫系統(tǒng)與獲得性免疫系統(tǒng)作用 所致34。HBVt效增殖受 IFN-a/B限制，急性感染期黑猩猩實驗

4、數(shù)據(jù)提 示：HBV 可能有一系列先進策略來逃避早期抗病毒免疫應答，抗病毒細胞因子 的活化并不是通過 HBV 勺增殖來實現(xiàn)。這些實驗表明：黑猩猩感染 HBV 后出現(xiàn)的肝炎癥狀，比人要輕微一些。黑猩猩感染 HCV 早期便檢測到 IFN-I的活化，然而，動物感染 HBV 的早期卻檢測不到 IFN-I的活化。這種差異進 一步說明 HBV 能夠逃逸機體的免疫防御。（3）在人感染的自然史中，很難去分 析這些早期事件，因為在 HBV 感染早期往往沒有發(fā)熱、乏力等類似其他病毒感 染的臨床癥狀，HBV 感染者通常是等到有了臨床癥狀之后才發(fā)被發(fā)現(xiàn)，這時一 般都到了感染后 1012周。2 HBV 免疫應答的啟動 H

5、BV 感染早期機體免疫應答很可能通過 NK 和 NK-T 細胞 來完成，雖然還沒有直接證據(jù)表明 NK 和 NK-T 細胞在 HBV 感染早期發(fā)揮作用， 但動物實驗數(shù)據(jù)與這種推測相吻合， 即 IFN-I初期大量釋放與隨后 HBV 增殖迅 速被抑制相一致。感染早期的免疫學特征決定了感染后獲得性免疫應答的差異性，有的發(fā)展為慢性感染，有的則進入恢復期 7。3 獲得性免疫應答的模式獲 得性免疫應答由一個復雜的效應細胞網(wǎng)組成，在 HBV 感染免疫應答過程中，所有的效應細胞都扮演著重要的角色。CD4+T 細胞作為輔助性 T 細胞，產(chǎn)生大量細胞因子，促使細胞毒性 CD8+T 細胞增殖以及 B 細胞產(chǎn)生抗體。C

6、D8+T 細胞 能夠持續(xù)清除 HBV 感染的肝實質(zhì)細胞，從而降低機體循環(huán)血液中的病毒載量， 抗體則能中和游離病毒顆粒，預防再次感染。HBV 慢性感染與恢復期患者的獲 得性免疫應答方式完全不同- 慢性感染者病毒特異性T 細胞應答非常微弱，幾乎檢測不到，而恢復期患者血液中檢測到足量HBV 特異性 CD4+T 和CD8+T 細胞，其輔助性細胞與細胞毒性細胞應答都顯著強于慢性感染者8。盡管細胞免疫應答對病毒消除至關(guān)重要，但對于 HBV 感染的控制，體液免疫同樣 扮演著重要的角色，獲得性免疫應答中細胞免疫與體液免疫很可能聯(lián)合作用來 極大限度控制機體遭受的感染，任何一個部分失敗都將可能影響到另一部分的 效

7、應能力9。4細胞毒性 T 細胞 HBV 不能通過細胞培養(yǎng)技術(shù)來獲得增殖，這限制了針對 HBV HLA-I類限制性 CD8+T 應答的分析與研究。 HBV 特異性 CD8+T 細胞的確切描述來自于對人工模擬的 HLA-I類分子提呈病毒抗原的認識。通過 人工模擬的方法，在體外誘導增殖病毒核心抗原、包膜、聚合酶等特異性細胞 莓性 T 細胞（CTL） 。實驗技術(shù)日新月異，比如：流式細胞術(shù)，細胞內(nèi)細胞因子 染色法，可溶性 MHC 表位肽四聚體技術(shù)（根據(jù) T 細胞活化的雙識別原理），酶 聯(lián)免疫斑點技術(shù)。這些技術(shù)能夠直接在活體外定量分析病毒特異性CD8+TM胞，從而更加精確分析 HBV 感染各個時期的 HB

8、V 特異性 CD8+TM胞。許多實 驗證實了自限性感染者與慢性感染者之間特異性 CD8+T 細胞數(shù)量上的差異，以及 HBV 特異性 CD8+T 細胞數(shù)量與 HBV 感染的控制呈相關(guān)性10，11。慢性乙肝 是一種異質(zhì)性疾病，在病毒復制、肝病活動度、體液免疫應答等方面都有顯著 變異性。慢性乙肝患者與其他類型患者的HBV 特異性 CD8+TM胞的體內(nèi)聯(lián)合分析顯示：當患者 HBV-DNAK 平107/mL 時，循環(huán)血液中檢測不到核心區(qū) 18- 27-特異CD8+T 細胞。這并不是因為感染部位的局限所致，事實上，肝內(nèi)核心區(qū) 18-27 特異性CD8+TM胞數(shù)量與肝內(nèi) HBVM制水平成反比。包膜與聚合酶特

9、異 性 CD8+T 細胞是HBV-DNAfc 于 107 慢性乙肝患者的惟一特征，這些患者之所以 有 HBV 高水平復制，與其抗病毒免疫欠缺有直接關(guān)系。5 慢性乙肝患者 HBV 特 異性細胞應答失敗慢性乙肝患者 HBV 特異性 T 細胞免疫耐受不是絕對的，而主 要受 HBV 復制數(shù)量調(diào)節(jié)。HBeAg乍為核蛋白抗原的一種分泌形式，在 HBV 復制 期大量產(chǎn)生。HBeAg 耐受效應在小鼠實驗中得到很好闡述，在HBeAgB 性慢性感染者中，HBeAg 耐受意味著核蛋白特異性 T 細胞低水平表達12，13。此 外，HBV 復制與大量可溶性 HBsAg 勺產(chǎn)生有關(guān)，僅表面抗原便攜帶有 103106 拷貝

10、以上的病毒顆粒，這些物質(zhì)通常是沒有感染性的，除非通過人工合成HBV的方式14。6 樹突細胞樹突細胞系一種特異性抗原遞呈細胞，是啟動獲得性 免疫應答的必需組分。在嗜肝病毒感染的動物模型中，樹突細胞很可能遭受感 染，但 HBV仍能大量增殖，因此，對于保持 HBV 特異性 T 細胞免疫耐受狀態(tài)， 樹突細胞的作用還存在爭議15。7 調(diào)節(jié)性 T 細胞大量實驗證實：CD4+CD25+T 細胞是一種具有免疫調(diào)節(jié)作用的 T 細胞亞群，能夠抑制細胞因子的功能或直接 抑制細胞間的聯(lián)系，從而達到抑制免疫應答的效應。CD4+CD25+細胞在 HBV 發(fā)病機理中的作用已引起廣泛關(guān)注， CD4+CD25+細胞可能輔助慢性

11、乙肝患者 HBV 特異性 T 細胞應答， 也可能抑制 HBV特異性 CD8+Tffl胞的增殖與功能，還可能限制免疫介導的肝損傷， 當然， CD4+CD25+細胞的免疫調(diào)節(jié)功能還沒有被完全闡明16。也有一些實驗不支持 CD4+CD25+細胞在慢性 HBV 感染發(fā)病 機理中的免疫調(diào)節(jié)作用。8 肝臟環(huán)境在 HBV 慢性感染的免疫耐受中，肝臟免疫 學特征起到重要作用。動物模型的數(shù)據(jù)顯示：CD8+T 細胞的活化、擴增、效應和抗病毒功能是隨著肝臟器官里抗原遞呈的活化而變化的。 在小鼠實驗中， 鑲 嵌 CD8+T細胞的肝臟細胞率先誘導免疫耐受從而導致CD8+T 克隆擴增降低，實驗也證實了 CD8+T 舌化細

12、胞的凋亡也首先發(fā)生在肝臟17。臟臟細胞低水平表 達MHC-I 類分子，相比其他器官來說，需要 100 倍的抗原濃度才能激活相同數(shù) 目的特異性 CD8+T 細胞，這意味著：任何病原體感染肝臟細胞時，都不太容易 被 CD8+T 細胞識別，當病毒復制速度減慢時，HBV 將可能逃避免疫識別。此 外，盡管肝細胞對細胞因子介導的病毒控制相當敏感，但是對穿孔素/顆粒酶介導的殺傷作用卻耐受，同時，肝臟的這些特性可能導致HBV 特異性 T 細胞應答減弱，以及增加 HBV 病毒持續(xù)存在的可能性。加深對病毒學與免疫學事件的理解如同對 HBV 感染病毒清除與持續(xù)機制的理解 一樣重要。對 HBV 感染后每一個事件分析過后，將得出這樣的結(jié)論：HBV 不能激活早期免疫應答，病毒擴增的延遲動力學正好解釋為什么HBV 疫苗能夠預防感染，即使是在暴露之后注射。盡管病毒特異性CD8+T 細胞在 HBV 清除中扮演重要角色，但要達到對病毒的控制，獲得性免疫系統(tǒng)其他組份的激活也同樣重