生物實(shí)驗(yàn)常用溶液的配制

1、常用溶液的配制v 貯存液配方solutionIngredientsMWDoseNote10M/L NaOHNaOH40.004g攪拌溶解T·H2O10ml1M/L Tris·ClTris(HOCH2)3CNH2121.1412.11g微波爐加熱溶解，冷卻后濃鹽酸調(diào)pH至8.0，加三蒸水定容至100ml濃鹽酸約5mlT·H2O80ml0.1M/L EDTAEDTA （C10H6N2O8）292.252.92g微波爐加熱溶解，冷卻后10M/L NaOH調(diào)pH至8.0，加三蒸水定容至100mlT·H2O80mlRNA酶A母液10mg/mlRNA酶A100加熱1

2、5分鐘,使混有的DNA酶失活。冷卻后用1.5ml eppendorf管分裝成小份保存于-2010mmol/L Tris·Cl(pH7.5), 15mmol/L NaClv 工作液配方solutionIngredientsmaterialsDoseNote溶液50mmol/L GlucoseGlucose (C6H12O6H2O)198.170.99g攪拌溶解后定容至100ml，高壓滅菌4保存25mmol/L Tris·Cl1M/L Tris·Cl2.5ml10mmol/L EDTA0.1M/L EDTA10mlT·H2O50ml溶液1SDSSDS1g分開

3、常溫保存，用時(shí)臨配。1ml溶液：1%SDS 980l +10mol/L NaOH 20l T·H2O100ml0.2mol/L NaOH溶液5 mol/L KAcCH3COOK MW:98.1460ml定容至100ml, 并高壓滅菌。溶液終濃度：K+ 3mol/L,Ac5mol/L。冰醋酸11.5mlT·H2O28.5mlLB液體培養(yǎng)基(Luria-Bertani)蛋白胨(Tryptone) 10 g溶于800ml去離子水中NaOH調(diào)pH至7.5，加去離子水至總體積1升,高壓下蒸氣滅菌20分鐘酵母提取物(Yeast extract) 5 gNaCl 10 gLB固體培養(yǎng)基L

4、B液體培養(yǎng)基100ml高壓滅菌后成凝膠狀，用時(shí)微波爐加熱至100以上溶解，加入5mg/ml Ampcillin 1ml（終濃度為50ug/ml），搖勻后倒入培養(yǎng)皿中，冷卻凝固即可涂板瓊脂粉 1.2g氨芐青霉素(Ampicillin, Amp)工作液Ampcillin（規(guī)格0.48g,80萬U） 1支5mg/ml貯存液（終濃度為50ug/ml）, -20保存?zhèn)溆萌羲?100ml溶菌酶溶液(10mg/ml)溶菌酶溶液 0.1g分裝成1ml/小份，保存于-20,每一小份一經(jīng)使用后便予丟棄10mmol/L Tris·Cl(pH8.0) 10ml3mol/l NaAc (pH5.2)NaAc

5、·3H2O 40.81g冰醋酸調(diào)pH至5.2，加水定容至100ml，分裝后高壓滅菌,儲(chǔ)存于4冰箱三蒸水 50mlTE緩沖液10mmo/LTris·Cl， 1M/LTris·Cl(pH8.0)0.5ml加水定容至50ml，高壓滅菌后EP管分裝備用1mmol/L EDTA0.1M/LEDTA(pH8.0)0.5mlT·H2O49mlTBE 緩沖液 (5×)Tris54g定容至1000ml硼酸27.5g，0.5M/LEDTA(pH8.0)20m l上樣緩沖液 (6×)0.25% 溴酚藍(lán)溴酚藍(lán)0.25g定容至100ml40% (w/v)蔗糖水

6、溶液蔗糖40g三蒸水80ml0.7瓊脂糖凝膠瓊脂糖粉0.14g微波爐加熱溶解。溫度降至50左右加入2l EB（溴化乙錠）后制膠1×TBE20ml50 x TAE, pH8.5 (40mM Tris 堿, 40 mM 醋酸, 1 mM EDTA)Tris-堿242 gTris加300ml去離子水加熱攪拌溶解后，加入0.5M 的EDTA（pH8.0）100ml，再加冰醋酸，去離子水調(diào)整體積到1升冰醋酸57.1g（ml）Na2EDTA·2H2O（0.5M EDTA pH8.0）18.61 g（100ml）10 x TBE (89 mM Tris堿, 89 mM 硼酸， 2 mM

7、EDTA) Tris-堿 108 g 硼酸 55 g Na2EDTA·2H2O 7.44g 加去離子水調(diào)整體積到1升 生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)常用緩沖液的配制方法1、0.2mol/L 磷酸緩沖液 *組份濃度 0.2mol/L （pH 6.0） *配制量 1L*配置方法 1.稱取磷酸氫二鈉 .12水 8.82 g。 2.稱取磷酸二氫鈉 .2水 27.34g。 3.用去離子水溶解并定容至 1L。室溫保存。注意：此為母液，使用時(shí)稀釋 40倍使用。2、洗脫液 *組份濃度 0.15mol/L （含 0.15mol/L 氯化鈉的 0.005mol/L pH 6.0的磷酸緩沖液）*配制量 10L*配置方法 1

8、.稱取氯化鈉 87.66g。 2.用 0.2mol/L pH6.0的 磷酸緩沖液 250mL溶解。 3.用去離子水稀釋至 10L。室溫保存。3、0.3mol/L 磷酸緩沖液 *組份濃度 0.3mol/L （pH7.8） *配制量 0.5L*配置方法 1.準(zhǔn)確稱取磷酸氫二鈉 .12水 49.150g。 2.磷酸二氫鈉.2水 2.000g。 3.用去離子水溶解并定容至 0.5L。室溫保存。注意：此為母液，使用時(shí)稀釋 10 倍使用。4、0.2mol/L 乙酸緩沖液 *組份濃度 0.2mol/L （pH4.6）*配制量 2L*配置方法 1.準(zhǔn)確稱取乙酸鈉 .3水 54.44g。 2.加入 23mL冰乙

9、酸，溶解。 3.用去離子水溶解并定容至 2L。4保存。5、0.2mol/L 磷酸-檸檬酸緩沖液（pH 2.6、4.6、6.6）*組份濃度 0.2mol/L*配制量 各 1L*配置方法 1.母液 A（0.2mol/L 的 Na2HPO4溶液）：稱取 Na2HPO4.12 水 143.256g，用去離子水定容至 2L。 2.母液 B（0.1mol/L 的檸檬酸溶液）：稱取檸檬酸 .1水 42.028g用去離子水溶解定容至 2L。 3. pH2.6、4.6、6.6的三種緩沖液如下表配制：pH值 A（mL） B（mL）2.6 109.0 891.04.6 467.5 532.56.6 727.5 27

10、2.5 4.按上表混勻后， 4保存。6、20×SSC 緩沖液 *配制量 1L（pH7.0）*配置方法 1.準(zhǔn)確稱取 175.2g氯化鈉。 2.準(zhǔn)確稱取 88.2g檸檬酸鈉 .2水。 3.溶解于 800mL去離子水中。 4.加入數(shù)滴 10mol/L 氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié) pH值至 7.0。 5.加去離子水定容至 1L。注意：按實(shí)驗(yàn)需要可分裝后高壓滅菌。10×SSC、5×SSC、1×SSC 可由 20×SSC做相應(yīng)稀釋得到。7、0.15mol/L 氯化鈉-乙二胺四乙酸二鈉緩沖液（pH8.0） *組份濃度 0.15mol/L*配制量 1L*配置方法 1.

11、準(zhǔn)確稱取氯化鈉 8.77g。 2.稱取乙二胺四乙酸二鈉 37.2g。 3.溶于 800mL去離子水中。 4.用固體的氫氧化鈉調(diào) pH 值為 8.0。 5.加去離子水定容至 1L。8、1/15mol/L 的磷酸鹽緩沖液（pH7.6） *組份濃度 0.15mol/L*配制量 1L*配置方法 1.溶液甲（1/15mol/L 的 KH2PO4溶液）：稱取 KH2PO49.078g，用去離子水溶解定容至 1L。 2.溶液乙 (1/15mol/L 的 Na2HPO4溶液):稱取 Na2HPO4. 2水 11.876g（或磷酸氫二鈉 .12水 23.894g）用去離子水溶解定容至 1L。 3.pH7.6磷酸

12、鹽緩沖液：將 和按 1.4：8.6比例混合即可。9、5×TrisGlycineBuffer （SDSPAGE電泳緩沖液）*組份濃度 0.125M Tris，1.25M Glycine，0.5（w/v）SDS*配制量 1L*配置方法 1.稱取下列試劑，置于 1L燒杯中。 Tris 15.1g Glycine 94g SDS 5.0g 2.加入約 800mL的去離子水，攪拌溶解。 3.加去離子水將溶液定容至 1L后，室溫保存。10、5×SDSPAGE Loading Buffer*組份濃度 250mM TrisHCl（pH6.8） 10（W/V） SDS 0.5（W/V） BP

13、B 50（V/V） 甘油 5（W/V） 巰基乙醇*配制量 5mL*配置方法 1.量取下列試劑，置于 10mL塑料離心管中。 1M TrisHCl1.25mL SDS 0.5g BPB 25mg 甘油 2.5mL 2.加入去離子水溶解后定容至 5mL。 3.小份（ 500l/份）分裝后，于室溫保存。 4.使用前將 25l的 2-ME加到每小份中。 5.加入 2M-E的 LoadingBuffer可在室溫下保存一個(gè)月左右1、1M TrisHCl * 組份濃度 1M TrisHCl （pH7.4，7.6，8.0） * 配制量 1L* 配置方法 1.稱量 121.1gTris置于 1L燒杯中。 2.加

14、入約 800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3.按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的 pH 值。 pH值 濃 HCl 7.4 約 70mL 7.6 約 60mL 8.0 約 42mL 4.將溶解定容至 1L。 5.高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定 pH值，因?yàn)?Tris溶液的 pH值隨溫度的變化差很大，溫度每升高 1，溶液的 pH值大約降低 0.03個(gè)單位。2、1.5M TrisHCl *組份濃度 1.5M TrisHCl （pH8.8） *配制量 1L*配置方法 1.稱取 181.7gTris置于 1L燒杯中。 2.加入約 800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3.用濃鹽

15、酸調(diào) pH 值至 8.8。 4.將溶液定容至 1L。 5.高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定 pH值，因?yàn)?Tris溶液的 pH值隨溫度的變化差異很大， 溫度每升高 1，溶液的 pH值大約降低 0.03個(gè)單位。3、10×TE Buffer *組份濃度 100 mM TrisHCl，10 mM EDTA （pH 7.4，7.6，8.0）*配制量 1L*配置方法 1.量取下列溶液，置于 1L燒杯中。 1M TrisHClBuffer（pH7.4，7.6，8.0） 100mL 500 mM EDTA（pH8.0） 20mL 2.向燒杯中加入約 800mL的去離子水，

16、均勻混合。 3.將溶液定至 1L后，高溫高壓滅菌。 4.室溫保存。4、3 M 醋酸鈉 *組份濃度 3M 醋酸鈉 （pH5.2） *配制量 100mL*配置方法 1.稱取 40.8gNaOAc.3H2O置于 100200mL燒杯中，加入約 40mL的去離子水 攪拌溶解。 2.加入冰乙酸調(diào)節(jié) pH值至 5.2。 3.加入去離子水將溶液定容至 100mL。 4.高溫高壓滅菌后，室溫保存。5、PBSBuffer*組份濃度 137mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4*配制量 1L*配置方法 1.稱量下列試劑，置于 1L燒杯中。 NaCl 8 g KCl

17、0.2g Na2HPO4 1.42 g KH2PO4 0.27g 2.向燒杯中加入約 800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3.滴加 HCl將 pH 值調(diào)節(jié)至 7.4，然后加入去離子水將溶液定容至 1L。 4.高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：上述 PBS Buffer中無二價(jià)陽離子，如需要，可在配方中補(bǔ)充 1mM CaCl2 和 0.5mM MgCl2。6、10 M 醋酸銨 *組份濃度 10M 醋酸銨 *配制量 100mL*配置方法 1.稱量 77.1g 醋酸銨置于 100200 mL燒杯中，加入約 30mL 的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?2.加去離子水將溶液定容至 100mL。 3.使用 0.22m

18、濾膜過濾除菌。 4.密封瓶口于室溫保存。注意：醋酸銨受熱易分解，所以不能高溫高壓滅菌。7、TrisHCl平衡苯酚 *配置方法 1.使用原料：大多數(shù)市售液化苯酚是清亮無色的，無需重蒸餾便可用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。但有些液化苯酚呈粉紅色或黃色，應(yīng)避免使用。同時(shí)也應(yīng)避免使用結(jié)晶苯酚，結(jié)晶苯酚必須在 160對其進(jìn)行重蒸餾除去諸如醌等氧化產(chǎn)物，這些氧化產(chǎn)物可引起磷酸二酯鍵的斷裂或?qū)е?RNA和 DNA的交聯(lián)等。因此，苯酚的質(zhì)量對 DNA、RNA的提取極為重要，我們推薦使用高質(zhì)量的苯酚進(jìn)行分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。 2.操作注意：苯酚腐蝕性極強(qiáng)，并可引起嚴(yán)重灼傷，操作時(shí)應(yīng)戴手套及防護(hù)鏡等。所有操作均應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行，與

19、苯酚接觸過的皮膚部位應(yīng)用大量水清洗，并用肥皂和水洗滌，忌用乙醇。 3.苯酚平衡：因?yàn)樵谒嵝?pH條件下 DNA分配于有機(jī)相，因此使用苯酚前必須對苯酚進(jìn)行平衡使其 pH值達(dá)到 7.8以上，苯酚平衡操作方法如下： 液化苯酚應(yīng)貯存于 20，此時(shí)的苯酚呈現(xiàn)結(jié)晶狀態(tài)。從冰柜中取出的苯酚首先在室溫下放置使其達(dá)到室溫，然后在 68水浴中使苯酚充分溶解。 加入羥基喹啉（ 8Quinolinol）至終濃度 0.1。該化合物是一種還原劑、 RNA酶的不完全抑制劑及金屬離子的弱螯合劑，同時(shí)因其呈黃色。有助于方便識(shí)別有機(jī)相。 加入等體積的 1M TrisHCl（pH8.0），使用磁力攪拌器攪拌 15分鐘，靜置使其充分

20、分層后，除去上層水相。 重復(fù)操作步驟 。 加入等體積的 0.1M TrisHCl（pH8.0），使用磁力攪拌器攪拌 15分鐘，靜置使其充分分層后，除去上層水相。 重復(fù)操作步驟 ，稍微殘留部分上層水相。 使用 pH試紙確認(rèn)有機(jī)相的 pH值大于 7.8。 將苯酚置于棕色玻璃瓶中 4避光保存。8、苯酚 /氯仿/異戊醇 *配置方法1.說明：從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時(shí)常常使用苯 /酚/氯仿/異戊醇（ 25：24：1）。氯仿可使蛋白（ 25 ：24 ：1） 質(zhì)變性并有助于液相與有機(jī)相的分離，而異戊醇則有助于消除抽提過程中出現(xiàn)的氣泡。2.配置方法：將 TrisHCl平衡苯酚與等體積的氯仿 /異戊醇（ 24：1

21、）均勻混合后，移入棕色玻璃瓶中 4保存。9、10（ W/V）SDS *組份濃度 10（W/V）SDS *配制量 100mL*配置方法 1.稱量 10g高純度的 SDS 置于 100200mL燒杯中，加入約80mL的去離子水， 68加熱溶解。 2.滴加數(shù)滴濃鹽酸調(diào)節(jié) pH值至 7.2。 3.將溶液定容至 100mL后，室溫保存。10、2 N NaOH *組份濃度 2N NaOH *配制量 100mL*配置方法 1.量取 80mL去離子水置于 100200mL塑料燒杯中（ NaOH溶解過程中大量放熱，有可能使玻璃燒杯炸裂）。 2.稱取 8g NaOH 小心地逐漸加入到燒杯中，邊加邊攪拌。 3.待

22、NaOH完全溶解后，用去離子水將溶液體積定容至 100mL。 4.將溶液轉(zhuǎn)移至塑料容器中后，室溫保存。11、2.5N HCl *組份濃度 2.5 N HCl *配制量 100mL*配置方法 1.在 78.4mL的去離子水中加入 21.6mL的濃鹽酸（ 11.6N），均勻混合。 2.室溫保存。12、5 M NaCl *組份濃度 5M NaCl *配制量 1L*配置方法 1.稱取 292.2gNaCl置于 1L燒杯中， 加入約 800mL的去離子水后攪拌溶解。 2.加去離子水將溶液定容至 1L后，適量分成小份。 3.高溫高壓滅菌后， 4保存。13、20（ W/V）Glucose *組份濃度 20（

23、W/V）Glucose *配制量 100mL*配置方法 1.稱取 20gGlucose 置于 100200mL燒杯中，加入約 80mL的去離子水后，攪拌溶解。 2.加去離子水將溶液定容至 100mL。 3.高溫高壓滅菌后， 4保存。14、Solution I *組份濃度 25mM TrisHCl（pH8.0），10mM EDTA，50mM Glucose （質(zhì)粒提取用） *配制量 1L*配置方法 1.量取下列溶液，置于 1L燒杯中。1M TrisHCl（pH8.0） 25mL0.5M EDTA（pH8.0） 20mL20Glucose（1.11M） 45mLdH2O 910mL 2.高溫高壓滅菌后， 4保存。 3.使用前每 50mL的 Soliution I中加入 2mL的 RNase A （20mg/mL）。15、Solution II *組份濃度 250mM NaOH，1（W/V）SDS