各期慢性阻塞性肺疾病患者誘導(dǎo)痰中細胞成分與肺功能的關(guān)系

1、各期慢性阻塞性肺疾病患者誘導(dǎo)痰中細胞成分與肺功能的關(guān)系【關(guān)鍵詞】 阻塞性肺疾病;誘導(dǎo)痰;中性粒細胞【摘要】 【目的】 比較不同時期慢性阻塞性肺病(copd)患者誘導(dǎo)痰中細胞組成的變化，及其誘導(dǎo)痰中細胞成分尤其中性粒細胞百分比與氣流受限的關(guān)系?！痉椒ā?對110例copd患者急性加重期copd (aecopd) 患者(a1組)62例、穩(wěn)定期copd患者(b組)48例及30例健康對照者(c組)進行肺功能測定及痰誘導(dǎo)，痰液處理后沉渣作細胞學(xué)分析。其中aecopd組在治療1周后(a2組)再次進行上述指標(biāo)的測定?！窘Y(jié)果】 140例受試者中有21例因不能耐受痰誘導(dǎo)過程或痰標(biāo)本不合格而退出研究，最終有119

2、例受試者完成本研究(a1,2組48例，b組43例，c組28例)。a1組、a2組、b組、c組誘導(dǎo)痰中細胞總數(shù)(10 6/ml)分別為(8.8 3.7)、(6.5 2.6)、(5.0 2.8)、(2.8 1.3)，細胞分類中a1組、a2組、b組以中性粒細胞為主，分別為(66 15)%、(60 10)%、(55 11)%，而在c組中則以巨噬細胞、中性粒細胞為主，分別為(37 10)%、(32 8)%;aecopd患者(a1組、a2組)誘導(dǎo)痰中性粒細胞百分比與肺功能指標(biāo)(fev1、fev1%pre、fvc、fev1/fvc)呈負相關(guān)(r分別為-0.860、-0.682、-0.662、-0.300，p

3、0.001);穩(wěn)定期組(b組)中性粒細胞與fev1、fev1%pre負相關(guān)(r分別為-0.346 、-0.421, p 0.05)。【結(jié)論】 aecopd、緩解期、穩(wěn)定期患者誘導(dǎo)痰細胞以中性粒細胞為主，健康者誘導(dǎo)痰細胞以巨噬細胞為主;氣道局部中性粒細胞增多與各期copd患者氣流受限存在密切的關(guān)系。 慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, copd)是一種以不完全可逆的氣流受限為特征的疾病，與肺部對有害氣體或有害顆粒的異常炎癥反應(yīng)有關(guān)1。由不同炎性細胞、炎癥介質(zhì)和細胞因子介導(dǎo)的慢性氣道炎癥，會進一步引發(fā)氣道阻塞和氣道重構(gòu)，對copd發(fā)生發(fā)展

4、起著重要作用。已證實誘導(dǎo)痰法是一種非侵入性、安全、簡便易行直接測定氣道炎癥的方法，已廣泛用于哮喘的臨床研究及診治中，近年來，誘導(dǎo)痰技術(shù)在copd氣道局部炎癥機制研究中的應(yīng)用越來越受重視，其安全性和有效性也得到證實2,3。但目前較多關(guān)注的是誘導(dǎo)痰中炎癥因子、炎性介質(zhì)在copd中的作用，而誘導(dǎo)痰中細胞成分的變化及其與各期copd氣流受限的關(guān)系研究報道較少，尤其copd急性加重期誘導(dǎo)痰細胞學(xué)分析未見報道。我們通過觀察copd急性加重期、緩解期和穩(wěn)定期患者及健康對照組誘導(dǎo)痰中的細胞總數(shù)及細胞分類的變化，及其與肺功能的關(guān)系，來闡明氣道局部炎癥細胞在copd中的作用。1 材料和方法1.1 研究對象收集20

5、04年10月至2006年03月中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院呼吸科門診及住院的110例copd患者及30例健康對照組(c組)。copd患者中急性加重期患者(a1組)62例，copd穩(wěn)定期患者(b組)48例。緩解組(a2組)指上述aecopd組病人經(jīng)正規(guī)治療1周后臨床癥狀緩解者。穩(wěn)定期組(b組)病人指患者咳嗽、咳痰、氣促等癥狀穩(wěn)定或癥狀輕微持續(xù)2個月以上者;2周內(nèi)無呼吸道感染，未使用全身激素及抗生素。健康對照組(c組)：選擇年齡匹配(年齡2)，非呼吸系統(tǒng)疾病的健康人群。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有copd患者均符合copd全球創(chuàng)議(gold)1,4的診斷標(biāo)準(zhǔn)(支氣管舒張試驗后fev180%預(yù)計值，fev1/fvc 50

6、%為合格標(biāo)本。調(diào)節(jié)細胞懸浮密度至1106，將75 l懸浮液置于細胞離心機,450 r/min (r=15 cm)，離心6 min，細胞沉渣涂片，風(fēng)干，吉姆薩染色，每張涂片計數(shù)400個非鱗狀上皮細胞計算分類，鱗狀上皮細胞 20%者為合格標(biāo)本，提示痰來源于下呼吸道，并對細胞進行計數(shù)和分類。copd患者的舒張試驗及所有受試者的肺功能使用肺功能儀(sensor medics ltd, usa)進行測定。痰誘導(dǎo)過程中監(jiān)測fev1采用便攜式肺功能儀(micro medical公司，英國)，spo2用便攜式脈搏容積血氧飽和度儀(osaka公司，日本)。1.3 統(tǒng)計學(xué)處理各組數(shù)據(jù)以均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差(xs)表示，各組

7、均數(shù)比較采用單因素方差分析(anova)、組間兩兩比較用snk-q檢驗，方差不齊者采用秩和檢驗，粒細胞數(shù)與肺功能的關(guān)系用spearman相關(guān)分析;所有數(shù)據(jù)的計算、統(tǒng)計分析用spss 13.0軟件處理，以 p 0.05);aecopd治療前后肺功能的比較差異有統(tǒng)計學(xué)差異，p0.01，治療后，肺功能明顯改善。四組間fev1和fev1占預(yù)計值%的差異有統(tǒng)計學(xué)意義，p 0.01，穩(wěn)定期肺功能好于緩解期，緩解期好于加重期(表1)。2.2 各組誘導(dǎo)痰液的細胞分類情況對照組誘導(dǎo)痰細胞分類中，巨噬細胞占(37.1 9.8)%，明顯高于中性粒細胞、淋巴細胞和嗜酸性粒細胞、上皮細胞比例;各期copd中性粒細胞比例

8、明顯高于其他細胞比例，隨著病情的好轉(zhuǎn)，肺功能改善，由加重期、緩解期、穩(wěn)定期痰液中性粒細胞計數(shù)依次下降，但仍高于對照組，p 0.05。而淋巴細胞、嗜酸性細胞變化不大(表2)。2.3 誘導(dǎo)痰細胞成分與肺功能的相關(guān)性各組誘導(dǎo)痰中性粒細胞比例與fev1、fev1%pre、fvc、fev1/fvc的相關(guān)性見表3。從表3可見aecopd(a1、a2組)中性粒細胞與fev1、fev1%pre、fvc、fev1/fvc皆呈顯著負相關(guān)(r分別為-0.860、-0.682、-0.662、-0.300，p 0.05。3 討 論copd是多種炎癥細胞和炎癥介質(zhì)參與的氣道炎癥。通過誘導(dǎo)排痰法檢測有關(guān)炎癥細胞和介質(zhì)指標(biāo)，

9、闡明局部氣道炎癥與氣流受限的關(guān)系，已證實是一種非侵入性、簡便可行的新方法2。誘導(dǎo)痰標(biāo)本是否來自下氣道、痰標(biāo)本是否合格主要通過誘導(dǎo)痰的細胞學(xué)檢查來判斷，目前常用的標(biāo)準(zhǔn)是5：每低倍鏡視野下痰標(biāo)本的白細胞數(shù) 25個、鱗狀上皮細胞 10個，吉姆薩染色后每張涂片計數(shù)400個細胞其中鱗狀上皮細胞50%為合格標(biāo)本。本研究亦采取此標(biāo)準(zhǔn)為判斷痰標(biāo)本是否合格的標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果顯示9例痰標(biāo)本細胞存活率 50%而退出研究。誘導(dǎo)痰的來源與自發(fā)排痰、支氣管肺泡灌洗液、支氣管活檢的部位不同，主要來源于外周氣道至中央氣道的分泌物，反映了氣道分泌物自然狀態(tài)下的濃度，具有更集中的細胞和生化物質(zhì)成分，尤適合氣道炎癥疾病如copd、哮喘的

10、研究。健康人及不同呼吸道疾病其誘導(dǎo)痰細胞分類的比例存在明顯的差異，反映了不同疾病發(fā)病機制的差異。健康人群誘導(dǎo)痰中以巨噬細胞、淋巴細胞、中性粒細胞為主，哮喘患者誘導(dǎo)痰中以嗜酸性粒細胞和巨噬細胞為主6，而copd患者誘導(dǎo)痰中則以中性粒細胞為主7。我們的研究中還發(fā)現(xiàn)copd急性加重期、緩解期、穩(wěn)定期誘導(dǎo)痰中均以中性粒細胞為主，分別為(66.1 15.1)%、(60.3 10.0)%、(55.3 11.7)%，嗜酸性細胞變化不大，健康對照組中則以巨噬細胞、中性粒細胞為主，分別為(37.1 9.8)%、(31.7 8.1)%，但中性粒細胞比例不如copd高，與balzano8及odonnell9的結(jié)果基

11、本類似。本研究發(fā)現(xiàn)各期copd的中性粒細胞的百分比與fev1、fev1%pre、fvc、fev1/fvc呈負相關(guān)，以加重期組相關(guān)性更明顯，對照組中性粒細胞與肺功能無相關(guān)。本研究copd加重期中性粒細胞明顯增高，經(jīng)治療癥狀緩解后，誘導(dǎo)痰的中性粒細胞雖有明顯下降從(66.1 15.1)%降至(60.3 10.0)%，(p 0.05)，但其數(shù)值仍高于對照組，穩(wěn)定期中性粒細胞數(shù)也明顯高于對照組(p 0.05)，提示中性粒細胞不僅在copd加重期對氣道炎癥及氣流受限中起重要作用，而且促使緩解期和穩(wěn)定期氣道炎癥持續(xù)存在。copd氣流受限增加主要在小支氣管和細支氣管，中性粒細胞這些部位浸潤，釋放炎癥介質(zhì)、多

12、種蛋白酶，從而誘導(dǎo)氣道分泌細胞分泌粘液，引起一系列炎癥反應(yīng)，加重氣流受限。同時痰液中中性粒細胞增加而嗜酸性細胞無增加也反映了部分患者對激素治療的抵抗作用。但有報道10一些copd加重期痰液中嗜酸性粒細胞增加，吸入激素后痰中嗜酸性細胞比例和嗜酸細胞陽離子蛋白降低。因此，定期檢測copd患者誘導(dǎo)痰中細胞分類，嗜酸性細胞比例可估測藥物的效果。本研究進一步證實誘導(dǎo)排痰法的安全性和可行性，共110例copd患者進行了該項操作，91例患者安全渡過全過程并且痰標(biāo)本合格。誘導(dǎo)痰液顯示了各期copd患者誘導(dǎo)痰中細胞組成的變化，aecopd患者誘導(dǎo)痰中的中性粒細胞與肺功能明顯相關(guān)，從炎癥細胞角度說明氣道局部炎癥在copd氣流受限中的作用，為copd的抗炎治療