鹽酸伊立替康脂質(zhì)體凍干粉針的制備及其質(zhì)量評價

1、鹽酸伊立替康脂質(zhì)體凍干粉針的制備及其質(zhì)量評價Throw away the apple because of the core. A useful trade is a mine of gold. 作者：邱永宏，戈延茹，王成潤，金一【摘要】目的：研究鹽酸伊立替康脂質(zhì)體凍干粉針的制備方法，并對其進(jìn)行初步的質(zhì)量評價。方法：以包封率為評價指標(biāo)，比較四種不同的脂質(zhì)體制備方法，對硫酸銨梯度法的制備工藝和處方進(jìn)行單因素考察，篩選出凍干保護(hù)劑，并對凍干粉針進(jìn)行穩(wěn)定性影響因素試驗。結(jié)果：兩種主動載藥法制得的脂質(zhì)體包封率更高；硫酸銨梯度法制備過程中，鹽酸伊立替康脂質(zhì)體的包封率受藥脂比、硫酸銨濃度、孵育溫度、孵育時

2、間影響較大，受膽固醇磷脂比、空白脂質(zhì)體外水相除鹽方法影響較?。徊捎?蔗糖與5乳糖作為凍干保護(hù)劑凍干效果更好；所得凍干粉針對溫度、光照較為敏感，也易受濕度影響。結(jié)論：采用硫酸銨梯度法，經(jīng)處方工藝條件的優(yōu)化，可以獲得較高包封率的鹽酸伊立替康脂質(zhì)體，5蔗糖與5乳糖是本脂質(zhì)體較合適的凍干保護(hù)劑，初步的穩(wěn)定性考察結(jié)果表明，本脂質(zhì)體凍干粉針宜低溫、避光、密封保存()?！娟P(guān)鍵詞】鹽酸伊立替康；脂質(zhì)體；凍干粉針；硫酸銨梯度法；穩(wěn)定性AbstractObjective:Toinvestigatethepreparationofirinotecanhydrochloridelyophilizedliposomes

3、andtoevaluatetheirqualitypreliminarily.Methods：Judgingbyencapsulationefficiency(EE),fourdifferentmethodsforpreparingliposomeswerecompared,thesinglefactortestresearchwasapplicatedtostudytheformulaandthepreparationcraft,supportagentsforlyophilizationwerescreened,andtheinfluencingfactortestwasapplicate

4、dtostudythestabilityoflyophilizedliposomes.Results：HighEEofliposomeswasachievedbytwoactiveloadingmethods;undertheammoniumsulfategradientmethod,theEEofirinotecanhydrochlorideliposomeswassignificantlyaffectedbytheratiosofdrugtolipid,theconcentrationsofammoniumsulfate,incubationtemperatureandincubation

5、time,anditwasscarcelyaffectedbytheratiosofcholesteroltophospholipidorthesaltsremovingmethods;superiorlyophilizedpowdercouldbeobtainedbyusing5%sucroseand5%lactose;thelyophilizedpowderwassensitivetotemperatureandillumination,anditwasalsoaffectedbyhumidity.Conclusion：Withtheammoniumsulfategradientmetho

6、d,aftertheoptimizationoftheformulaandthepreparationcraftwecouldgetirinotecanhydrochlorideliposomeswithhighEE;5%sucroseand5%lactoseweresuitablesupportagentsfortheseliposomes.Thepreliminaryassessmentofstabilityshowedthatthelyophilizedliposomespowdershouldbestoredinlowtemperature,insealedcondition,anda

7、wayfromlight.Wine and judgement mature with age. Keywordsirinotecanhydrochloride;liposome;lyophilizedpowder;ammoniumsulfategradientmethod;stability伊立替康(Irinotecan，CPT11)，是一種半合成的喜樹堿衍生物，為特異性的拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑。為增加伊立替康的水溶性，人們將其制備成鹽酸鹽1，即鹽酸伊立替康，已上市的產(chǎn)品主要為鹽酸伊立替康注射液（開普拓）及凍干粉針（艾力）。伊立替康是轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌的有效藥物，而且具有很廣的抗腫瘤譜。期、期臨床研究

8、結(jié)果表明，該藥對化療抗拒性腫瘤，如非小細(xì)胞肺癌、卵巢癌和宮頸癌有肯定療效；另外它對胃癌、惡性淋巴瘤(非霍奇金淋巴瘤)、乳腺癌、小細(xì)胞肺癌、皮膚癌、胰腺癌也有一定療效2-5。伊立替康抗癌活性強(qiáng)，但不良反應(yīng)亦較多，常見不良反應(yīng)為食欲缺乏、惡心、嘔吐、腹瀉，白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞減少、貧血及血小板減少，脫發(fā)和乙酰膽堿能綜合征6-8。因此有必要改進(jìn)其現(xiàn)有劑型，來增加它的適應(yīng)證，減少其不良反應(yīng)。脂質(zhì)體作為膠體給藥系統(tǒng)的一種，有著靶向、低毒、高效的優(yōu)點9,10，但鹽酸伊立替康等水溶性藥物脂質(zhì)體混懸液的穩(wěn)定性普遍較差，因此本實驗將鹽酸伊立替康制備成脂質(zhì)體凍干粉針，以期得到更為安全、有效、穩(wěn)定的制劑(醫(yī)藥學(xué)/臨床

9、醫(yī)學(xué)論文 )。1材料與方法1.1藥品與試劑鹽酸伊立替康（連云港杰瑞醫(yī)化有限公司）；注射用大豆卵磷脂（上海太偉藥業(yè)有限公司）；膽固醇（廣東南方化玻有限公司進(jìn)口分裝）；SephadexG50（Pharmacia公司進(jìn)口分裝）；葡萄糖、甘露醇（廣東光華化工廠有限公司）；乳糖（新西蘭）；磷酸二氫鉀（浙江新安化工集團(tuán)有限公司）；乙腈（色譜純，德國默克公司）；甲醇（色譜純，國藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑有限公司）；其他試劑為分析純。1.2儀器RE52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；循環(huán)水式多用真空泵（SH2D，鞏義市英峪予華儀器廠）；超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)（JY922D，寧波新芝生物科技有限公司）；精密酸度計（PH

10、S2C，上海雷磁儀器廠）；冷凍干燥機(jī)（LGj18，軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗儀器廠）；激光衍射粒度分析儀（Zetasizer3000HS，英國馬爾文公司）；精密電子天平（SartoriusBS110s，德國賽多利斯集團(tuán)）；磁力攪拌器（851型，上海志威電器有限公司）；LC10AT液相色譜儀（日本島津公司）；DiamonsilTMODS色譜柱（250mm4.6mm，5m）,C18預(yù)柱（4.6mm10mm，5m）；紫外分光光度計（TU1800PC/SPC，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）。1.3制備方法的篩選論文包括學(xué)年論文、畢業(yè)論文、學(xué)位論文、科技論文、成果論文等. 稱取大豆磷脂400mg，膽固醇100m

11、g，用20ml乙醚溶解轉(zhuǎn)移至梨形瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成膜，并繼續(xù)減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)15min至乙醚除盡，加入1mg/ml鹽酸伊立替康水溶液10ml，水化1h后，于探頭超聲下超聲15min（功率450W，每工作1s后間歇5s），過0.22m濾膜4次，整粒。稱取大豆磷脂400mg，膽固醇100mg，用20ml乙醚溶解轉(zhuǎn)移至梨形瓶中，加入1mg/ml鹽酸伊立替康水溶液10ml，超聲3min成初乳，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)20min至乙醚除盡，于探頭超聲下超聲15min（功率450W，每工作1s后間歇5s），過0.22m濾膜4次，整粒。Throw away the apple because of the core. 稱取大

12、豆磷脂400mg，膽固醇100mg，用20ml乙醚溶解轉(zhuǎn)移至梨形瓶中，加入pH=4.0的枸櫞酸鈉檸檬酸緩沖液10ml，超聲3min成初乳，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)20min至乙醚除盡，于探頭超聲下超聲15min（功率450W，每工作1s后間歇5s），過0.22m濾膜4次，整粒，得空白脂質(zhì)體液10ml11，向其中加入藥物粉末10mg，再用0.44mol/L的碳酸鈉溶液將脂質(zhì)體液pH值調(diào)至7.5，攪拌2min后，靜置20min，得載藥脂質(zhì)體。Great winds blow upon high hills. The emperor treats talent as tools, using their str

13、ongpoint to his advantage. 稱取大豆磷脂400mg，膽固醇100mg，用20ml乙醚溶解轉(zhuǎn)移至梨形瓶中，加入250mmol/L的硫酸銨溶液10ml，超聲3min成初乳，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)20min至乙醚除盡，于探頭超聲下超聲15min（功率450W，每工作1s后間歇5s），過0.22m濾膜4次，整粒，得空白脂質(zhì)體液10ml，除去此空白脂質(zhì)體外水相中的鹽，再向其中加入藥物粉末10mg，攪拌2min后，靜置20min，得載藥脂質(zhì)體。1.4包封率的測定采用SephadexG50葡聚糖凝膠柱（長18cm，內(nèi)徑1cm；洗脫液：pH=4.0磷酸鹽緩沖液；流速1ml/min)分離脂質(zhì)體與

14、游離藥物12，通過脂質(zhì)體與游離藥物的流出曲線，確定收集流出液110ml為脂質(zhì)體組分，1135ml為游離藥物組分。None but a wise man can employ leisure well. 流動相：甲醇-乙腈-磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀6.8g，加水800ml，溶解后，加三乙胺10ml，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至4.0，再加水至1000ml）（流動相各組分混合比為55540）；流速：0.8ml/min；柱溫35；檢測波長：254nm；藥物峰面積A對藥物濃度C(g/ml)的回歸方程：A=21680.4120913.6C(r=0.99997，n=7，線性范圍：0.0550g/ml)。Money

15、 is the root of all evil. There is more trouble in having nothing to do than in having much to do. 1.6脂質(zhì)體凍干粉針的制備Self-confidence is the first requisite to human greatness. 1.7鹽酸伊立替康脂質(zhì)體凍干粉針的質(zhì)量評價將脂質(zhì)體凍干粉針?biāo)?，并稀釋至適當(dāng)?shù)臐舛龋糜诩す庋苌淞６确治鰞x中測定粒徑。將脂質(zhì)體凍干粉針裝于透明西林瓶中，充入氮氣密封，于不同條件下放置10天，分別于第0,5,10天取樣。高溫試驗條件為40；高濕試驗條件為相對濕

16、度(RH)92.5；強(qiáng)光試驗條件為4500LX的光照。將樣品取出后，從以下方面作質(zhì)量評價：色澤外觀、水化難易度、藥物含量、過氧化值、包封率。2結(jié)果2.1制備方法的篩選按“1.3”項下方法制備鹽酸伊立替康脂質(zhì)體，并分別測定包封率：薄膜分散法、逆相蒸發(fā)法、pH梯度法、硫酸銨梯度法所測得的包封率分別為10.1%,14.2%,96.8%,97.4%。由結(jié)果可知，pH梯度法和硫酸銨梯度法這兩種主動載藥方法制得的脂質(zhì)體包封率較高。Great winds blow upon high hills. 2.2硫酸銨梯度法制備處方工藝條件對鹽酸伊立替康脂質(zhì)體包封率的影響The sea refuses no riv

17、er. Quality is better than quantity. Take a pain for a pleasure all wise men can. One cannot be in two place at once. Everybodys business is nobodys business. Riches do not always bring happiness. Riches do not always bring happiness. 3討論對脂質(zhì)體中的藥物進(jìn)行定量時,須先進(jìn)行破乳破壞，常用破乳試劑為一些有機(jī)溶劑，如甲醇、乙腈、乙醇、DMSO、乙醚、異丙醇、正丁醇

18、等。本試驗曾嘗試使用上述溶劑進(jìn)行破乳，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，所用有機(jī)溶劑中，極性較高者破乳效果好，但會導(dǎo)致藥物峰變形；極性較低者雖不會導(dǎo)致藥物峰變形，但在一定倍數(shù)體積下，不能完全使脂質(zhì)體破乳，因而最終放棄了使用有機(jī)溶劑破壞囊泡的方法。乳化劑OP（聚乙二醇辛基苯基醚），具有優(yōu)良的增溶性能，濃度較低時即可使脂質(zhì)體破乳溶解在溶液中，本試驗在乳化劑與脂質(zhì)體液混合后，采用流動相溶解稀釋，這樣可以使藥物峰不發(fā)生變形，且不會出現(xiàn)溶劑峰?；厥章试囼炁c加樣回收率試驗表明，采用OP破乳、流動相溶解、HPLC定量的方法測定脂質(zhì)體中藥物含量的準(zhǔn)確度較高。對鹽酸伊立替康脂質(zhì)體制備方法的考察結(jié)果表明，主動載藥法包封率明顯高于被動載藥

19、法，原因可能是：被動載藥法的包封率太低。鹽酸伊立替康為水溶性的藥物，水溶性藥物的脂質(zhì)體普遍存在穩(wěn)定性差，容易滲漏等問題，而被動載藥法為先載藥，再通過機(jī)械方法調(diào)整粒徑，因此，即使載藥時得到的多室脂質(zhì)體包封率較高，經(jīng)過超聲，過膜等程序后，脂質(zhì)體膜遭到破壞，藥物可能會發(fā)生嚴(yán)重的滲漏，導(dǎo)致最后測得的包封率很低。主動載藥法包封率很高。伊立替康是一種弱堿性藥物，很適合用pH梯度法、硫酸銨梯度法等外堿內(nèi)酸的主動載藥法來制備脂質(zhì)體，由于離子梯度的維持，主動載藥法的包封率可以達(dá)到很高，因而最終測得的包封率達(dá)90以上。實際使用時，脂質(zhì)體粉針將被等滲的葡萄糖或氯化鈉等注射液稀釋，這樣，脂質(zhì)體外水相的滲透壓得以與生理

20、滲透壓相等，而內(nèi)水相卻始終保持著制備時的滲透壓，所以，采用主動載藥法制備脂質(zhì)體時，若內(nèi)水相滲透壓高出生理滲透壓很多，實際使用時在注射液稀釋過程中或打進(jìn)人體后，脂質(zhì)體就有可能吸收大量的水分，發(fā)生溶脹破裂，影響制劑的穩(wěn)定性與治療效果。因而，采用主動載藥法制備注射用的脂質(zhì)體制劑，如硫酸銨梯度法，內(nèi)水相硫酸銨濃度的提高雖然有利于顯著提高脂質(zhì)體的包封率，但硫酸銨濃度并不是越高越好，這個濃度有一個上限，若藥物的滲透壓忽略不計（本研究中藥物滲透濃度約2mmol/L，可忽略），這個內(nèi)水相硫酸銨濃度的上限就應(yīng)該是它的生理等滲濃度?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1SlatterJG,SchaafLJ,SamsJP,etal.Pha

21、rmacokinetics,metabolism,andexcretionofirinotecan(CPT11)followingI.V.infusionof(14)CCPT11incancerpatientsJ.DrugMetabDispos,2000,28(4):423-433.2王麗焱,湯致強(qiáng).抗腫瘤藥伊立替康的研究進(jìn)展J.國外醫(yī)學(xué)：藥學(xué)分冊，2004,31（1）:7-11.3劉瑋煒,趙躍強(qiáng),許瑞波,等.抗腫瘤新藥伊立替康的合成和應(yīng)用進(jìn)展J.淮海工學(xué)院學(xué)報,2005,14(4):42-51.4SinhaBK.Topoisomeraseinhibitors.AreviewoftheirtherapeuticpotentialincancerJ.Drugs,1995,49(1):11-19.5CersosimoRJ.Irinotecan:anewantineoplasticagentforthemanagementofcolorectalcancerJ.AnnPharmacother,1998,32(12):1324-1333.6MickR,GuptaE,VokesEE,etal.Limitedsamplingmodelsforirinotecanpharmacokineticspharmacodynamics:predicti