短暫性腦缺血發(fā)作患者清腦通絡(luò)方治療前后血漿CD41CD42b表達(dá)的臨

1、短暫性腦缺血發(fā)作患者清腦通絡(luò)方治療前后血漿CD41/CD42b表達(dá)的臨                         作者：孫景波，華榮，何莉娜，黃羽，曾星【摘要】 目的觀察短暫性腦缺血發(fā)作(TIA)患者治療前后血小板膜糖蛋白CD41、CD42b表達(dá)的變化。方法采用隨機(jī)對照試驗(yàn)，觀察病例338例，分為清腦通絡(luò)方組163例，阿司匹林組175例。觀察清腦通絡(luò)方

2、和阿司匹林腸溶片治療前后TIA患者血漿血小板膜糖蛋白CD41、CD42b表達(dá)的變化。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)，測定TIA患者的CD41、CD42b的分子表達(dá)。結(jié)果兩組均有顯著降低TIA患者血小板膜糖蛋白CD41表達(dá)作用，對CD42b的表達(dá)無明顯影響；治療后兩組血流變指標(biāo)有明顯改善。結(jié)論清肝活血治療對TIA患者血小板膜糖蛋白CD41表達(dá)有顯著抑制作用，能明顯改善TIA患者的血流變指標(biāo)。 【關(guān)鍵詞】 短暫性腦缺血發(fā)作； CD41； CD42bAbstract:ObjectiveTo study the correlativity of platelet membrance glycoprotein CD41

3、 and CD42b expression in patients with TIA before and after Qing Nao Tong Luo Fang therapyMethodsThe expressions of platelet CD41、CD42b were determined by flow cytometry and hemorheological indexes in 338 patients with TIA before and after therapy with Qing Nao Tong Luo Fang and aspirin.There were 1

4、63 patients in Qing Nao Tong Luo Fang group and 175 patients in aspirin groupResultsCD41 levels in two groups were significantly lower after therapy than before(P<0.05), CD42b levels in two groups did not significantly change. There was no difference between the patients in Qing Nao Tong Luo Fang

5、 group and in aspirin group(P>0.05)Ameliorate hemorheological indexes changed obviously.ConclusionQing Nao Tong Luo Fang therapy can inhibit platelet CD41 expression in patients with TIA and improve the ameliorate hemorheological indexes.Key words:Transient ischemic attack； CD41； CD42b 缺血性中風(fēng)不但發(fā)病率

6、高，而且病死率、致殘率、復(fù)發(fā)率均很高，絕大多數(shù)中風(fēng)在發(fā)病前的一段時(shí)間（數(shù)月乃至數(shù)年）有先兆表現(xiàn)，稱為短暫性腦缺血發(fā)作，中醫(yī)稱為中風(fēng)先兆證。在全國著名中醫(yī)腦病專家張學(xué)文教授指導(dǎo)下，我們通過多年臨床觀察，表現(xiàn)肝熱血瘀是中風(fēng)先兆證的主要病理機(jī)制。本研究應(yīng)用張學(xué)文教授經(jīng)驗(yàn)方“清腦通絡(luò)方”治療TIA，觀察該方對TIA患者血小板膜糖蛋白CD41、CD42b表達(dá)的影響和對血流變指標(biāo)的影響。現(xiàn)總結(jié)如下。1 臨床資料1.1 病例選擇診斷標(biāo)準(zhǔn)參照1995年中華醫(yī)學(xué)會(huì)第四次全國腦血管病學(xué)術(shù)會(huì)議TIA診斷要點(diǎn)1:為短暫的、可逆的、局部的腦血液循環(huán)障礙，可反復(fù)發(fā)作，少者12次，多者數(shù)十次；可以表現(xiàn)為頸內(nèi)動(dòng)脈系統(tǒng)和（或）

7、椎-基底動(dòng)脈系統(tǒng)癥狀和體征；每次發(fā)作持續(xù)時(shí)間通常在數(shù)分鐘至1 h左右，癥狀和體征應(yīng)在24 h以內(nèi)完全消失。凡年齡40歲以上，80歲以下，符合TIA診斷標(biāo)準(zhǔn)，且知情同意者可納入本觀察。排除標(biāo)準(zhǔn)：已發(fā)生腦卒中者；合并有心、肝、腎、造血系統(tǒng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)等嚴(yán)重原發(fā)性疾?。òㄐ姆坷w顫、心力衰竭、肝功衰竭、腎功衰竭、風(fēng)濕性疾病等）；精神病患者；有阿司匹林禁忌者。1.2 一般資料選擇2003030120041231在廣東省中醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科門診就診的TIA病人。本組設(shè)計(jì)觀察病例400例，最終完成病例338例，脫落62例。隨機(jī)分為兩組，治療組（清腦通絡(luò)方）163例，其中男101例，女62例；平均年齡（52.71

8、±7.38）歲。對照組（阿司匹林）175例，其中男103例，女72例；平均年齡（51.91±6.84）歲。兩組年齡、性別、TIA發(fā)作類型、發(fā)作頻度及治療前病程無顯著差異，具有可比性。                             1.3 試劑及儀器熒光素標(biāo)記的血小板單克隆抗體：雙標(biāo)試劑CD

9、41-FITC/CD42b-PE，同型對照IgG1-FITC/-PE（均購自美國Caltag公司）；儀器為美國Beckman Coulter公司流式細(xì)胞儀，型號(hào)為ELITE ESP型，激光光源為15 mW的氬離子激光。2 治療方法2.1 基礎(chǔ)治療兩組在試驗(yàn)性治療期間均進(jìn)行常規(guī)降壓、降脂、降糖治療，均不使用其他活血化瘀藥物、抗血小板藥物、抗凝藥物。2.2 治療組在基礎(chǔ)治療上加服清腦通絡(luò)方顆粒劑（單味藥顆粒劑由江蘇江陰中藥廠生產(chǎn)）。組成：決明子0.5 g（相當(dāng)于生藥10 g），丹參2 g（相當(dāng)于生藥10 g），山楂3 g（相當(dāng)于生藥10 g），赤芍1.5 g（相當(dāng)于生藥10 g），川芎2 g（相當(dāng)

10、于生藥6 g），水蛭0.5 g（相當(dāng)于生藥3 g），1劑/d，晨起用溫開水沖服，1次/d，連續(xù)服藥30 d。2.3 對照組口服阿司匹林腸溶片（德國拜爾制藥公司），100 mg/次，每天早晨1次，連續(xù)服藥30 d。2.4 觀察指標(biāo)觀察治療前和治療后兩組患者血小板膜糖蛋白CD41、CD42b表達(dá)和血流變指標(biāo)變化。2.4.1 CD41、CD42b檢測治療前和治療后采病人外周血1 ml，EDTA抗凝，樣品管加10 l雙標(biāo)抗體 + 100 l PBS + 5 l全血；對照管加10 l同型對照抗體 + 100 l PBS + 5 l全血，樣品管和對照管輕輕混勻，室溫避光孵育15 min；樣品管和對照管均加

11、入23 ml含1%多聚甲醛的PBS終止反應(yīng)，上機(jī)檢測。以CD41和CD42b 的前向及側(cè)向角光散射雙參數(shù)設(shè)血小板門，取血小板細(xì)胞群，計(jì)數(shù)CD41、CD42b陽性細(xì)胞百分比。2.4.2 血液流變學(xué)檢測治療前和治療后清晨用硅油處理的肝素鋰抗凝管空腹采肘靜脈血4 ml，搖勻，送我院檢驗(yàn)科檢測全血粘度，血漿粘度，血小板粘附率。2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)以±s表示，以t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，用PEMS統(tǒng)計(jì)分析軟件完成處理過程。3 結(jié)果3.1 兩組治療前后血小板膜糖蛋白CD41和CD42b表達(dá)比較結(jié)果見表1。表1 兩組治療前后血小板膜糖蛋白CD41和CD42b表達(dá)比較（略） 清腦通絡(luò)方組和阿司匹林

12、組治療后血小板膜糖蛋白CD41表達(dá)百分率和平均熒光強(qiáng)度均明顯降低（P<0.05），CD42b表達(dá)百分率和平均熒光強(qiáng)度無明顯變化（P>0.05）。3.2 兩組治療前后血液流變學(xué)指標(biāo)變化比較結(jié)果見表2。表2 兩組治療前后血液流變學(xué)指標(biāo)變化比較（略） 兩組治療后血液流變學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)均有改善，與治療前比較，差異有顯著性意義（P<0.05或P<0.01）。治療后治療組降低全血高切粘度與對照組比較，差異有非常顯著性意義（P<0.01）。4 討論 急性腦血管病是威脅人類健康的三大疾病之一，具有發(fā)病率高、致殘率高的特點(diǎn)，給社會(huì)和家庭帶來沉重的負(fù)擔(dān)。我國每年新發(fā)腦血管疾病約200萬例

13、，其中缺血性中風(fēng)約占中風(fēng)總數(shù)的55%80%?？寡“逯委熓怯行ьA(yù)防中風(fēng)的主要手段之一2。然而，許多患者雖然一直堅(jiān)持服用抑制血小板聚集的阿司匹林，但仍不能完全預(yù)防中風(fēng),這種現(xiàn)象與阿司匹林抵抗有關(guān)3。缺血性中風(fēng)危險(xiǎn)因素和病因較多，缺血性中風(fēng)的預(yù)防應(yīng)針對不同的病因和危險(xiǎn)因素進(jìn)行綜合預(yù)防4。 我們臨床研究發(fā)現(xiàn)，“肝熱血瘀”是導(dǎo)致缺血性中風(fēng)的根本原因，治療上應(yīng)用清肝和血治法自擬清腦通絡(luò)方治療中風(fēng)先兆證，該方主要由決明子、丹參、山楂、赤芍、川芎、水蛭等藥物組成，具有清肝和血、化瘀通絡(luò)功效5。我們以往的研究表明，清腦通絡(luò)方對降低TIA發(fā)作和預(yù)防中風(fēng)發(fā)生有明顯作用，尤其在改善TIA患者臨床癥狀方面作用顯著，能

14、顯著改善患者眩暈、頭痛、肢體麻木、失眠之臨床癥狀是該藥的顯著特點(diǎn)，明顯優(yōu)于阿司匹林，清腦通絡(luò)方具有明顯降低TIA患者TIA發(fā)作次數(shù)，預(yù)防和延緩TIA患者發(fā)生中風(fēng)的進(jìn)程6。                              血小板膜糖蛋白GP IIbIIIa(CD41CD42b) 是血小板膜上含量最多的糖蛋白，該

15、復(fù)合物是一個(gè)完整的功能單位，與膠原、vWF因子、纖維連接蛋白和玻璃體連接蛋白結(jié)合，發(fā)生血小板的粘附和聚集，此為血小板聚集、粘附和血小板血栓形成的最終關(guān)鍵步驟，是缺血性事件發(fā)生的重要環(huán)節(jié)，因此，CD41的表達(dá)可作為預(yù)測血栓性疾病的指標(biāo)。研究顯示腦梗死患者血小板CD41表達(dá)較對照組增高，我們利用流式細(xì)胞術(shù)檢測TIA患者CD41的表達(dá)，也發(fā)現(xiàn)CD41平均熒光強(qiáng)度和表達(dá)百分?jǐn)?shù)較對照組顯著升高，經(jīng)清腦通絡(luò)方治療后CD41平均熒光強(qiáng)度和表達(dá)百分?jǐn)?shù)顯著降低。 CD42b是血小板的主要糖蛋白之一，靜息時(shí)均勻分布在整個(gè)血小板膜表面，是凝血酶的受體，當(dāng)血小板被激活時(shí)，CD42b迅速從膜表面轉(zhuǎn)移到中央管中，導(dǎo)致膜表

16、面含量減少。本研究顯示，TIA患者治療前后CD42b無明顯變化（P>0.05）。 本研究表明，清腦通絡(luò)方能明顯抑制血小板CD41的表達(dá)，降低血小板粘附性，降低全血粘度和血漿粘度，因此，在治療TIA和預(yù)防缺血性腦血管病方面有明顯療效。【參考文獻(xiàn)】 1史玉泉.實(shí)用神經(jīng)病學(xué),第2版M.上海：上?？萍汲霭嫔?994：641.2Tran H,Anand SS. Ora1 antiplatelet therapy in cerebrovascular disease，coronary artery disease，and peripheral aneria1 diseaseJAMA, 2004,292：1867.3Hankey GJEikelboom