離子色譜法測(cè)定肝素鈉粗品中多硫酸軟骨素的含量

1、離子色譜法測(cè)定肝素鈉粗品中多硫酸軟骨素的含量摘要：目的:建立離子色譜法測(cè)定肝素鈉粗品中多硫酸軟骨素的含量的測(cè)定方法。方法:樣品溶解后，使用戴安AS11色譜柱分離，流動(dòng)相A為0.04% 磷酸二氫鉀溶液（pH3.0），流動(dòng)相B為含0.04% 磷酸二氫鉀和14% 高氯酸鈉的水溶液，梯度洗脫，流速1.0mL/min，紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為225nm。結(jié)果:本方法檢出限為0.5%。結(jié)論:本方法簡(jiǎn)便快捷,用于測(cè)定肝素鈉粗品中多硫酸軟骨素的含量,具有較低的檢出限。 關(guān)鍵詞 肝素鈉 粗品 多硫酸軟骨素 離子色譜法 肝素（heparin）是高度硫酸化的糖胺聚糖，由糖醛酸和葡萄糖胺以14 鍵連接起來(lái)的重復(fù)二糖單位

2、組成的多糖的混合物，含1030 個(gè)二糖單位不等。自從1937 年肝素在臨床上用作抗凝劑以來(lái), 肝素一直是一種主要的抗凝藥物，它被廣泛用于臨床，包括腎透析，急性冠狀動(dòng)脈綜合癥等。肝素主要從豬的腸粘膜中提取得到。我國(guó)是肝素生產(chǎn)大國(guó)，為肝素原料的主要出口國(guó)。肝素產(chǎn)品是一大類產(chǎn)品，包括肝素鈉（鈣）、低分子肝素鈉（鈣）、類肝素等等。2008年年初，美國(guó)百特公司生產(chǎn)的肝素鈉注射液在美國(guó)發(fā)生了嚴(yán)重的不良反應(yīng)。它的原料由我國(guó)的一家美資化工企業(yè)常州凱普生物化學(xué)有限公司生產(chǎn)。百特肝素鈉不良反應(yīng)事件后，中國(guó)藥品生物制品檢定所隨即對(duì)多個(gè)廠家多個(gè)批次的肝素鈉進(jìn)行了質(zhì)量分析，通過(guò)多種不同分析測(cè)試手段的聯(lián)合應(yīng)用，發(fā)現(xiàn)某些肝

3、素鈉中含有硫酸軟骨素、硫酸皮膚素及多硫酸軟骨素(OSCS)三種雜質(zhì)中的一種或幾種。肝素鈉粗品，除含有以上幾種物質(zhì)外，還含有蛋白等其他雜質(zhì)，成分復(fù)雜。 本文建立了離子色譜法測(cè)定肝素鈉粗品中多硫酸軟骨素含量的方法。通過(guò)樣品前處理方法和色譜條件的優(yōu)化，建立了一種較為完善的分離和檢驗(yàn)方法。 1.實(shí)驗(yàn)條件 1.1 儀器 Dionex ICS3000型離子色譜儀，Dionex AS11分析柱及保護(hù)柱，Dionex VWD紫外檢測(cè)器。 1.2 樣品前處理 準(zhǔn)確稱取樣品0.1g，加水溶解后，加入2ml乙腈，充分混勻后，4放置沉降10min，取出后用10000 rpm高速離心機(jī)離心10min，取上層清液4ml，

4、用氮?dú)獯蹈珊螅盟ㄈ葜?ml，定容后的液體過(guò)0.22m尼龍濾膜，之后過(guò)Dionex RP柱，濾液上機(jī)分析。 1.3 色譜條件 流動(dòng)相A：0.04%磷酸二氫鉀，pH3.0；流動(dòng)相B：0.04% 磷酸二氫鉀/14% 高氯酸鈉，pH3.0.二元梯度：0min，80%A；60min，10%A；61-75min，80%A； 流速：0.22mL/min柱溫：30。 2. 結(jié)果與討論 2.1 樣品前處理 樣品中含有大分子蛋白，如去除不徹底，容易降低柱效，造成分離度下降、保留時(shí)間縮短。使用乙腈沉淀，Dionex RP柱過(guò)濾，可有效去除樣品中蛋白，延長(zhǎng)色譜柱壽命，保證實(shí)驗(yàn)重現(xiàn)性良好。 2.2 色譜柱的選擇 樣

5、品去除蛋白后，含有的雜質(zhì)與主成分均為硫酸化的多糖。硫酸化多糖在強(qiáng)電解質(zhì)溶液中，可電離成為陰離子。根據(jù)其硫酸化程度的不同，在陰離子交換柱上有不同的保留。在戴安AS11色譜柱上，肝素與多硫酸軟骨素及其他離子均有較好分離。分離色譜圖如圖1所示。 圖1 肝素鈉粗品中多硫酸軟骨素含量測(cè)定色譜圖3. 結(jié)論 該方法準(zhǔn)確度、精密度均較高,且操作簡(jiǎn)便,適合于聚明膠肽注射液中琥珀酸的測(cè)定。 參考文獻(xiàn) 1. GAO Ning-guo(高寧國(guó)),CHENG Xiu-lan(程秀蘭),YANG Jing(楊敬),et al. ,Progress in biotechnology(生物工程進(jìn)展),1999, 19( 5):4 2.WEN Qiang(溫強(qiáng)),China pharmaceuticals(中國(guó)藥業(yè)),1998,8(8): 57 3.CHEN Rui(陳銳)，ZHOU Ling(周玲), Journal of snake(蛇志雜志),1997,9(3):4 4.PENG Jing-wei(彭晶瑋)，LI Zheng-bin(李正斌), Chinese Journal of hospital pharmacy(中國(guó)院藥學(xué)雜志),1998,18(6):259 5. XU Yi