多種自身抗體聯(lián)合檢測在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎診斷中的應(yīng)用

1、多種自身抗體聯(lián)合檢測在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎診斷中的應(yīng)用         09-09-27 16:20:00     編輯：studa20                    作者：趙玲莉,劉淑敏,馬慧英,王芳【摘要】  目的： 探討多種自身抗體聯(lián)合檢測在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）早期診斷

2、中的意義. 方法： 采用散射比濁法檢測類風(fēng)濕因子（RF）；間接免疫熒光法檢測抗核抗體（ANA），抗角蛋白抗體（AKA）；ELISA法檢測抗Sa抗體，抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（抗CCP抗體）；斑點(diǎn)法檢測抗聚角蛋白微絲蛋白抗體（AFA）. 結(jié)果： 各組自身抗體檢測的陽性率比較，抗AKA抗體，RF和抗CCP抗體的陽性率較高，分別為46.8%，45.8%和61.4%，為多種自身抗體聯(lián)合檢測中的最佳實(shí)驗(yàn)；RF，抗CCP抗體，抗AKA抗體三種抗體聯(lián)合檢測RA，為較好的組合項(xiàng)目，在RA檢測中有較高的應(yīng)用價(jià)值. 結(jié)論： 選擇適當(dāng)?shù)淖陨砜贵w指標(biāo)聯(lián)合檢測有助于提高RA檢測的陽性率. 【關(guān)鍵詞】  自身抗體；關(guān)節(jié)

3、炎，類風(fēng)濕；類風(fēng)濕因子    0引言    風(fēng)濕病是由不同病因引起并以累及多器官損傷為特征的自身免疫性疾病，臨床上多有反復(fù)發(fā)作性和漸進(jìn)性，典型的特征是存在多種變異體和重疊綜合癥，給診斷帶來一定困難1. 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)的早期臨床表現(xiàn)不典型，且多樣性2，至今仍沒有大家公認(rèn)的特異的生化、免疫或組織學(xué)診斷指標(biāo)，常造成誤診，其單項(xiàng)自身抗體檢測的靈敏度和特異性均有不足，類風(fēng)濕因子的檢出率偏低2-3. 因此，診斷以特定的癥狀，檢出特定的自身抗體為依據(jù)，尋找合適的檢測項(xiàng)目是提高RA早期確診率的關(guān)鍵.

4、我們通過對RA患者進(jìn)行多種自身抗體的聯(lián)合檢測，以探討RA早期診斷的臨床意義.    1材料和方法    1.1材料標(biāo)本選擇我院200701/200712風(fēng)濕?？崎T診確診為RA患者96例（RA組），年齡5065歲. 其中63例其他自身免疫疾病患者：系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE) 45例(SLE組)；干燥綜合征（PSS）8例（PSS組）；系統(tǒng)性硬化癥（SSc）10例（SSc組）. 另外選擇近期在我院健康體檢者30例，作為對照組. 類風(fēng)濕因子（rheumatoid factor，RF）檢測試劑（浙江伊利康公司）；抗核抗體（antinuclear

5、antibodies，ANA），抗角蛋白（antikeratin antibodies，AKA）抗體，抗Sa抗體，抗環(huán)瓜氨酸肽(cyclic citrullinated peptide，CCP)抗體（抗CCP抗體），抗聚角蛋白微絲蛋白（antifilaggrin antibody，AFA）抗體檢測試劑（德國歐蒙公司）.    1.2方法    1.2.1RF檢測（散射比濁法）人微球蛋白膠合于乳膠微粒，與待測樣本中的RF發(fā)生免疫反應(yīng)，引起微粒的凝集，增加濁度，>20 IU/mL為陽性.    1.2.

6、2抗ANA抗體，抗AKA抗體檢測（間接免疫熒光法）稀釋血清（ANA起始稀釋度1100，AKA起始稀釋度110）與包被基質(zhì)反應(yīng)，抗原與抗體結(jié)合，加入熒光素標(biāo)記，與基質(zhì)上的抗體反應(yīng)形成特異性熒光. ANA陽性可根據(jù)不同的熒光模式進(jìn)行判定其陽性結(jié)果，AKA陽性于角質(zhì)層出現(xiàn)線性或板層狀熒光判定為陽性.    1.2.3抗Sa抗體，抗CCP抗體檢測（ELISA法）將稀釋血清加入包被孔，血清中的特異性抗體與包被在固相上的抗原結(jié)合，酶標(biāo)記的抗人抗體與已結(jié)合的抗體反應(yīng)，結(jié)合的標(biāo)記抗體與底物液作用陽性呈現(xiàn)藍(lán)色，顏色深淺與抗體濃度成正比.    1.2.

7、4抗AFA抗體檢測（斑點(diǎn)法）將已稀釋標(biāo)本加入反應(yīng)板，稀釋血清中的抗體與抗原結(jié)合，酶標(biāo)記的抗人抗體與結(jié)合的抗體反應(yīng)，加入底物液顯色，陽性出現(xiàn)藍(lán)色條帶，條帶顏色深淺與抗體含量成正比.    統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：應(yīng)用SPSS10.0軟件統(tǒng)計(jì)，組間計(jì)量資料比較采用方差分析.     09-09-27 16:20:00     編輯：studa20    2結(jié)果    2.1各組自身抗體檢測的陽性率96例RA患者、63例其他自身免疫疾病患者及3

8、0例健康體檢者采用RF，抗ANA抗體，抗Sa抗體，抗AKA抗體，抗AFA抗體，抗CCP抗體自身抗體檢測結(jié)果如表1所示. 檢測中，RF，抗Sa抗體，抗AKA抗體，抗AFA抗體以及抗CCP抗體的檢出率明顯高于其他自身免疫性疾病患者及健康體檢者，其中，抗CCP抗體的檢出率最高.表1各組自身抗體檢測的陽性率    2.2不同自身抗體對RA診斷效能比較結(jié)果顯示，各組自身抗體在RA的早期實(shí)驗(yàn)診斷中均有一定的診斷價(jià)值. RF為RA篩檢的常用指標(biāo)，其陽性率為45.8，支持早期RA的傾向性診斷，但診斷缺乏特異性；抗ANA抗體的檢測陽性率為35.4，是活動性SLE非常敏感的參數(shù)，但并

9、非SLE特異的；抗Sa抗體檢測陽性率為39.6，其在RF陽性和陰性RA患者中均可呈現(xiàn)陽性，尤其對RF陰性的患者，可成為診斷RA的一個指標(biāo)；抗AKA抗體陽性率為46.8，可作為RA檢測的特異性指標(biāo)和RA診斷的輔助實(shí)驗(yàn)診斷項(xiàng)目，適合于早期不典型及血清陰性RA的診斷；抗AFA抗體檢測陽性率為37.5，其對RA早期診斷有意義，敏感性和特異性高，可出現(xiàn)于RF陰性的RA血清中；抗CCP抗體檢測陽性率為61.4，可作為RA早期診斷指標(biāo). 抗CCP抗體含量與RA病情嚴(yán)重程度及病程進(jìn)展有關(guān). 其中抗AKA抗體，RF和抗CCP抗體的陽性率較高，三項(xiàng)抗體聯(lián)合檢測，在臨床的應(yīng)用中具有較高的檢測價(jià)值. 

10、60;  3討論    RA是一種慢性全身性炎性疾病，目前仍以臨床表現(xiàn)為主要診斷依據(jù). 多年來，人們試圖尋找一種RA特異的診斷指標(biāo)，但仍沒有一個大家公認(rèn)的診斷指標(biāo). 為此，我們對96例RA患者進(jìn)行了多種自身抗體的聯(lián)合檢測與分析. 研究結(jié)果表明，自身抗體檢測是RA確診的重要的實(shí)驗(yàn)診斷，從各組自身抗體檢測的陽性率比較可以看出，抗AKA抗體，RF和抗CCP抗體的陽性率較高，可為最佳的聯(lián)合檢測方案.    RF識別的自身抗原是變性的IgG Fc部分，是最早發(fā)現(xiàn)的RA的自身抗體. 近年的研究3-4表明，RF與臨床表現(xiàn)和關(guān)節(jié)損傷程度密切

11、相關(guān)，是損傷指標(biāo)中最強(qiáng)有力的預(yù)后因子，其他自身抗體不能取代RF在診斷和預(yù)后判斷中的地位. 但RF陽性還存在于RA陰性的患者中，正常人尤其是高齡者可有5%的陽性，因而，RF對RA的診斷特異性欠滿意，RF陽性不能作為診斷RA的唯一標(biāo)準(zhǔn)5.    抗AKA抗體是由Inanc等6以Wistar大白鼠中段食管的角質(zhì)層為底物，采用間接免疫熒光法，在患者血清中發(fā)現(xiàn)的一種抗食管上皮角質(zhì)層的自身抗體，本研究中抗AKA抗體檢測的陽性率為47，而其檢測的特異性近90100，可作為RA檢測的特異性指標(biāo)及輔助實(shí)驗(yàn)診斷項(xiàng)目，以提高診斷的陽性率，特別是當(dāng)RF檢測陰性時(shí)，RA具有補(bǔ)充診斷的意義.

12、    抗CCP抗體是RA早期診斷的標(biāo)志物7，是RA早期診斷較好的指標(biāo)，也是鑒別浸蝕性、非浸蝕性RA的靈敏指標(biāo). 本研究中抗CCP抗體的檢測陽性率為61.4，其檢測陽性率為各項(xiàng)自身抗體最高，因此，將抗CCP抗體檢測用于RA早期診斷具有非常重要的臨床意義.    綜上所述，抗AKA抗體，RF和抗CCP抗體三種抗體聯(lián)合檢測，彌補(bǔ)了單一的RF對RA診斷的不足，提高了RA的檢出率及檢測特異性，為聯(lián)合檢測較好的組合項(xiàng)目，為RA的早期診斷及判斷預(yù)后提供了較為可靠的實(shí)驗(yàn)指標(biāo). 鑒于各項(xiàng)自身抗體檢測在RA的早期診斷中有著不同的意義，可以按照自己的實(shí)驗(yàn)

13、條件，選擇適當(dāng)?shù)捻?xiàng)目組合，有助于提高RA的早期確診.【參考文獻(xiàn)】  1 Kuhn KA, Kulik L, Tomooka B, et al. Antibodies against eitrullinated proteins enhance tissue injury in experimental autoimmune arthritisJ. J Clin Invest，2006，116(4)：961-973.2 Matsuo K, Xiang Y, Nakamura H, et al. Identification of novel eitrullinated autoanti

14、gens of synovium in rheumatoid arthritis using a proteomie approachJ. Arthritis Res Ther, 2006, 8(6)：1-3.3 Harrison MJ, Paget SA. AntiCCP antibody testing as a diagnostic and prognostic tool in rheumatoid arthritisJ. QJM, 2007, 100(4)：193-201.4 梅品玉,商新梅. 類風(fēng)濕因子測定方法及測定意義評價(jià)J. 臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2006, 5(12):2034.5 趙超，王雪. 類風(fēng)濕因子定量檢測在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診治中的應(yīng)用J. 實(shí)用醫(yī)技雜志，2005,12(5)：1345.6 Inanc N, Dalkilic E, Kamali S, et al. AntiCCP antibodies in rheumatoid arthritis and psoriatic arthritisJ. Clin Rheumatol, 2007, 26(1):17-2