惡性胸腔積液患者T淋巴細(xì)胞亞群的變化意義(一)

1、惡性胸腔積液患者T淋巴細(xì)胞亞群的變化意義(一)作者：王英禹，張瑞，張志培，周勇安，孫曉雁【關(guān)鍵詞】 胸腔積液；T淋巴細(xì)胞；CD4；CD8Value of measurement of Tlymphocyte subsets in patients with malignant pleural effusions【Abstract】 AIM: To measure Tlymphocyte subsets (TLS) in peripheral blood (PB) and pleural effusion (PE) in patients with malignant pleural effus

2、ions (MPE) and to study the changes of TLS in PB and PE in patients with MPE before and after chemotherapy. METHODS: The levels of TLS in PB and PE in patients with MPE or benign pleural effusion (BPE) and in PB of normal person were examined and compared; The levels of TLS in PB and PE were also co

3、mpared before and after chemotherapy. RESULTS: The distribution of TLS was similar in PB and PE in patients with MPE; the level of CD8+ T cell in PB of patients with MPE was higher than that in normal person (30.62.4 vs 20.91.8, P0.05), but the ratio of CD4+/CD8+ was lower than that in normal person

4、 (1.780.21 vs 2.710.35, P0.05), and the level of CD4+ T cell was similar with the normal; compared with BPE patients, MPE ones had lower level of CD4+ T cell and ratio of CD4+/CD8+ (P0.05), but higher level of CD8+ T cell in their PB and PE (P0.05); chemotherapy could depress CD8+ T cell (30.62.4 vs

5、 24.72.3, 31.62.4 vs 21.94.1, P0.05) and elevate the ratio of CD4+/CD8+ (1.780.21 vs 2.190.19, 1.690.30 vs 2.620.40, P0.05) in PB and PE in patients with MPE. CONCLUSION: The level of TLS in PE can be known by measuring it in PB; it is helpful to measure the level of TLS in PB and PE for distinguish

6、ing MPE from BPE; cellmediated immunity depression in MPE can be partly ameliorated by chemotherapy.【Keywords】 pleural effusion； Tlymphocyte； CD4； CD8【摘要】 目的：探討檢測(cè)惡性胸腔積液(MPE)患者外周血(PB)和胸水(PE)中T淋巴細(xì)胞亞群(TLS)的意義及化療前后TLS的變化. 方法：對(duì)比良性胸腔積液(BPE)、MPE患者外周血和胸水及健康正常人外周血中TLS的水平；對(duì)比MPE患者外周血和胸水中TLS的水平；對(duì)比MPE患者化療前、后外周血和

7、胸水中TLS的水平. 結(jié)果：TLS在胸腔積液患者外周血和胸水中分布相似；MPE患者外周血中CD8+ T細(xì)胞水平高于正常人（30.62.4 vs 20.91.8，P0.05），CD4+T細(xì)胞相仿，CD4+/CD8+低于正常（1.780.21 vs 2.710.35，P0.05）；與BPE患者相比，MPE患者外周血和胸水中CD4+T細(xì)胞、CD4+/CD8+較低（P0.05），而CD8+T細(xì)胞較高（P0.05）；化療后MPE患者外周血和胸水中CD8+T細(xì)胞水平明顯降低（30.62.4 vs 24.72.3，31.62.4 vs 21.94.1， P0.05），CD4+/CD8+明顯升高（1.780.

8、21 vs 2.190.19，1.690.30 vs 2.620.40，P0.05）. 結(jié)論：檢測(cè)外周血可以了解胸水中TLS水平；檢測(cè)外周血和胸水中TLS水平有助于BPE和MPE的鑒別；化療可部分改善MPE患者的細(xì)胞免疫抑制狀態(tài).【關(guān)鍵詞】 胸腔積液；T淋巴細(xì)胞；CD4；CD80引言腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與細(xì)胞免疫功能降低密切相關(guān), T淋巴細(xì)胞在其中起中心調(diào)控作用1. 為比較良性胸腔積液（benign pleural effusion, BPE）和惡性胸腔積液(malignant pleural effusion, MPE)患者的T淋巴細(xì)胞亞群(TLS)分布水平及對(duì)原發(fā)病的診斷價(jià)值，和化療對(duì)其影響，

9、我們選擇BPE，MPE患者的胸腔積液和外周血及正常健康人外周血進(jìn)行TLS檢測(cè).1對(duì)象和方法1.1對(duì)象診斷明確MPE 32(男21，女11)例，平均年齡57.9歲，鱗腺癌4例，腺癌28例；BPE (結(jié)核性) 29(男17，女12)例，平均年齡45.7歲；正常對(duì)照組選自體檢合格、肝、腎、肺功能完全正常健康人27(男14，女13)例，平均年齡34.2歲. 患者于治療前行胸腔穿刺術(shù)，收集胸腔積液，同時(shí)抽取靜脈血10 mL. MP患者經(jīng)NP方案化療2個(gè)周期后（蓋諾25 mg/m2 iv d1，d8；DDP 4050 mg d13，21 d為一周期），收集胸腔積液，同時(shí)抽取靜脈血10 mL. 采集體檢正常

10、健康人靜脈血10 mL.1.2方法胸腔積液用200 m尼龍網(wǎng)過濾組織于離心管；加入5 mL RPMI；18，200 g離心10 min，去除上清液，混懸細(xì)胞沉淀于20 mL RPMI，重復(fù)離心1次，重混懸細(xì)胞沉淀于5 mL RPMI, 加入PBS沖洗細(xì)胞，室溫下，200 g離心10 min，去除上清液. 重復(fù)此步驟. 混懸細(xì)胞沉淀于適量RPMI備用. 用臺(tái)盼藍(lán)計(jì)數(shù)活細(xì)胞百分率. 將肝素化的新鮮去紅細(xì)胞混懸液室溫下加入等量PBS混勻，每10 mL去紅細(xì)胞混懸液/PBS混懸液中加入3 mL FicollHypaque液. 18，900 g，離心30 min. 移除上層的血漿和血小板，緩慢的轉(zhuǎn)移中層

11、的單個(gè)核細(xì)胞層到錐形管，用3倍體積的HBSS洗滌細(xì)胞，18，490 g，離心10 min. 去除上清液. 用HBSS重新混勻細(xì)胞、洗滌并離心1次，去除上清液. 混懸細(xì)胞于RPMI備用. 用臺(tái)盼藍(lán)計(jì)數(shù)活細(xì)胞百分率. 計(jì)數(shù)外周血和胸腔積液淋巴細(xì)胞，用RPMI調(diào)整細(xì)胞度至2.5109/L，將l06淋巴細(xì)胞懸于100 L Hanks緩沖液(含1 g/L牛血清蛋白、0.1 g/L疊氮鈉)中，分別與20 L抗CD3APC(UCHT1)、抗CD4FITC(RPAT4)及抗CD8Cychrome(RPAT8) mAb或相應(yīng)IgG對(duì)照蛋白(均購(gòu)自美國(guó)BD Pharmingen公司)于4孵化30 min，Hank

12、s緩沖液洗滌2次，5 g/L多聚甲醛固定. 24 h內(nèi)用FACStar Plus流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD3，CD4，CD8細(xì)胞，計(jì)算CD4/CD8比值.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件，數(shù)據(jù)以xsx表示. 組間比較用MannWhitney U檢驗(yàn). 組內(nèi)前后比較用Wilcoxon signedrank檢驗(yàn).2結(jié)果2.1T細(xì)胞亞群的差異MPE患者外周血(PB)CD3+，CD8+ T細(xì)胞高于正常人對(duì)照組（P0.05），CD4+T細(xì)胞相仿（P0.05），CD4+/CD8+低于正常人對(duì)照組（P0.05）；BPE患者PB CD3+，CD4+，CD8+均高于正常人對(duì)照組（P0.05），CD4+/CD8+

13、相仿（P0.05）. BPE，MPE患者PB CD3+T細(xì)胞相仿（P0.05），前者CD4+T細(xì)胞、CD4+/CD8+高于后者，而CD8+T細(xì)胞低于后者（P0.05）. BPE，MPE中CD3+T細(xì)胞相仿（P0.05），前者CD4+T細(xì)胞、CD4+/CD8+高于后者，而CD8+T細(xì)胞低于后者（P0.05）. 患者外周血和PE中TLS分布相似（P0.05）（表1）.2.2化療后TLS的變化MPE患者化療前、后PB和PE中CD3+，CD4+T細(xì)胞無明顯變化（P0.05），而CD8+T細(xì)胞明顯降低，CD4+/CD8+明顯升高（P0.05，表2）.表1胸腔積液患者/正常人T細(xì)胞亞群（略）表2惡性胸腔積

14、液患者化療后T細(xì)胞亞群變化變化（略）3討論MPE患者外周血CD3+，CD8+ T細(xì)胞百分率明顯高于健康人，CD4+細(xì)胞無明顯差異，CD4+/CD8+比值明顯低于健康人. 提示MPE CD4+/CD8+比值降低是由于CD8+細(xì)胞增高所導(dǎo)致，反映了MPE患者的細(xì)胞免疫功能處于抑制狀態(tài). 而BPE CD3+，CD4+，CD8+T細(xì)胞百分率均高于健康人，CD4+/CD8+比值無明顯差異，反映了BPE患者的細(xì)胞免疫功能處于激活狀態(tài). 在外周血和胸腔積液中，兩者的CD3+T細(xì)胞百分率相似，但MPE患者的CD4+T細(xì)胞百分率、CD4+/CD8+比值低于BPE患者，CD8+T細(xì)胞百分率高于BPE患者. 提示檢

15、測(cè)外周血或胸腔積液中TLS，有助于臨床上對(duì)BPE，MPE患者的鑒別診斷. MPE患者的外周血和胸腔積液中CD3+，CD4+，CD8+ TLS百分率和CD4+/CD8+比值均相似，說明胸腔積液和外周血的分布水平非常接近，T細(xì)胞釋放到外周血和分配到胸膜腔的水平有關(guān)，通過外周血TLS的檢測(cè)可反映出胸腔積液T淋巴細(xì)胞水平. 化療后CD8+T細(xì)胞明顯降低，CD4+/CD8+明顯升高，而CD3+，CD4+T細(xì)胞無明顯變化. 提示常規(guī)化療后腫瘤細(xì)胞大量壞死或凋亡，腫瘤負(fù)荷減少而使免疫抑制因子減少，可部分改善患者的細(xì)胞免疫抑制狀態(tài)，但細(xì)胞免疫功能紊亂并未得到完全糾正.CD4+ T細(xì)胞(Th)可分泌IL2，TI

16、FN等細(xì)胞因子，并誘導(dǎo)或促進(jìn)自然殺傷(NK)細(xì)胞等多種細(xì)胞毒性細(xì)胞的活性，共同發(fā)揮抗腫瘤作用2. CD8+ T細(xì)胞(Ts)則抑制機(jī)體的免疫功能，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān). 惡性胸腔積液患者腫瘤細(xì)胞負(fù)荷增加，分泌免疫抑制因子增多，在抑制T淋巴細(xì)胞增殖、分化過程中造成Ts，Th細(xì)胞水平的增、減，以有利于腫瘤在宿主的轉(zhuǎn)移3. 因此，細(xì)胞比值是反映細(xì)胞免疫平衡狀態(tài)的敏感性指標(biāo)，本研究結(jié)果提示惡性胸腔積液患者存在明顯的細(xì)胞免疫功能低下、紊亂；T淋巴細(xì)胞亞群的測(cè)定對(duì)惡性胸腔積液的診斷及療效評(píng)估有一定價(jià)值；外周血中T淋巴細(xì)胞的檢測(cè)可以反映胸腔積液中T淋巴細(xì)胞分布水平. 并提示在有效化療殺傷癌細(xì)胞的同

17、時(shí)，應(yīng)輔助以免疫調(diào)節(jié)治療，從而提高患者的細(xì)胞免疫功能，更有利于延長(zhǎng)患者的生存期并改善其生存質(zhì)量4-5.【參考文獻(xiàn)】1 蕭劍軍，何潔冰，何庭宇，等. 中晚期肺癌患者T淋巴細(xì)胞亞群和紅細(xì)胞免疫功能檢測(cè)及臨床意義J. 廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2002，20(1)：15-16.2 Sigstad E, Dong HP, Nielsen S, et al. Quantitative analysis of integrin expression in effusions using flow cytometric immunophenotypingJ. Diagn Cytopathol, 2005，33(5): 325-331.3 Chen YQ, Shi HZ, Qin XJ, et al. CD4+CD25+ regulatory T lymphocytes in malignant pleural effusionJ. Am J Respi