免疫印跡法檢測(cè)在自身免疫性疾病 ENA 多肽抗體譜及 臨床意義

1、669經(jīng)驗(yàn)交流免疫印跡法檢測(cè)在自身免疫性疾病ENA多肽抗體譜及臨床意義劉軍鋒賈克剛劉運(yùn)德【摘要】目的探討免疫印跡法檢測(cè)自身免疫性疾病ENA多肽抗體譜的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法應(yīng)用免疫印跡法對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、混合性結(jié)締組織病(MCTD)、干燥綜合征(SS)、彌漫性硬皮病(PSS)、多發(fā)性肌炎/皮肌炎(PM/DM)、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)等140例自身免疫病患者進(jìn)行可提取性核抗原(ENA)多肽抗體譜檢測(cè)。一次性同時(shí)檢測(cè)抗Sm、抗U1RNP、抗SSA、抗SSB、抗Scl2、抗JO21、抗rRNP、抗DM253、抗RA254、抗DE等10種自身抗體。結(jié)果6種疾病抗ENA依次為75.6%、90%、70

2、%、50%、42.1%、25%,上陽性結(jié)果,說明患者血清中含有多種自身抗體,ENA免疫印跡法檢測(cè)ENA自身抗體操作簡(jiǎn)便、省時(shí)、特異性好、,可同時(shí)完成對(duì)10種自身抗體的識(shí)別和過篩,。【關(guān)鍵詞】自身免疫性疾病;抗體,結(jié)締組織病,不易被及早發(fā)現(xiàn),給患者帶來很大痛苦。為了解自身抗體在患者血清中的分布與表達(dá)情況,探討可提取性核抗原(extractablenuclearantigen,ENA)多肽抗體譜在自身免疫疾病診斷中的應(yīng)用價(jià)值及意義,本組應(yīng)用免疫印跡法檢測(cè)140例自身免疫病患者血清中10種ENA多肽抗體,現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下,以期對(duì)臨床診治有所幫助。資料與方法1.材料:(1)病例組:來自門診與住院、經(jīng)臨

3、床確診的140例自身免疫病(均符合國(guó)內(nèi)或國(guó)際各類有關(guān)風(fēng)濕病診斷標(biāo)準(zhǔn))患者,其中女100例,男40例,年齡1670歲。包括系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemiclupuserythematosus,SLE)患者45例;混合型結(jié)締組織病(mixedconnectivetissuedisease,MCTD)患者20例;干燥綜合征(Sfogrenssyndrome,SS)患者10例;彌漫性硬皮病(penetratedsclerosis,PSS)患者6例;多發(fā)性肌炎/皮肌炎(polymyositis/dermatomyositis,PM/DM)患者19例;類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoidarthritis,

4、RA)患者40例。(2)對(duì)照組:40例健康體檢者,其中女28例,男12例,年齡1468歲。2.方法:抗ENA多肽抗體譜試劑盒購(gòu)自廣州萬孚生物技術(shù)有限公司,嚴(yán)格按照說明書操作,可一次性同時(shí)檢測(cè)抗Sm、抗U1RNP、抗SSA、抗SSB、抗Scl270、抗JO21、抗rRNP、抗DM253、抗RA254、抗DE等10種自身抗體。結(jié)果140例病例組患者和40例健康對(duì)照組ENA多肽抗體譜見表1,抗ENA單項(xiàng)或多項(xiàng)陽性自身抗體分布見表2。1.表1顯示SLE患者,抗ENA譜陽性34例,陽性率75.6%(34/45),其中抗Sm陽性率44.4%(20/45)、抗U1RNP陽性率26.7%(12/45)、抗rR

5、NP陽性率8.9%(4/45);MCTD患者,抗ENA譜陽性7例,陽性率70%(7/10),其中抗SSA陽性率70%(7/10)、抗SSB陽性率40%(4/10);PSS患者,抗ENA譜陽性3例,陽性率50%(3/6),其中抗Scl270陽性率50%(3/6);PM/DM患者,抗ENA譜陽性8例,陽性率42.1%(8/19),其中抗JO21陽性率31.6%(6/19)、抗DM253陽性率10.5%(2/19);RA患者,抗ENA譜陽性10例,陽性率25%(10/40),其中抗RA254陽性率17.5%(7/40)。健康對(duì)照組未檢出自身抗體。2.表2顯示6種自身免疫病均存在多種自身抗體,SLE患

6、者兩種以上(包括兩種)自身抗體檢出率為17.8%(8/45)、MCTD患者檢出率為40%(8/20)、SS患者檢出率為40%(4/10)、PSS患者檢出率為16.7%(1/6)、PM/DM患者檢出率為26.3%(5/19)、RA患者檢出率為10%(4/40)。討論1.免疫印跡法是在抗原不同表位,從分子水平識(shí)別各種抗體所作用的抗原在蛋白多肽分子量上的差別、從抗原的蛋白多患者,抗ENA譜陽性18例,陽性率90%(18/20),其中抗U1RNP陽性率80%(16/20)、抗DE陽性率35%(7/20);SS作者單位:300457天津泰達(dá)國(guó)際心血管病醫(yī)院檢驗(yàn)科(劉軍鋒、賈克剛);300070天津醫(yī)科大

7、學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)系(劉運(yùn)德)肽水平上識(shí)別不同抗核抗體的一項(xiàng)新技術(shù)1。在抗體檢測(cè)的特異性和敏感性上不僅比瓊脂雙向免疫擴(kuò)散和對(duì)流免疫電泳方法高,而且能在一次檢測(cè)中,可同時(shí)完成對(duì)多種抗體的識(shí)別和過篩,為臨床能正確診斷與鑒別多種易混淆的自身免疫性疾病提供重要的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。本組采用廣州萬孚生物技術(shù)公司生產(chǎn)的免疫印跡法檢測(cè)ENA自身抗體試劑盒可同時(shí)篩查、鑒別抗Sm、抗U1RNP、抗SSA、抗SSB、抗Scl270、抗JO21、抗rRNP、抗DM253、抗RA254、抗DE等10種自身抗體。2.檢測(cè)結(jié)果顯示,SLE、MCTD、SS、PSS、PM/DM、RA等6種自身免疫性疾病抗ENA譜陽性率分別為75.6%、9

8、0%、70%、50%、42.1%、25%;6種疾病分別以抗Sm、抗U1RNP、抗SSA、抗Scl270、抗JO21、抗RA254檢出率為最高;6種疾病中兩種以上(含兩種)自身抗體檢出陽性率依次為17.8%、40%、40%、16.7%、26.3%、10%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示,6種自身免疫病除出現(xiàn)單項(xiàng)自身抗體陽性外,均出現(xiàn)了兩種以上(含兩種)陽性結(jié)果,說明患者血清中含有多種自身抗體,ENA系列抗體有相應(yīng)的疾病抗體譜。670表1各類自身免疫病患者和健康人ENA多肽抗體檢測(cè)結(jié)果ENA多肽抗體SLE(n=45)34201264004000MCTD(n=20)1801621000007SS(n=10)70074

9、000000PSS(n=6)30011300000PM/DM(n=19)8004206020RA(n=40)100053000070對(duì)照組(n=40)00000000000抗ENA譜抗Sm抗U1RNP抗SSA抗SSB抗Scl270抗JO21抗rRNP抗DM253抗RA254抗DE表2各類自身免疫病抗SLESS自身抗體抗Sm+抗U1RNP+抗SSA抗Sm+抗SSB抗SSA+抗SSB抗Sm抗U1RNP抗rRNP4221484陽性例數(shù)52191自身抗體抗SSA+抗SSB抗SSA陽性例數(shù)43抗U1RNP+抗DE抗U1RNP+抗SSA抗DE+抗SSB抗U1RNP抗DE表2各類自身免疫病抗ENA單項(xiàng)或多項(xiàng)

10、陽性自身抗體分布(續(xù))PSSPM/DMRA自身抗體抗Scl270+抗SSA+抗SSB抗Scl270陽性例數(shù)12自身抗體抗JO21+抗SSA抗JO21+抗SSA+抗SSB抗JO21+抗SSB抗JO21抗DM253陽性例數(shù)31112自身抗體抗RA254+抗SSA+抗SSB抗RA254+抗SSA抗SSA+抗SSB抗RA254抗SSA陽性例數(shù)112513.Sm抗體被認(rèn)為是SLE的標(biāo)志抗體,且與病程無關(guān),對(duì)早期、不典型的SLE或經(jīng)治療后回顧性診斷有較大的幫助,但有報(bào)道2曾根據(jù)膜上3個(gè)區(qū)帶(28×103、29×103、13.5×103)同時(shí)出現(xiàn)與否來判斷陽性或陰性,這樣檢出率

11、偏低。劉華平等報(bào)道只要3個(gè)區(qū)帶出現(xiàn)任何一條即可判為陽性,這樣大大提高了SLE的檢出率。4.多數(shù)學(xué)者建議,對(duì)一個(gè)測(cè)定結(jié)果的解釋要從兩方面考慮:一是抗體效價(jià),二是抗體的型別3。在抗ENA檢測(cè)中出現(xiàn)單項(xiàng)SSA抗體、SSB抗體、U1RNP抗體陽性,其臨床意義廣泛,SSA抗體、SSB抗體陽性可見于SS、SLE、MCTD、PM/DM、RA、PSS等患者;U1RNP抗體陽性可見于MCTD、SLE、PSS、RA、SS等患者,因此應(yīng)結(jié)合其他自身抗體和臨床加以綜合分析,得出正確診斷。5.本組6種自身免疫性疾病,因發(fā)病原因至今未明,臨床表現(xiàn)變化多端,不易被早期診斷。而免疫印跡法檢測(cè)ENA自身抗體操作簡(jiǎn)便、省時(shí)、特異性好、用血量少、無需特殊設(shè)備、重復(fù)性好(經(jīng)多次反復(fù)凍融的標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果完全一致),可同時(shí)完成對(duì)10種自身抗體的識(shí)別和過篩,對(duì)提高自身免疫性疾病的診斷水平有很大的幫助。參考文獻(xiàn)123劉敏,馮柏莊,俞純山.系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者自