侵染云南白肋煙的中國番茄黃化曲葉病毒及伴隨衛(wèi)星DNA分子的基因組特征_cropped

1、農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報L$8C:24 $D A7C3?84B8C24 M3$BE?>:$4$7= *(N) （+）： +*+O+(·研究論文·侵染云南白肋煙的中國番茄黃化曲葉病毒及伴隨衛(wèi)星P#A 分子的基因組特征 !李桂新 范三微李正和 謝 艷 周雪平 !"浙江大學(xué)生物技術(shù)研究所，杭州 )(*-,摘要!從中國云南省大理地區(qū)表現(xiàn)曲葉癥狀的白肋煙（#3?$B3:2 B2Q2?81 R>3BE M8C4E= ）上分離到病毒分離物 ST，該病毒可經(jīng)煙粉虱（ME13F32 B2Q2?3）及嫁接傳播。用 )+ 種粉虱傳雙生病毒的單抗對病樣進行 UAV0/;WVA 檢測，

2、結(jié)果表明，該病毒屬 菜豆金色花葉病毒屬（ME7$1$X3C8F）病毒。對 P#A0A )%K YQ 基因組序列測定和分析表明，ST 與中國廣西報道的中國番茄黃 化曲葉病毒（U$12B$ =E44$Z 4E2D ?8C4 >3:2 X3C8FN US;#）同源性達 -，其中 外 殼 蛋 白 "_, 氨 基 酸 同 源 性 達 -. ，因 此 ST 應(yīng)為 US;# 的一個新分離物。進一步研究發(fā)現(xiàn)，ST 還伴隨著一個長 ) T- :B 的衛(wèi)星 P#A 分子 （P#A! ）。STP#A! 與 !"# $%! 、MS P#A! 和 ;8 P#A! 的同源性較低，而與中國分離的煙

3、草曲葉病毒 S+ P#A!S P#A! 的親緣關(guān)系較近。P#A! 可能編碼 K 個分子量超過 %+ YP 的 abc，其中 ) 推測為有功能的 abc。 關(guān)鍵詞：中國番茄黃花曲葉病毒；衛(wèi)星 P#A! ；ME7$1$X3C8F；粉虱傳雙生病毒和dE:$13? >2C2?BEC3I2B3$: $D P#A0A 2:H AFF$?32BEH V2BE443BE P#A $4E?84E $D 2:WF$42BE $D U$12B$ SE44$Z ;E2D 8C4 >3:2 3C8F W:DE?B3:7 #3?$B32:2 B2Q2?81 R>3BE M8C4E= 3: S8:2:!;

4、3 d8393:c2: V2:ZE3;3 e>E:7>Ef3E S2: e>$8 f8EG3:7!"W:FB3B8BE $D M3$BE?>:$4$7=N e>EJ32:7 g:3XECF3B=N h2:7I>$8 )(*-N >3:2,U>E X3C8F 3F$42BE ST Z2F ?$44E?BEH DC$1 #3?$B32:2 B2Q2?81 R>3BE M8C4E= G42:B F>$Z3:7 4E2D ?8C4 F=1GB$1 3: P243NS8:2: _C$X3:?E% ST ?2: QE BC2:F13BB

5、EH B$ B$Q2?$ G42:BF Q= Z>3BED4= "ME13F32 B2Q2?3 , 2:H 7C2DB3:7% U>E CE2?B3$: Z3B> )+1$:$?4$:24 2:B3Q$H3EF C23FEH 2723:FB G2CB3?4EF $D Z>3BED4=0BC2:F13BBEH 7E13:3X3C8F HE1$:FBC2BEH B>2B B>E X3C8F 3F$42BE Z2F 2QE7$1$X3C8F % U>E 2:24=F3F $D )%K YQ P#A0A FEi8E:?EF $D ST CEXE24E

6、H B>2B 3B F>2CEH - :8?4E$B3HE FEi8E:?E 3HE:B3B= Z3B> U$12B$=E44$Z 4E2D ?8C4 >3:2 X3C8F "US;#, P#A0AN Z>34E -. 213:$ 2?3H FEi8E:?E 3HE:B3B= Z2F D$8:H D$C ?$2B GC$BE3: "_, 7E:E% U>ECED$CEN ST Z2F B29$:$13?244= ?$:F3HECEH 2F 2: :EZ 3F$42BE $D US;#% c8CB>EC FB8H3EF F>$Z

7、EH B>2B ST Z2F 2FF$?32BEH Z3B> 2:$XE4 F2BE443BE P#A 1$4E?84E "P#A! ,% VEi8E:?E 2:24=F3F CEXE24EH B>2B ST P#A! ?$:B23:EH ) T- :B 2:H >2H ?2G2?3B= B$ ?$HE FEXE: G$FF3Q4E abcF Z3B> 1$4E?84E ZE37>B $XEC %+ YPN 21$:7 Z>3?> ) ")% YP, Z2F GC$G$FEH B$ QE D8:?B3$:24% A437:1E

8、:B $D G8Q43F>EH P#A! FEi8E:?EF F>$ZEH B>2B ST P#A! Z2F 1$FB CE42BEH B$ S+ 2:H S P#A! & 2FF$?32BEH Z3B> U$12B$ =E44$Z 4E2D?8C4 >3:2 X3C8F N 2:H Z2F H3FB2:B DC$1 ASN MS 2:H ;8 P#A! U$12B$ =E44$Z 4E2D ?8C4 >3:2 X3C8F k F2BE443BE P#A! k ME7$1$X3C8F k Z>3BED4=0BC2:F13BBEH 7E13:3X

9、3C8F雙生病毒是一類具有孿生顆粒形態(tài)的植物單鏈P#A 病毒，根據(jù)其傳毒介體、寄主范圍及基因組結(jié) 構(gòu)的不同可分為 T 個屬，其中具有經(jīng)濟重要性的病 毒大多數(shù)屬于菜豆金色花葉病毒屬 "ME7$1$X3C8F ,病毒l)m。該屬病毒侵染雙子葉植物，在自然條件下僅由煙粉虱"ME13F32B2Q2?3 , 傳播，因而也 稱 粉 虱 傳 雙 生病毒l)m。大多數(shù) QE7$1$X3C8FEF 為雙組份病毒，基因組為兩條大小均為 *%+O%( YQ 的單鏈 P#A 分子，! 基金項目：國家杰出青年基金"#$% ()*+(*,和教育部“高等學(xué)校優(yōu)秀青年教學(xué)和科研獎勵基金”資助項目

10、。李桂新；女，)-.+ 年生，碩士，講師。/012345678393: ;3<=2>$%?$1%?:%! 聯(lián)系作者。 A8B>$C D$C ?$CCEFG$:HE:?E% /01234：6II>$8<IJ8%EH8%?:%收稿日期：*(*0)0*+ 接受日期：*(0()0)K分別稱為 $%&& 和 $%&(。$%&& 編碼與病毒的 復(fù) 制 、 包 裹 以 及 基 因 表 達 調(diào) 控 相 關(guān) 的 蛋 白 ，6=S <!8&&&8&VV888&5V5&58VV&&am

11、p;V#!；6=T! <!VV&&V88&V558&&&55&&&VV#!； (,EF"B <!VV5&88&85&8V85&8V8&V8&V88#!； (,EF"! <!VV5&885&8885888&VVVV5&8&8#!。!"2 序列分析$%& 序 列 用 $%&YEF2 軟 件 CPFZ14.G:I14N: Y&M及 $%&P&% 9,241

12、.G ;N" C7LGG.G (1.4.E:3,+,: 8FGFZFM 進行處理和分析。多序列比較采用$%&YEF2 8K34EFK I 方 法 ， 進 化 樹 構(gòu) 建 采 用$%&P&% 的鄰近相連法（G,1-J+.2.1G1G-）。用于$%&& 序列比較和進化分析的病毒有：菜豆金色花 葉 病 毒 C(VP9: P=M，白 麻 花 葉 病 毒（&+P9: <BB#?），番茄金 色 花 葉 病 毒C5VP9: X"!"!>M，勝 紅薊黃脈病毒 C&699: _?;<B=M，棉花曲葉病毒（87

13、839: &!?"#）， 煙 草 曲 莖 病 毒 C58Y9:&S!;"=?<M， 云 南 煙 草 曲 葉 病 毒 C5786%9:&S!;"=?;M， 中 國 南 瓜 曲 葉 病 毒 CY7889:&("!?;=<M，中國番茄黃化曲葉病毒 C56788%9:&S#BB?#;M， 日 本 煙 草 曲 葉 病 毒 C5789:&("!="M，印度木薯花葉病毒Ca8P9: O!;?<M，秋 葵黃脈曲葉病毒（(69P9: &!;B<?>），津巴布韋 煙 草

14、 曲 葉 病 毒C578O9: &S#<"#"M，非 洲 木 薯 花 葉$%&( 編 碼 的 蛋 白 與 病 毒 運 動 有 關(guān))!*。 少 數(shù)+,-./.01234,4 如番茄黃化曲葉病毒（56789）、番茄曲葉病毒（5789）僅含單個 $%& 組份，相當(dāng)于 雙組份病毒的 $%&&)#:;*。近來對新加坡勝紅薊黃脈 病毒（&699）和巴基斯坦棉花曲葉病毒（87839） 的研究發(fā)現(xiàn)，這兩種單組份病毒伴隨著一種新的衛(wèi) 星 $%& 分子，稱為 $%&! ，是癥狀形成所必需的)<:=*。粉虱傳雙生病毒多發(fā)

15、生在熱帶、亞熱帶及部分 溫帶地區(qū)，目前已有 #> 個國家和地區(qū)的番茄、木薯、 棉花等多種作物遭受到其毀滅性的危害)?*。近年來 我國廣西、云南等省多種作物上普遍發(fā)現(xiàn)類似雙生 病毒引起的癥狀，并已先后報道多種雙生病毒)ABB*。 本文報道了引起云南大理白肋煙曲葉病的病毒分離 物 6;# 及其伴隨衛(wèi)星 $%& 分子的基因組結(jié)構(gòu)，分 子鑒定證實該病毒分離物為中國番茄黃化曲葉病 毒，并伴有衛(wèi)星 $%& 分子。材料和方法!毒源及繁殖病毒分離物 6;# 采自云南省大理田間表現(xiàn)曲 葉癥狀的白肋煙 C%1D.E1FGF EF+FD3/ IJ1E, (32K,LM!"!病 毒 C

16、&8P9:_B?"><M， 東 非 木 薯 花 葉 病 毒（W&8P9: O#!<=）， 泰 國 番 茄 黃 化 曲 葉 病 毒C56785Q9: _=#"B<M，番茄黃化曲葉病毒C56789:_B<=<=M， 撒 丁 島 番 茄 黃 化 曲 葉 病 毒 C5678Y9:_=BB<#M，澳大利亞番茄曲葉病毒C5.789: Y<#!<BM。 用于 $%&! 序列比較的 "#$! 分子有：新加坡勝 紅薊黃脈病毒（&699! % &!<!"?!），印度秋葵黃 脈

17、曲葉病毒C(69P9! : &#"!<M，巴基斯坦棉花 曲葉病毒 C87839! "B: &!>!?=>b 87839! "!:&!>>"#M， 煙 草 曲 葉 病 毒 6<、6 分 離 物 C6<! %&!B=!#b 6! : &!B=!M。植株，在實驗室經(jīng)粉虱傳 毒 至 健 康 的 普 通 煙EF+FD3/ M上。!"$三抗體夾心 %&() *+)(%&(), 測定按 OJ.3 等)B!*的方法進行。雙生病毒單克隆抗體 及 &8P9 多

18、 抗 均 由 英 國 蘇 格 蘭 作 物 研 究 所 QF2214.G 教授提供。!".植物總 /0) 提取 參照謝艷等)BB*報道的方法進行。C%N!"1病毒 /0)，/0)!的克隆及序列測定根據(jù)雙生病毒共同區(qū)及外殼蛋白基因保守序列設(shè)計簡并引物 R& 和 R(，將 R&、R( 擴增的 $%&& 片段進行序列測定，根據(jù)測出的序列設(shè)計引物 6=S 和 6=T! 擴增其余部分 $%&&；根據(jù)謝艷等 )B#*報道 的方法合成用于擴增全長 $%&! 的引物 (,EF"B 和 (,EF"!。R8T 反應(yīng)條件參

19、照 OJ.3 等 )B!*的方法。擴增 的序列克隆至 UVWP5 載體，用載體上通用引物及 根據(jù)測出序列設(shè)計特異性的內(nèi)部引物用于序列測 定。各引物序列為：R& <!5&&5&55&88XVIXV988Y8#!；R( <!5VV&8655T8&IVV(88558&8&#!；結(jié)果和分析$"!癥狀與 +)(%&() 檢測感病白肋煙植株表現(xiàn)典型的雙生病毒引起的癥 狀，主要為植株矮化、葉片向下卷曲、葉脈增厚外突 和葉片背面有耳突，其癥狀類型與我們已報道的云 南煙草曲莖病毒 （5Y89） 和 云 南 煙

20、草 曲 葉 病 毒 C5786%9M 有所不同，后兩者一般無耳突癥狀)B":BB*。6;# 經(jīng)粉虱傳毒或嫁接傳毒后在煙草上產(chǎn)生類似田間表現(xiàn)的癥狀。利用印度木薯花葉病毒Ca8P9M、非洲木薯花葉第 ! 期李桂新等：侵染云南白肋煙的中國番茄黃化曲葉病毒及伴隨衛(wèi)星 #$% 分子的基因組特征!N病 毒和 秋 癸 曲 葉 病 毒的 單 抗H(/&R 有強烈反應(yīng)，表明它們有某些相似的抗原決%(OPTK(PH(/&DM&SQ 對 CDE 進行 G%HIJKLH% 檢測。結(jié)果顯示 CDE 能 與 H(/&R 和 NS 產(chǎn) 生 較 強 反 應(yīng) ， 而 與 H(/NE 和

21、 QR 單 抗 反 應(yīng) 較 弱 。 CDE 及 我 國 報 道 的 GCK($P、GH(P、GK(C$P 和 HK(C$P 都 與定簇，而與其它單抗的反應(yīng)不盡相同。相比而言，CDE 與 GCK($P 的抗原表位型差異較 小 ， 而 與GH(P、GK(C$P 和 HK(C$P 差異較大（表 &）。表 ! #$% 與中國其它雙生病毒的表位抗原型比較G2<10 & (4;82:+6456 4= 08+34806 4= CDE 259 4370: <0,4;4F+:B606 +6412309 +5 (7+52 +5 G%HIJKLH%病毒單克隆抗體 O454>1452

22、1 253+<49H(/ $4.P+:B6&D&&RNSNE!E!D!Q!RQNQQQR&SQCDEGCK($P G(HP S GK(C$PHK(C$PSS S SSSS D SSDD S DEDD S DD&D S SSSS E&ESS N NESS N NSES S ENSS& ESSS& SSSS S N&&S S SSSD S SD&DMNE 為 %(OP 的單抗；!EMQR 為 L(OP 的單抗；&SQ 為 TK(P 的單抗；數(shù)值表示 %DS! 5; 的吸光值，D!&.RV

23、EW&.N&M&.RV NWS.Q&M&.NV &WS.EMS.QSV S"S.E. O%<6 H(/ &DMNE X0:0 :2+609 2,2+563 %(OPY H(/!EMQR 2,2+563 L(OPY H(/&SQ 2,2+563TK(P. H>4:06（D，E，N，&，S）:08:06053 %D!S :25,06 26 =4114X6Z D!&.RV EW&.N&M&.RV NWS.Q&M&.NV &WS.EMS.QSV S&qu

24、ot;S.E.!"!$%& 部分 ()I) 基因組結(jié)構(gòu)與其它雙生病毒的比較簡并引物 )% 和 ) 能從 CDE 總 #$% 中擴增!SS <8 的特異性條帶，而健康對照無此條帶，根據(jù) 測定序列選用 CQ* 及 CQ/N 擴增出 & 條 &.! _< 的 特異條帶，兩段序列拼接后長 & SN <8（JOK 登 錄號為 %!&N!D）。和大多數(shù)舊世界（指美洲以外 地區(qū)）雙生病毒相似，CDE 病毒鏈共編碼 N 個 T/*， 即 %PN（aa!DDQ）和外殼蛋白?()b?NRa!&SNa，%PN 編碼 & 個 &

25、;&! 個氨基酸的蛋白，而 () 編碼 N!Q 個 氨基酸，%PN ("端與 () $" 端部分重迭。CDE 互補鏈 共有兩個完整的 T/*，即 T/* %(N ?&&N!&!Q 和 T/* %(E ?&SN!&DE&，它們編碼的 %(N 和 %(E 蛋 白均為 &ED 個氨基酸，兩者的大部分序列重迭，但 讀碼框不同。() 是雙生病毒中較保守的 T/*，基于 () 的進 化分析能很好地用于雙生病毒的分類、鑒定與系統(tǒng) 分析c&Dd。為了明確 CDE 分離物的分類地位及與其它 病毒的系統(tǒng)關(guān)系，我們選擇了我國

26、已報道的粉虱傳 雙生病毒 () 構(gòu)建了系統(tǒng)關(guān)系樹（圖 &）。從圖 & 可 看出，來源于新世界（指美洲）的 GeOP 與其它舊圖 & 基于 外殼蛋白（()）構(gòu)建的雙生病毒分子進化樹*+, &. /0123+4567+8 9059:4,:2; <2609 45 21+,5;0536 4= >4238:430+5 ?() 2;+54 2>+9 60AB05>06 4= CDE 259 4370:<0,4;4F+:B606序列同源性置于各分支點上。)0:>0532,06 4= 2;+54 2>+90 60AB05>0 +9

27、053+3+06 2:0 812>09 23 02>7 5490.世 界關(guān) 系 較 遠 ， 而 舊 世 界 的<0,4;4F+:B606<0,4;4F+:B606 又形成非洲和亞洲兩分支。盡管兩個分支的某些病毒能侵染相同的寄主并引起相似的癥狀，但它們的親緣關(guān)系并不緊密；相反，它們與本地侵染不同寄主的其它病毒緊密相關(guān)。例如，來源于非洲侵染 煙 草 的%R+SL 與 亞 洲 的 %R+TL、%U+L、%R+:L 較遠，而與非洲大陸侵染木薯等作物的;+VL、W;+VL 的關(guān)系較近。在進化樹上，A# 與 我國廣西報道的 %R+:L 密切相關(guān)，+Q 的同源 性高達 XYHZ，而與

28、舊世界其它 )C,-,D0/41)1 的同 源性明顯較低，僅為 ZAH!M"HX 不等，與 新 世 界 的 )C,-,D0/41)1 則更低，僅為 HXMZ#H#。進一 步 比 較 發(fā) 現(xiàn) ，A# 9:;$; 與 %R+:L 全 基 因 組 核苷酸序列同源性為 X，顯著高于與其它病毒的 同源性。;L!、;+!、;+# 氨基酸序列比較結(jié)果與 +Q 和 9:;$; 的 比 較 相 似 ， 兩 者 的 同 源 性 分 別 為 X#H" 、HF 、YH ，與 其 它 病 毒 則 顯 著 較 低（ 表!）。!"#病毒伴隨 %&! 的基 因 組 結(jié) 構(gòu) 及 與 其 它

29、 病表 ! #$% 與其它雙生病毒部分 &($(（核苷酸）及病毒鏈 )*+（氨基酸）的同源性比較%&() ! +,-.&/01,21 ,3 245(),607) &27 &-02, &507 1)84)25)07)26060)1 ,3 .&/60&( 9:;$; &27 )25,7)7 <=>1 )6?)2 A#9:;$; &27 ,6B)/ )C,-,D0/41)1病毒 L0/419:;$;F）+Q!）;L!）;+!）;+#!）新世界:)?,/(7%R+:L%R+%bL UR+:L+R+4L%R+:L

30、%U+L;LL%R+TLc+VL%R+L%R+UL;+VL UR+:L%R+SLKLVLHZ"HY ZZHY ZYHX ZYHZ ZYHY ZYHA Z#H" Z#H" Z!HX ZFH ZFHZ ZFH ZFH! Z"HXYHZ"HF"HF"HF ZHA ZXH#!H" ZZH# ZHX ZZH" ZHX ZAH! ZHY Z#H"ZXH#X#H"ZFHAZH" ZYHZ Z#H" Z#H" ZHY ZH# Z#H! Z!H! Z#H" ZFH

31、Z!H Z#H"HFHFZH# ZXHXXHAYHZ Z"HFAH! YZHY!HZFH! YXH""HA YFHY"HAFHXYHYHF ZYHA!HZXHAYHZ Z"HFZH!AH!XHA YHZYHZYHZHAZH!毒 !"#!的比較我們對我國云南分離的 )C,-,D0/41)1 的研究中未發(fā)現(xiàn)存在 9:;$K 組份，推測它們應(yīng)為單組份 病毒，而我國廣西報道的 %R+:L 經(jīng)證實為單組份病毒FY_?？紤]到伴隨 9:;!分子 ;LL、+R+4L W;+VL Z"HA "HX !HZ YH"

32、 AH! 等 均 為 單 組 份 病 毒 ， 因 而 我 們 根 據(jù) 已 報 道 的;LL! 和 +R+4L! 序 列 的 保 守 區(qū)（5,21)/D)7/)C0,2P +=）設(shè) 計 了 引 物 K)6&"F、K)6&"!，并 對 A#進 行 了 檢 測 ， 結(jié) 果 發(fā) 現(xiàn) A# 分 離 物 的 確 伴 隨 有9:;! 分子（圖 !）。全序列測定表明，A# 9:;! 長 F #AX 26（WVKR 登錄號為 ;TA!"#FA），共可編碼 Z 個分子量大于 #HY 9 的 <=>，其中病毒鏈編碼 A 個 <=> （LF、L!、

33、L#、LA），互補鏈編碼 # 個 <=>（+F、+!、+#），其中編碼蛋白分子量大于 F" 9 的 僅有 L! 和 +F 兩個 <=>，分別編碼 F"HX 9 和 F#H9 蛋白。9:; 軟件分析表明，<=> +F 含有 9:;聚 合 酶 " 轉(zhuǎn) 錄 所 需 的 %;%; ,a （YFMYY）、+;% ,a （ZMZZ!） 及 .,(G ; 轉(zhuǎn) 錄 終 止 信 號（FAFMFA）等，推測其為有功能的 <=>。K)6&"F 和 K)6&"! 引物所在的 += 區(qū)長 FFY 26，含有

34、在所有雙 生病毒 9:;$; 及 9:;$K 中的保守的核苷酸序列%;%;%;+ 及莖環(huán)結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)是雙生病毒滾環(huán) 復(fù)制時所必須的，因此推測 += 區(qū)與衛(wèi)星的復(fù)制相 關(guān)。此外該衛(wèi)星分子的 ZFMF""A 富含 ;（X），稱 為 ;$ 富含區(qū)（;$/05B /)C0,2），其生物學(xué)意義尚不清 楚，推測是為了滿足包裹或運動的需要而由序列重 復(fù)產(chǎn)生的Y_。將 A# 9:;! 與已報道的 9:;! 進 行 比 較（ 表 "） 發(fā) 現(xiàn) ，A# 衛(wèi) 星 與 ;LL、KLVL 及+R+4L 衛(wèi)星的同源性較低，僅為 AXH"MAH#，低舊世界 KIVLYAHYAHA Y

35、!HXHXZFHA Z#H#$AYHZA#HA AHYAZHZAZHZ AXH<(7?,/(7;VL%IVL$ 無匹配的 <=>E F）核苷酸同源性；!）氨基酸同源性。$ 2, .&/&()( <=>；F）245(),607) 1)84)25) 07)2606GE!）&-02, &507 07)2606GH圖 !H 9:; ! 基因組結(jié)構(gòu)圖>0CH !H I)2,-05 ,/C&20J&60,2 ,3 A# 9:;!;H 預(yù)測的 <=> EKH <=> +F 及其推測的順式元件。LFML

36、AN 病毒鏈編碼的 <=>E +FM+AP 互補鏈編碼的 <=>E +=P 保守區(qū)。;H Q/)7056)7 <=>1 E KH <=> +F &27 061 ./)7056)7 501$&5602C )()-)26H LFMLAP <=>1 02 D0/&( 1)21)E +FM+AP <=>1 02 5,-.()-)26&/G 1)21)E+=P 5,21)/D)7 /)C0,2H第 ! 期李桂新等：侵染云南白肋煙的中國番茄黃化曲葉病毒及伴隨衛(wèi)星 #$% 分子的基因組特征!/-表 ! #

37、$! %&! 與其它雙生病毒 %&! 的同源性比較=H<ZI 0 >IOTIQRHJIP Ka Q6TZIKRNVI HQV HLNQK HTNV PI6IQTI其中互補鏈的 A:B 12 能編碼含 22* HH 的多肽，且含有轉(zhuǎn)錄所必須的順式元件。對已報道的及我們測定的 #$%! 分子比較發(fā)現(xiàn)，A:B 12 無論在位置、NVIQRNRNIP <IRXIIQ #$%!Ka .30 HQV KRIO <IJKLKMNO6PIP大小還是氨基酸順序上均存在明顯的保守性，而其它 A:B 在 各 個 #$%! 分 子 間 并 不 保 守 （ 待 發(fā) 表 ）。 因

38、此 我 們 推 測 12 是 .30 及 其 它<IJKLKMNO6PIP 伴隨 #$%! 分子中有生物學(xué)功能的 A:B。初步研究表明，#$%! 的 12 A:B 突變后，病 毒不能形成野生型的癥狀，僅形成 #$%&% 單獨侵 染相似的癥狀，但突變的 #$%! 分子仍能被輔助 病毒 #$%&% 所復(fù)制（待發(fā)表），進一步證實 12 在#$%! 致病中的作用。衛(wèi)星 :$% 在植物 :$% 病 毒中廣泛存在，但直到 2- 年才從 <IJKLKMNO6PIP 中的 =514 分離到第一例 #$% 病毒衛(wèi)星，該衛(wèi)星 長 7*/ QR，對癥狀無明顯的影響?2*。目前，我們正在

39、進一步研究 %&! 分子的功能及與 #$%&% 的互 作機制。%.44!8.494!15164! (2 15164! (/.!.*!#$%! 2f12/f1:2f73)0!)7-7)!()302)3-0)(3-)-0()!-0)(3-)(0()!-7)!*)/-3)-*)0*0)0*)2-*)02f核苷酸同源性；/f氨基酸同源性。2f Q6TZIKRNVI PI6IQTI NVIQRNRSg/f HLNQK HTNV NVIQRNRS)于它們輔助病毒 #$%&% 之間的同源性（()*+,!)-+），而與我國云南分離的 .! 和 .*! 同源性 則較高，分別為 *)/+和

40、 *)0+。12 氨基酸序列的同 源 性 與 #$%! 全 序 列 結(jié) 果 相 似 ， 與 .!和.*! 高 達 -3)-+ 和 *)2+ ， 而 與 %.44! 和!"#$#! 、15164! 僅 為 0()!+ ,!)7+ 。 顯 然.30 #$%!與 .! 、.*!緊 密 相 關(guān) ， 而 與%.44! 、8.494! 和 15194!親緣關(guān)系較遠。對 1: 的比較發(fā)現(xiàn)，.30! 與這些衛(wèi)星的同源性達-0)(+,-*)0+，顯著高于基因組中的其它部分序列。參 考 文 獻2:S<NT; U >G 8ONVVKQ : WG 8OKXQ E YG IR HZ) BHLNZS

41、ILNQNMNONVHI) MHQ :IJIQLKORIZ 9 C 4G BH66IR 1 9G8NPKG # C 5G IR HZ) 4NO6P =H_KQKLS DIMIQR :IKOR Ka RIbQRIOQHRNKQHZ 1KLLNRRII KQ =H_KQKLS Ka 4NO6PIP)$IX.KO; %THVILNT >OIPPG /() /*!,/-5HcHOKXNRc # ) ILNQNMNO6PIP JIQKLI PRO6TR6OI HQV JIQIa6QTRNKQ) 1ONRNTHZ :IM >ZHQR DTNG 2-/G 22 0/,03-討論!我們對引起白肋煙

42、曲 葉 病 的 病 毒 分 離 物 .30的研究發(fā)現(xiàn)，其 2) ;< #$%&% 與 =.511$4 的同 源性為 *-+ ，1> 同 源 性 更 高 達 -7+ ，%4/、%1/ 和%10 的同源性也顯著地高于其它病毒。一般認為， 雙生病毒全基因組大于 *-+ 應(yīng)認為是同一種病毒 的 不 同 株 系 或 分 離 物?2，因 此 ，根 據(jù) 2) ;< #$%&% 序列及編碼 A:B 的比較結(jié)果，.30 應(yīng)是 =.511$4 的一個分離物。此外，.30 與泰國 =.51=C4、巴基 斯坦的 15164 及我國報道的 D51.$4、=51.$4 和 =D14 親緣

43、關(guān)系也較為緊密，而與在煙草上引起 相似癥狀的 =51E4 和 =51F4 關(guān)系并不密切。對引起新加坡勝紅薊黃脈病的 %.44 及巴基 斯坦棉花曲葉病的 15164 研究表明，這類病毒伴 隨著一類新的 #$% 分子 ，稱 為 #$%! ，除 保 守 的=%=%=%1 序列以外，#$%! 與 #$%&% 沒有顯 著的同源性，其復(fù)制、包裹、移動及介體傳播等都依/0 $HMKR $G >NTIOP; UG FINVHQ 9G IR HZ) =KLHRK SIZZKX ZIHa T6OZMNO6PH XNRIaZS&ROHQPLNRRIV JILNQNMNO6P XNR H PNQ

44、JZIJIQKLNT TKLKQIQR) 4NOKZKJSG 2-2G 2*! 2!2,272#OS b 8G :NVJIQ E UG YOH;I 5 :G IR HZ) $6TZIKRNVI PI6IQTI HQV JIQKLI KOJHQNcHRNKQ Ka RKLHRK ZIHa T6OZ JILNQNMNO6P) EIQ 4NOKZG 2-0G 323,2!23! DH6QVIOP YG 8IVaKOV b #G 8ONVVKQ : WG IR HZ) % 6QN6I MNO6PTKLZI_ TH6PIP %JIOHR6L SIZZKX MINQ VNPIHPI) >OKT $H

45、RZ%THV DTN dD%G /(G - 7*-(,7*-!7 8ONVVKQ : WG 9HQPKKO DG 8IVaKOV b #G IR HZ) bVIQRNaNTHRNKQ Ka#$% TKLKQIQRP OI6NOIV aKO NQV6TRNKQ Ka TKRRKQ ZIHa T6OZ VNPIHPI) 4NOKZKJSG /(2G /*! /03,/30 9KaaHR % D) >ZHQR HRKZKJS JILNQNMNO6P ILIOJIP HP PIONK6P TOK ROIHR) DTNIQTIG 2-G /*7 2*0!* CKQJ . G WHQJ e BG =

46、NHQ 8G IR HZ) 1NQIPI P6HP ZIHa T6OZMNO6P) H QIX XNRIaZS&ROHQPLNRRIV JILNQNMNO6P) DTN 1NQH賴于 #$%&% 編碼的蛋白，#$%!還與勝紅薊及棉花上系統(tǒng)侵染有關(guān)?27G2。因此 #$%! 屬雙生病毒伴隨的衛(wèi)星分子。我們對引起云南大理白肋煙曲葉病 的病毒分離物 .30 研究表明，它也伴隨著類似的#$%! 分子，.30 #$%! 分子可能編碼 個 A:B，$%&(&) +,- ./0- #12.3/4.15/ 6(7 8 6- 9:( ; <- 6( = 6- &&g

47、t; :? 9A(B&)& >CD:>C E&?CF ?&:G H7? I(7) : B&F )J&H(&) CG K&D(B(I(7) %H( 9A(B: $%&(&)9,- ./1- L.2#34#L#." MAC7 N O- N(& 8- MA:BK M P QC?&H7?: HA:H>&(R:>(CB CG S()>(BH> T&KCDCI(7) (BG&H>(BK >:T:HHC (B 87BB:B- 9A(

48、B: UHA V(C?- !"".- .L52 .0/4.5"5. N(& 8- MAC7 N O- MA:BK M P- &> :? WCT:HHC H7?E )ACC> I(7) ()C?:>&S (B 87BB:B () : S()>(BH> )J&H(&) CG +&KCDCI(7)9A(B&)& %H( +7?- !""!- L32 ./34!"".! MAC7 N O- 6(7 8 6- 9:?I&> 6-

49、 &> :? XI(S&BH& >A:> =YUZU CG: K&D(B(I(7) :)CH(:>&S F(>A )&I&& H:):I: DC):(H S()&:)& (B K:BS: A:) :()&B TE (B>&)J&H(G(H &HCDT(B:>(CB ; &B V(C?- ./3- 312 !.".4!.# N(& 8- MAC7 N O- 6( M <- &> :? S&B

50、>(G(H:>(CB CG : BCI&? =YU DC?&H7?& :)CH(:>&S F(>A WCT:HHC ?&:G H7? I(7) %H( +7?-!""!- L32.!3#4.!35.L O:S(S:D Q- +&:HAE Y- _:77&> 9 Q 9?:)(G(H:>(CB :BS(S&B>(G(H:>(CB CG K&D(B(I(7)&) 7)(BK )&7&BH& HCDJ:()CB) ;&B

51、V(C?- ./0- 352 !L/4!5#.0 8(B a 8- 8:BK < 8- CBK a <- &> :? WCD:>C E&?CF ?&:GH7? 9A(B: I(7)2DCBCJ:>(>& K&BCD& CK:B(R:>(CB :BS:KC(BG&H>(CB CG J?:B>) V(7) &)- !"".- 1.2 5/435.5 W:B O < Y- bCBK % Q- b7 Q- &> :? &BCD& CK:B(R:>(CB CGUK&:>7D E&?CF I&(B I(7)- : DCBCJ:>(>& FA(>&G?EZ>:B)D(>Z>&S K&am