微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)MICROBIOLOGY EXPERIMENT G

1、實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)一 顯微鏡油鏡的使顯微鏡油鏡的使用和細(xì)菌形態(tài)的觀察用和細(xì)菌形態(tài)的觀察u目的要求目的要求u顯微鏡油鏡使用的原理顯微鏡油鏡使用的原理u實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料u實(shí)驗(yàn)程序?qū)嶒?yàn)程序u思考題思考題目目 的的 要要 求求u學(xué)習(xí)并掌握顯微鏡油鏡的使用技術(shù)及維學(xué)習(xí)并掌握顯微鏡油鏡的使用技術(shù)及維護(hù)的基本知識(shí)護(hù)的基本知識(shí)u使用油鏡觀察細(xì)菌的幾種基本形態(tài)使用油鏡觀察細(xì)菌的幾種基本形態(tài)u用懸滴法在高倍鏡或油鏡下觀察細(xì)菌的用懸滴法在高倍鏡或油鏡下觀察細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)運(yùn)動(dòng)顯微鏡油鏡使用的原理顯微鏡油鏡使用的原理u普通光學(xué)顯微鏡普通光學(xué)顯微鏡u歐林巴斯歐林巴斯（OLYMPUS）生物顯微鏡）生物顯微鏡u歐林巴斯歐林巴斯（OLYM

2、PUS）相差顯微鏡）相差顯微鏡普通光學(xué)顯微鏡普通光學(xué)顯微鏡u顯微鏡的構(gòu)造顯微鏡的構(gòu)造 1.光學(xué)部分光學(xué)部分: :接目鏡接目鏡 、 接物鏡接物鏡 、 照明裝置照明裝置(聚光聚光鏡、鏡、 虹彩光圈、虹彩光圈、 反光鏡反光鏡等等). . 它使檢視物放大它使檢視物放大, ,造成造成物象物象. . 2.機(jī)械部分機(jī)械部分: :鏡座、鏡鏡座、鏡臂、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器、臂、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器、載物臺(tái)、載物臺(tái)轉(zhuǎn)移器、載物臺(tái)、載物臺(tái)轉(zhuǎn)移器、粗調(diào)節(jié)器、細(xì)調(diào)節(jié)器等部粗調(diào)節(jié)器、細(xì)調(diào)節(jié)器等部件件. .它起著支持它起著支持 調(diào)節(jié)調(diào)節(jié) 固定固定等作用等作用. .普通光學(xué)顯微鏡普通光學(xué)顯微鏡u顯微鏡的放大倍數(shù)和分辨率顯微鏡的放大倍

3、數(shù)和分辨率 1.放大倍數(shù)放大倍數(shù)=接物鏡放大倍數(shù)接物鏡放大倍數(shù)接目鏡放大倍數(shù)接目鏡放大倍數(shù) 2. 顯微鏡的分辨率顯微鏡的分辨率 是表示顯微是表示顯微鏡辨析物體（兩端）兩點(diǎn)之間距鏡辨析物體（兩端）兩點(diǎn)之間距離的能力，可用公式表示為：離的能力，可用公式表示為： D=/2nsin(/2 ) 式中式中D D：物鏡分辨出物體兩點(diǎn)間物鏡分辨出物體兩點(diǎn)間的最短距離。的最短距離。 ：可見(jiàn)光的波長(zhǎng)（平均可見(jiàn)光的波長(zhǎng)（平均0.550.55 m) m) n:n: 物鏡和被檢標(biāo)本間介質(zhì)的折物鏡和被檢標(biāo)本間介質(zhì)的折射率。射率。 ：鏡口角（即入射角）。鏡口角（即入射角）。普通光學(xué)顯微鏡普通光學(xué)顯微鏡u油鏡使用的原理油鏡使

4、用的原理 油鏡，即油浸接物鏡。當(dāng)油鏡，即油浸接物鏡。當(dāng)光線由反光鏡通過(guò)玻片與光線由反光鏡通過(guò)玻片與鏡頭之間的空氣時(shí)，由于鏡頭之間的空氣時(shí)，由于空氣與玻片的密度不同，空氣與玻片的密度不同，使光線受到曲折，發(fā)生散使光線受到曲折，發(fā)生散射，降低了視野的照明度。射，降低了視野的照明度。若中間的介質(zhì)是一層油若中間的介質(zhì)是一層油（其折射率與玻片的相其折射率與玻片的相近近），則幾乎不發(fā)生折射，），則幾乎不發(fā)生折射，增加了視野的進(jìn)光量，從增加了視野的進(jìn)光量，從而使物象更加清晰。而使物象更加清晰。實(shí)實(shí) 驗(yàn)驗(yàn) 材材 料料u顯微鏡（顯微鏡燈）、香柏油、二甲苯、顯微鏡（顯微鏡燈）、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙等。擦

5、鏡紙、吸水紙等。u細(xì)菌三種形態(tài)的染色標(biāo)本。細(xì)菌三種形態(tài)的染色標(biāo)本。u培養(yǎng)培養(yǎng)1218h的枯草桿菌（的枯草桿菌（B.subtilisB.subtilis) )u蓋玻片、凹玻片、接種環(huán)、酒精燈。蓋玻片、凹玻片、接種環(huán)、酒精燈。實(shí)驗(yàn)程序?qū)嶒?yàn)程序（顯微鏡的使用）（顯微鏡的使用）u主要是油鏡的使用主要是油鏡的使用 1.用前檢查：零件是否齊全，鏡頭是否清潔。用前檢查：零件是否齊全，鏡頭是否清潔。 2.調(diào)節(jié)光亮度調(diào)節(jié)光亮度 3.低倍鏡觀察：粗調(diào)、細(xì)調(diào)低倍鏡觀察：粗調(diào)、細(xì)調(diào) 4.依次再進(jìn)行中倍、高倍觀察依次再進(jìn)行中倍、高倍觀察 5.油鏡觀察：高倍鏡下找到清晰的物象后，提升聚光油鏡觀察：高倍鏡下找到清晰的物象后

6、，提升聚光鏡，在標(biāo)本中央滴一滴香柏油，使油鏡鏡頭浸入香柏鏡，在標(biāo)本中央滴一滴香柏油，使油鏡鏡頭浸入香柏油中，細(xì)調(diào)至看清物象為止。油中，細(xì)調(diào)至看清物象為止。 6.換片：另?yè)Q新片，必須從第三條開(kāi)始操作。換片：另?yè)Q新片，必須從第三條開(kāi)始操作。 7.用后復(fù)原：觀察完畢，上懸鏡筒，先用擦鏡紙擦去用后復(fù)原：觀察完畢，上懸鏡筒，先用擦鏡紙擦去鏡頭上的油，然后再用擦鏡紙沾取少量二甲苯擦去殘鏡頭上的油，然后再用擦鏡紙沾取少量二甲苯擦去殘留的油，最后用擦鏡紙擦去殘留的二甲苯，后將鏡體留的油，最后用擦鏡紙擦去殘留的二甲苯，后將鏡體全部復(fù)原。全部復(fù)原。實(shí)驗(yàn)程序?qū)嶒?yàn)程序（顯微鏡的使用）（顯微鏡的使用）u顯微鏡保養(yǎng)和使用

7、中的注意事項(xiàng)：顯微鏡保養(yǎng)和使用中的注意事項(xiàng)： 1.不準(zhǔn)擅自拆卸顯微鏡的任何部件不準(zhǔn)擅自拆卸顯微鏡的任何部件, ,以免損壞。以免損壞。 2.鏡面只能用擦鏡紙擦，不能用手指或粗布，以保證鏡面只能用擦鏡紙擦，不能用手指或粗布，以保證光潔度光潔度 3.觀察標(biāo)本時(shí)，必須依次用低、中、高倍鏡，最后用觀察標(biāo)本時(shí)，必須依次用低、中、高倍鏡，最后用油鏡。當(dāng)目視接目鏡時(shí)，特別在使用油鏡時(shí)，切不可油鏡。當(dāng)目視接目鏡時(shí)，特別在使用油鏡時(shí)，切不可使用粗調(diào)節(jié)器，以免壓碎玻片或損傷鏡面。使用粗調(diào)節(jié)器，以免壓碎玻片或損傷鏡面。 4.觀察時(shí)，兩眼睜開(kāi)，養(yǎng)成兩眼能夠輪換觀察的習(xí)慣，觀察時(shí)，兩眼睜開(kāi)，養(yǎng)成兩眼能夠輪換觀察的習(xí)慣，以

8、免眼睛疲勞，并且能夠在左眼觀察時(shí)，右眼注視繪以免眼睛疲勞，并且能夠在左眼觀察時(shí)，右眼注視繪圖。圖。 5.拿顯微鏡時(shí)，一定要右手拿鏡臂，左手托鏡座，不拿顯微鏡時(shí)，一定要右手拿鏡臂，左手托鏡座，不可單手拿，更不可傾斜拿?？蓡问帜?，更不可傾斜拿。 6.顯微鏡應(yīng)存放在陰涼干燥處，以免鏡片滋生霉菌而顯微鏡應(yīng)存放在陰涼干燥處，以免鏡片滋生霉菌而腐蝕鏡片腐蝕鏡片。實(shí)驗(yàn)程序?qū)嶒?yàn)程序IIIu細(xì)菌三種基本形態(tài)的觀察：細(xì)菌三種基本形態(tài)的觀察： 菌落形態(tài)觀察和個(gè)體形態(tài)觀察，這里主要指菌落形態(tài)觀察和個(gè)體形態(tài)觀察，這里主要指?jìng)€(gè)體形態(tài)的觀察。個(gè)體形態(tài)的觀察。 1. 結(jié)合油鏡的使用，觀察三張細(xì)菌染色片（球結(jié)合油鏡的使用，觀察

9、三張細(xì)菌染色片（球狀菌、桿狀菌、和螺旋狀菌），邊觀察邊繪圖。狀菌、桿狀菌、和螺旋狀菌），邊觀察邊繪圖。 2. 看示范鏡：觀察雙球菌、四聯(lián)球菌，并繪圖?？词痉剁R：觀察雙球菌、四聯(lián)球菌，并繪圖。實(shí)驗(yàn)程序?qū)嶒?yàn)程序細(xì)菌運(yùn)動(dòng)性的觀察（示范）：細(xì)菌運(yùn)動(dòng)性的觀察（示范）： 一般采用水浸片法、懸滴法、一般采用水浸片法、懸滴法、半固體培養(yǎng)法，常用水浸法半固體培養(yǎng)法，常用水浸法和懸滴法來(lái)觀察細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)和懸滴法來(lái)觀察細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)性。性。 1. 水浸片法水浸片法 2. 懸滴法懸滴法歐林巴斯（歐林巴斯（OLYMPUS）生物顯微鏡）生物顯微鏡uOLYMPUS生物顯微鏡是由日本進(jìn)口生物顯微鏡是由日本進(jìn)口的一種雙筒光學(xué)顯微鏡，

10、它使用方便，的一種雙筒光學(xué)顯微鏡，它使用方便，分辨率高，并且有立體感。是目前研分辨率高，并且有立體感。是目前研究微生物的良好工具。究微生物的良好工具。u顯微鏡的結(jié)構(gòu)顯微鏡的結(jié)構(gòu)錄 像 演 示錄 像 演 示歐林巴斯（歐林巴斯（OLYMPUS）生物顯微鏡）生物顯微鏡 （顯微鏡的使用方法（顯微鏡的使用方法 ）u1. 接通電源。接通電源。 2. 打開(kāi)主開(kāi)關(guān)。打開(kāi)主開(kāi)關(guān)。 3. 移動(dòng)電壓調(diào)整旋，使亮度移動(dòng)電壓調(diào)整旋，使亮度適中。適中。 4. 把標(biāo)本固定在再物臺(tái)上。把標(biāo)本固定在再物臺(tái)上。 5. 放松粗調(diào)鎖擋。放松粗調(diào)鎖擋。 6. 用低倍物鏡，旋轉(zhuǎn)粗調(diào)和用低倍物鏡，旋轉(zhuǎn)粗調(diào)和微控制鈕來(lái)進(jìn)行對(duì)焦。微控制鈕來(lái)進(jìn)

11、行對(duì)焦。 7. 調(diào)節(jié)雙目鏡筒間距和視度調(diào)節(jié)雙目鏡筒間距和視度差。差。 8. 再適當(dāng)調(diào)節(jié)照明度。再適當(dāng)調(diào)節(jié)照明度。 9. 使焦點(diǎn)正確地對(duì)準(zhǔn)標(biāo)本。使焦點(diǎn)正確地對(duì)準(zhǔn)標(biāo)本。u10. 鎖緊粗調(diào)鎖擋。鎖緊粗調(diào)鎖擋。 11. 調(diào)節(jié)孔徑光欄。調(diào)節(jié)孔徑光欄。 12. 依次用低、中、高倍鏡依次用低、中、高倍鏡觀察。觀察。 13. 油鏡觀察：與普通光學(xué)油鏡觀察：與普通光學(xué)顯微鏡方法一致。顯微鏡方法一致。 14. 觀察完畢，復(fù)原：先將觀察完畢，復(fù)原：先將電壓調(diào)節(jié)旋鈕復(fù)原，關(guān)閉主電壓調(diào)節(jié)旋鈕復(fù)原，關(guān)閉主開(kāi)關(guān)，切斷電源，放開(kāi)粗調(diào)開(kāi)關(guān)，切斷電源，放開(kāi)粗調(diào)鎖擋。油鏡的處理與普通光鎖擋。油鏡的處理與普通光學(xué)顯微鏡方法一致。學(xué)顯

12、微鏡方法一致。 15. 放入保存箱中。放入保存箱中。歐林巴斯（歐林巴斯（OLYMPUS）相差顯微鏡）相差顯微鏡u相差顯微鏡的工作原理相差顯微鏡的工作原理 相差顯微鏡具有一個(gè)特殊的相差顯微鏡具有一個(gè)特殊的由環(huán)狀光圈與聚光鏡組合的由環(huán)狀光圈與聚光鏡組合的轉(zhuǎn)盤(pán)聚光鏡，通過(guò)這個(gè)特殊轉(zhuǎn)盤(pán)聚光鏡，通過(guò)這個(gè)特殊的裝置，就可把光波的相位的裝置，就可把光波的相位差異變?yōu)檎穹町?，從而使差異變?yōu)檎穹町?，從而使人們?nèi)庋奂茨苡^察到活細(xì)胞人們?nèi)庋奂茨苡^察到活細(xì)胞的細(xì)微結(jié)構(gòu)，并有立體感。的細(xì)微結(jié)構(gòu)，并有立體感。常用來(lái)觀察活細(xì)胞結(jié)構(gòu)，鞭常用來(lái)觀察活細(xì)胞結(jié)構(gòu)，鞭毛的運(yùn)動(dòng)等。毛的運(yùn)動(dòng)等。u相差顯微鏡的裝置相差顯微鏡的裝置 1. 環(huán)狀光圈環(huán)狀光圈 2. 相差物鏡（具有環(huán)狀相差物鏡（具有環(huán)狀相板）相板） 3. 定中心望遠(yuǎn)鏡（亦稱(chēng)定中心望遠(yuǎn)鏡（亦稱(chēng)輔助目鏡）輔助目鏡） 4. 輔助固定扳手輔助固定扳手 5. 綠色濾光片綠色濾光片歐林巴斯（歐林巴斯（OLYMPUS）相差顯微鏡）相差顯微鏡u相差顯微鏡的使用方法相差顯微鏡的使用方法 1. 相差裝置的安裝相差裝置的安裝 ：轉(zhuǎn)盤(pán)聚光鏡：轉(zhuǎn)盤(pán)聚光鏡 綠色濾光片綠色濾光片 2. 相差物鏡的安裝相差物鏡的安裝 3. 安放標(biāo)本安放標(biāo)本 4. 對(duì)光對(duì)光 5. 調(diào)焦：用粗調(diào)控制鈕和微調(diào)控制鈕調(diào)節(jié)焦，看清調(diào)焦：用粗調(diào)控制鈕和微調(diào)控制鈕調(diào)節(jié)焦，看清物象時(shí)為止物象時(shí)為止 6. 旋轉(zhuǎn)