冷凍切片技術(shù)實(shí)驗(yàn)及冷凍切片機(jī)的基本操作_第1頁(yè)
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1、冷凍切片技術(shù)實(shí)驗(yàn)及冷凍切片機(jī)的基本操作實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 掌握冷凍切片的方法2 掌握冷凍切片的用途實(shí)驗(yàn)原理冷凍切片是借助低溫使組織凍結(jié)達(dá)到一定的硬度并通過(guò)冰起支撐作用來(lái)進(jìn)行切片的一種方法。速凍 可減小冰晶直徑,避免組織細(xì)胞損傷。制冷 壓縮機(jī)佛里昂制冷、半導(dǎo)體溫差電制冷實(shí)驗(yàn)材料新鮮動(dòng)物肝臟實(shí)驗(yàn)方法1準(zhǔn)備 將儀器打開(kāi),樣品臺(tái)溫度調(diào)至 -40 。2取材 組織必須新鮮,盡可能不經(jīng)水洗。取材時(shí)應(yīng)避免組織擠壓,防止人為假象。樣品大小 5X5X3mm。3速凍 將樣品放在樣品臺(tái)上,樣品四周加水加固,冷凍5 10min.4切片 升高溫度至 -15(視樣品而定),約5min 后開(kāi)始切片,厚度 6-15um 。5制片 將切

2、片直接放在載波片上或先放在盛水(固定液)的培養(yǎng)皿中再轉(zhuǎn)移到載波片上。6染色觀察 吸干水,加一滴蘇木精,加蓋玻片,用顯微鏡觀察。7記錄 將觀察的結(jié)果繪于實(shí)驗(yàn)報(bào)告上,整理自己用過(guò)的物品。附:切片溫度的設(shè)定腦 -12肝臟 -14腎臟 -16肌肉 -20皮膚 -25多脂肪組織 -30經(jīng)過(guò)固定的組織 -5 -10附:快速永久制片1 固定 70乙醇 5 10min ;2 水洗 2min ;3 蘇木精染色5 10min ;4 脫色0.1%HCl 至變紅;5 藍(lán)化 0.1NaOH 變藍(lán);6 水洗5 10s ;7 脫水 70% 2min ;8 伊紅染色510min ;9 脫水 100%乙醇 2minX2;10 透明 二甲苯 3min;11 封片中性樹(shù)膠封片。冷凍切片機(jī)的基本操作:1.在使用前 2 小時(shí)開(kāi)啟電源,并將溫度設(shè)定在-25 ;2.將適當(dāng)大小和厚度的標(biāo)本放在蘑菇狀杯上,加上冷凍蠟,夾在切片機(jī)的固定槽內(nèi);3.準(zhǔn)備好玻片,選擇切片厚度,搖動(dòng)手柄,即可做成切片;4.將做成的切片小心的吸附在玻璃片上;5.使用結(jié)束后關(guān)閉電源,清潔腔體和擦干水氣, 做好使用記錄。6.為讓水蒸氣

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