三種病毒轉(zhuǎn)染的異同點(diǎn)

1、三種病毒轉(zhuǎn)染的異同點(diǎn)、病毒表達(dá)系統(tǒng)簡(jiǎn)介病毒載體是指以病毒為基礎(chǔ)的載體，也是目前最常用的基因?qū)敕绞街?。通過(guò)對(duì)病毒基因組的遺傳改造，使之能夠攜帶外源目的基因和相關(guān)的病毒元件，并被包裝成病毒顆粒。病毒進(jìn)而侵染宿主，使攜帶的外源基因在宿主體內(nèi)表達(dá)。病毒的基因組可分為編碼區(qū)和非編碼區(qū)。其中，編碼區(qū)包含病毒的必需基因和非必需基因，可分別表達(dá)產(chǎn)生病毒的結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白；非編碼區(qū)則含有病毒復(fù)制和包裝所需的全部順式作用元件。由于野生型病毒常常具有致病性， 為了避免實(shí)驗(yàn)或治療中使用的病毒恢復(fù)成野生型， 必須對(duì)病毒載體進(jìn)行一系列的遺傳改造。譬如刪除病毒基因組的非必需區(qū)，將順式作用元件和反式作用元件分開連接至

2、不同的載體上，或結(jié)合利用不同種病毒的必需蛋白等，最大程度地保證實(shí)驗(yàn)的安全性。哺乳動(dòng)物病毒表達(dá)系統(tǒng)常常包含一到多個(gè)載體，將所需的載體轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞后，在反式因子的作用下,病毒復(fù)制、包裝所需的順式作用元件和外源基因表達(dá)盒即可被包裝，最終產(chǎn)生帶有外源基因的病毒顆粒。經(jīng)濃縮和純化后的病毒液即可用于侵染目標(biāo)宿主細(xì)胞或動(dòng)物體，實(shí)現(xiàn)外源目的基因在宿主體內(nèi)的表達(dá)。二、病毒表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)病毒的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率比常規(guī)真核表達(dá)載體高很多，因此特別適合于介導(dǎo)外源基因在難轉(zhuǎn)染甚至無(wú)法轉(zhuǎn)染的哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)。三、輝駿生物病毒服務(wù)簡(jiǎn)介輝駿生物的病毒產(chǎn)品包括慢病毒、腺病毒和逆轉(zhuǎn)錄病毒，服務(wù)項(xiàng)目包括：各類病毒載體的構(gòu)建和病毒包裝，以及

3、慢病毒介導(dǎo)的穩(wěn)定表達(dá)株建立等。慢病毒表達(dá)系統(tǒng)：一種很常用的哺乳動(dòng)物病毒表達(dá)系統(tǒng)；慢病毒感染宿主細(xì)胞時(shí)，可將攜帶的外源基因隨機(jī)、穩(wěn)定地整合入宿主細(xì)胞基因組中，實(shí)現(xiàn)目的基因穩(wěn)定、長(zhǎng)期的表達(dá)，非常適合于基因過(guò)表達(dá)穩(wěn)定細(xì)胞株的建立和RNAi研究。InfecthostceLsTrm$lalN圖1慢病毒感染宿主細(xì)胞原理圖腺病毒表達(dá)系統(tǒng)：一種很常用的哺乳動(dòng)物病毒表達(dá)系統(tǒng)；但與慢病毒不同的是，腺病毒基因組及其攜帶的外源基因不會(huì)整合入宿主細(xì)胞的基因組中，而是游離于宿主基因組外獨(dú)立表達(dá)，因此可實(shí)現(xiàn)目的基因瞬時(shí)、高豐度的表達(dá)，同時(shí)還避免了因整合而引發(fā)的潛在的基因突變和隨機(jī)效應(yīng)，安全性和可控性高。VhJprotm圖2

4、腺病毒感染宿主細(xì)胞原理圖AdenovirusHostcells逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)系統(tǒng)：逆轉(zhuǎn)錄病毒將自身基因組及其攜帶的外源基因隨機(jī)、穩(wěn)定地整合入宿主細(xì)胞基因組中，可實(shí)現(xiàn)目的基因穩(wěn)定、長(zhǎng)期的表達(dá)。逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)系統(tǒng)根據(jù)不同的包裝細(xì)胞系可分為單嗜性、雙嗜性和泛嗜性，不同包裝細(xì)胞產(chǎn)生的逆轉(zhuǎn)錄病毒能夠特異性地感染某一個(gè)或某一類宿主細(xì)胞。 輝駿生物采用的病毒包裝細(xì)胞系為platE細(xì)胞系， 該細(xì)胞系包含gag、pol和env基因，因此轉(zhuǎn)染單一表達(dá)質(zhì)粒就可以包裝出逆轉(zhuǎn)錄病毒，但是該病毒具有很強(qiáng)的針對(duì)性，只適用于大鼠、小鼠細(xì)胞穩(wěn)定株的建立。圖3逆轉(zhuǎn)錄病毒感染宿主細(xì)胞原理圖四、輝駿生物三種病毒表達(dá)系統(tǒng)的特點(diǎn)表1二種

5、病毒表達(dá)系統(tǒng)的特點(diǎn)五、輝駿生物病毒包裝和穩(wěn)定株構(gòu)建流程輝駿生物提供的病毒服務(wù)可分為三部分：A.病毒載體的構(gòu)建：將目的基因片段連接至病毒載體；B.病毒包裝：重組病毒質(zhì)粒（或與包裝質(zhì)粒一起）轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞；收集病毒顆粒，濃縮后進(jìn)行滴度測(cè)試；C.穩(wěn)定細(xì)胞株的建立（僅針對(duì)慢病毒）：分別使用實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組慢病毒感染細(xì)胞，建立實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的穩(wěn)定細(xì)胞株。慢病毒表達(dá)系統(tǒng)腺病毒表達(dá)系統(tǒng)逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)國(guó)統(tǒng)基因組RNADNARNA原型人類免疫缺陷I型病毒人5型腺病毒系統(tǒng)細(xì)胞方式細(xì)胞模型否整合豐度時(shí)間滴度容量原性表達(dá)roRNANAi(HIV)(Ad5)莫洛尼鼠白血病病毒（1個(gè)表達(dá)質(zhì)粒和3個(gè)包裝質(zhì)粒1個(gè)穿梭質(zhì)粒和1個(gè)輔

6、助質(zhì)粒1個(gè)表達(dá)質(zhì)粒293T細(xì)胞293細(xì)胞platE細(xì)胞表達(dá)質(zhì)粒與輔助質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染包裝表達(dá)質(zhì)粒與輔助質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染包表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染含所有必細(xì)胞獲得重組慢病毒顆粒；包裝細(xì)胞不裂解，病毒被分泌至上清中分裂和非分裂的哺乳動(dòng)物細(xì)胞可獲得轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，效果好整合型局水平表達(dá)慢(24天)1X1081X1010TU/mL最高可達(dá)6kb的外源片段特別適合特別適合裝細(xì)胞獲得重組腺病毒顆粒;毒感染后包裝細(xì)胞發(fā)生裂解。分裂和非分裂的哺乳動(dòng)物細(xì)胞不能得到轉(zhuǎn)基因動(dòng)物非整合型局水平表達(dá)快（12天）1X10111X1013vp高達(dá)8kb的外源片段適合適合的包裝細(xì)胞即可獲得重顆粒；包裝細(xì)胞不裂解,分泌至上清中分裂的大鼠、小鼠細(xì)可以實(shí)現(xiàn)，

7、但較有難整合型局水平表達(dá)快（12天）1X1061X107TU/不超過(guò)6kb的外源片不適合適合圖4病毒包裝和穩(wěn)定株構(gòu)建流程六、輝駿生物病毒服務(wù)項(xiàng)目輝駿生物的病毒服務(wù)項(xiàng)目包括了基因釣取、RNAi設(shè)計(jì)、 載體構(gòu)建、 病毒包裝、 穩(wěn)定細(xì)胞株建立和表達(dá)/干擾檢測(cè)等全套服務(wù)內(nèi)容。除此之外，我們還可以提供個(gè)性化的定制服務(wù)，您只需要將實(shí)驗(yàn)?zāi)康母嬖V我們，即可享受高品質(zhì)的實(shí)驗(yàn)服務(wù)體驗(yàn)。RNAi牖殿LEMJ瓜盹基聊H粒鮑犍+鍛頻丁隔械鞭dTestern-blotSSS慨梏成捕林聊版|找斯2嘴Vestern-blotfiil表2輝駿生物病毒服務(wù)項(xiàng)目列表分類服務(wù)項(xiàng)目項(xiàng)目?jī)?nèi)容慢病毒服務(wù)RNAi慢病毒服務(wù)RNA干擾序列設(shè)計(jì)；載體構(gòu)建；慢病毒包裝；穩(wěn)定株構(gòu)建基因過(guò)表達(dá)慢病毒服務(wù)基因釣?。惠d體構(gòu)建；慢病毒包裝；穩(wěn)定株構(gòu)建microRNA慢病毒服務(wù)Pri-microRNA或pre-microRNA釣??；載體構(gòu)建；慢病毒包裝；穩(wěn)定株構(gòu)建腺病毒服務(wù)RNAi腺病毒服務(wù)RNA干擾序列設(shè)計(jì)；載體構(gòu)建；腺病毒包裝基因過(guò)表達(dá)腺病毒服務(wù)基因釣?。惠d體構(gòu)建；腺病毒包裝microRNA腺病毒服務(wù)Pri-microRNA或pre-microRNA釣?。惠d體構(gòu)