肺炎鏈球菌的實驗活動生物危害評估報告

1、肺炎鏈球菌的實驗活動生物危害評估報告一、細菌的傳播與致病肺炎鏈球菌在自然界中分布廣泛，常生活在正常人的鼻腔中，多數(shù)不致病或致病力很弱，少數(shù)致病力較強。肺炎鏈球菌主要引起大葉性肺炎以及氣管炎、中耳炎、腦膜炎、胸膜炎、心內(nèi)膜炎、敗血癥等疾病。典型的大葉性肺炎起病急驟，病人有高燒、寒顫，開始時有陣發(fā)性干咳，不久有少量粘液痰，隨后痰變黃色，呈粘膿性，一般病程12周。二、細菌的生物學(xué)特性肺炎鏈球菌(S.pneumoniadfl鏈球菌科，鏈球菌屬。為革蘭氏陽性球菌，呈矛尖狀，成雙排列，標本或液體培養(yǎng)中可連成鏈狀。有莢膜，無鞭毛，不形成芽胞。本菌營養(yǎng)要求較高，需在含血液或血清的培養(yǎng)基中生長。兼性厭氧，C02

2、5-10%生長最好，且生成的菌落周圍有草綠色溶血環(huán)。若于液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h,呈均勻混濁，后期可因產(chǎn)生自溶而變得澄清。該菌可分解多種糖類，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。膽汁溶解試驗陽性O(shè)ptochin敏感試驗陽性。其抗原結(jié)構(gòu)包括：莢膜多糖抗原：多糖抗原，型特異性，共85型，I田型引起大葉性肺炎；菌體種屬特異性抗原為多糖抗原，存在于細胞壁，稱C多糖。在鈣離子存在時，C多糖可與正常人血清中稱為C-反應(yīng)蛋白(Creactiveprotein,CRP)的B球蛋白結(jié)合，發(fā)生沉淀。該菌抵抗力較弱，加熱56，20min即死亡。而且它對一般消毒劑敏感，對干燥抵抗力較強。肺炎鏈球菌可能發(fā)生的變異有莢膜變異：即從有莢膜有毒力的光

3、滑（S）型菌變異為失去莢膜毒力減低或消失的粗糙（R）型。三、細菌的實驗室檢查1、標本采集包括痰、膿液、血液等標本。2.涂片染色鏡檢革蘭氏色染色呈陽性球菌，呈矛頭狀成雙排列，坦面相鄰，尖端向外。若標本可見大量炎性細胞同時存在時有重要的參考價值。3、莢膜染色陽性。4、分離培養(yǎng)常采用羊血平板，有助于其溶血特征的識別和進一步鑒定，而且初代分離應(yīng)置5%10%CO2的環(huán)境下培養(yǎng)。在血平板上，肺炎鏈球菌的菌落直徑0.51.5mm,灰白色、半透明、表面光滑（有些菌株可表現(xiàn)為粘液狀）扁平，周圍環(huán)繞著草綠色溶血環(huán)。培養(yǎng)或放置24h以上的培養(yǎng)物還會由于肺炎鏈球菌的自溶作用而致菌落中央塌陷而邊緣隆起，而呈臍窩狀。5、

4、鑒定試驗?zāi)懼芫囼灒罕驹囼灥脑砘谀扄}能夠通過活化肺炎鏈球菌的自溶酶而溶解肺炎鏈球菌，但不能溶解草綠色鏈球菌。常用的方法包括快速平板法和標準試管法。前者取一接種環(huán)2%去氧膽酸鈉溶液加于血平板待鑒定菌的菌落上，置35c孵育1530min,菌落溶解消失為陽性。而后者則是在1ml待鑒定菌1824h培養(yǎng)液中加入2滴10%去氧膽酸鈉溶液，35孵育5-10min后鑒定菌管由混濁變?yōu)橥该髡邽殛栃?。Optochin試驗用以與其他草綠色鏈球菌相鑒別。用接種環(huán)將單個待鑒定菌落均勻涂于血平板上，用含量為5閨的optochin紙片貼于接種區(qū)中央，35c需氧培養(yǎng)過夜，抑菌圈>18mm的為陽性。本菌為陽性。6、

5、小鼠毒力試驗若用有毒力的菌株接種小鼠，接種后12-36h,小鼠死亡。四、細菌的防治肺炎鏈球菌感染關(guān)鍵在于養(yǎng)成良好的衛(wèi)生習慣，保持環(huán)境衛(wèi)生。必要時對體弱兒童及老年人可用疫苗進行預(yù)防注射，如用細菌莢膜多糖制備的多糖疫苗進行預(yù)防，效果較好。病人在發(fā)熱期間，應(yīng)臥床休息，吃容易消化的食物，多喝水?；前奉愃幬?、青霉素等對肺炎等疾病的治療較為有效。五、細菌的生物安全防護根據(jù)病原微生物生物實驗室生物安全管理條例中的有關(guān)規(guī)定，人間傳播的微生物名錄（待頒布）肺炎鏈球菌屬于三類，BSL-2。相關(guān)的防護事宜包括：（1）操作要求1、實驗時，未經(jīng)實驗室主任同意，限制或禁止進入實驗室。2、不許在工作區(qū)域飲食、吸煙、清洗隱型

6、眼鏡和化妝。食物應(yīng)存放在工作區(qū)域以外專用櫥柜或冰箱中。3、所有的操作過程應(yīng)盡量細心，避免產(chǎn)生和濺出氣溶膠。4、對于污染的銳器，必須時刻保持高度的警惕，包括針、注射器、玻片、加樣器等。5、注射和吸取感染材料時，只能使用針頭固定注射器或一次性注射器（即注射器和針頭是一體的）。用過的一次性針頭必須彎曲、切斷、破碎、重新套上針頭套、從一次性注射器上去掉，或在丟棄前進行人工處理，要不將之小心放入不會被刺穿的、用于收集廢棄銳器的容器中。非一次性銳器必須放置在堅壁容器中，轉(zhuǎn)移至處理區(qū)消毒，最好高壓殺菌。6、打碎的器皿不能直接用手處理，必須用其它工具處理，如刷子和簸箕、夾子或鑷子。盛污染的針頭、銳器、碎玻璃的

7、容器在倒掉前，應(yīng)按照相關(guān)的規(guī)定進行消毒。7、所有的培養(yǎng)物、儲存物及其它規(guī)定的廢物在釋放前，均應(yīng)使用可行的消毒方法進行消毒，如高壓滅菌。轉(zhuǎn)移到就近實驗室消毒的物料應(yīng)置于耐用、防漏容器內(nèi)，密封運出實驗室。離開該系統(tǒng)進行消毒的物料，在轉(zhuǎn)移前應(yīng)包裝，其包裝應(yīng)符合有關(guān)的法規(guī)。8、濺出或偶然事件中，明顯暴露于傳染源時，要立即向?qū)嶒炇抑魅螆蟾?。進行適當?shù)尼t(yī)學(xué)評估、觀察、治療，保留書面記錄。9、按日常程序、在有關(guān)傳染源的工作結(jié)束后、尤其是傳染源濺出或灑出后、或受到其他傳染源污染后，實驗室設(shè)備和工作臺面應(yīng)當使用有效的消毒劑消毒。污染的設(shè)備在送去修理、維護前，要按照相關(guān)的規(guī)定消毒；在離開設(shè)施轉(zhuǎn)移前，要按照相關(guān)的規(guī)

8、定打包運輸。2）安全設(shè)備1、正確使用和保養(yǎng)生物安全柜、最好是二級生物安全柜、或其他合適的人員防護設(shè)施、或物理遏制裝置。2、確定可能形成傳染性氣溶膠或濺出物的實驗過程，包括離心、研磨、勻漿、劇烈震蕩或混勻、超聲波破裂、開啟裝有傳染源的容器、采集感染標本等。3、涉及高濃度或大體積的傳染源時，若選用密封轉(zhuǎn)頭或帶安全罩的離心機，若轉(zhuǎn)頭或安全罩僅在生物安全柜中打開，則可在開放實驗室內(nèi)離心。4、當必須在生物安全柜外處理標本時，需采取面部保護措施（跟鏡、口罩、面罩、或其他防濺裝置），以免傳染源或其他有害物濺或灑到面上。5、在實驗室內(nèi)，必須使用專用的防護性外衣、大褂、罩衫或制服。人員到非實驗室區(qū)域時，防護服必須留在實驗室內(nèi)。防護服可以在實驗室內(nèi)處