純化水RA培養(yǎng)基適用性驗證

1、編號:R2A培養(yǎng)基適用性驗證報告編制/日期審核/日期評審會簽姓名咅職務評審意見日期批準/日期科技開展序號內容頁號1目的32范圍33依據34職責權限35驗證方法3驗證內容和結果3-8驗證結論96附件10-12R2A培養(yǎng)基適用性驗證報告 1?目的因2021版藥典純化水檢驗用培養(yǎng)基變更，依1105非無菌產品 微生物限度檢查 方法,通過 此次實驗對所更換的R2A瓊脂培養(yǎng)基進行適用性檢查，以證明該方法 及所采用的培養(yǎng)基適 用于純化水微生物限度檢查日常檢測。2?范圍適用于本公司純化水的微生物限度檢查。3. 依據中華人民共和國藥典2021年版4. 職責權限姓名部門分工職責組長：組織確認或驗證工作，批準方案和

2、報告負責編制方案、實施、總結報告及微生物檢測負責設備樣品提供，配合實施方案的工作負責微生物檢測5.驗證方法培養(yǎng)基的適用性檢查培養(yǎng)基應進行培養(yǎng)基的適用性檢查。菌種 試驗用菌株的傳代次數不得超過 5代，試驗用菌種應采用適宜的菌種保藏 技術進行保存，以保證試驗菌株的生物學特性。菌液制備銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的微生物培養(yǎng)基質控品，使用前注入稀釋液充分溶解后，在漩渦混合器上振蕩混勻，制成1ml 相當于10? 100cfu/菌懸液。適用性檢查 取 銅綠假單胞菌、枯草芽抱桿菌各 10? 100cfu，分別注入無菌平皿中，立即傾注R2A瓊脂培 養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，混勻，凝固，置 30? 35

3、C培養(yǎng)不少于5天，計數； 結果判定被檢定的固體培養(yǎng)基上的菌落平均數與對照培養(yǎng)基上的菌落平均數的比值在？2范圍內，且菌落形態(tài)大小應與對照培養(yǎng)基上的菌落一致。判該培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。實驗前的準備儀器設備設備名稱設備編號設備狀態(tài)壓力蒸汽火菌器10-11-53未檢定己檢定在有效期內激光塵埃粒子計數器Y09-3016未檢定己檢定在有效期內溫濕度計JWS-A3未檢定己檢定在有效期內微壓差表B未檢定己檢定在有效期內微壓差表B未檢定己檢定在有效期內細菌培養(yǎng)箱SPX-100B-Z未檢定己檢定在有效期內霉菌培養(yǎng)箱MLX-150-1未檢定己檢定在有效期內確認人：日期：操作環(huán)境微生物限度檢查應在環(huán)境潔凈度10

4、000級下的局部潔凈度100級的單向流空氣區(qū)域內進行 檢驗全過程必須嚴格遵守無菌操作，防止再污染。單向流空氣 區(qū)域、工作臺面及環(huán)境應定 期按?醫(yī)藥工業(yè)潔凈室區(qū)懸浮粒子、浮游菌和 沉降菌的測試方法?的現行國家標準進 行潔凈度驗證。器具 無菌培養(yǎng)皿：直徑90mm 1m注射器 計數方法的驗證當建立純化水微生物限度檢查法時，應進行細菌、霉菌及酵母菌計數方法的驗 證，以確認所采用的方法適合于該產品的細菌、霉菌及酵母菌數的測定。假設產 品的組分或原檢驗條件發(fā)生改變可能影響檢驗結果時，計數方法應重新驗證。驗證時，按供試液的制備和細菌、霉菌及酵母菌計數所規(guī)定的方法及以下要求進行。對各試驗菌的回收率應逐一進行驗

5、證。菌種及菌液制備同計數培養(yǎng)基的適用性檢查驗證方法驗證試驗至少應進行3次獨立的平行試驗，并分別計算各試驗 菌每次試驗的回 收率。(1)試驗組薄膜過濾法計數時，取1ml純化水，過濾，沖洗，在最后一次的沖洗液中參加10? 100cfu試驗菌，過濾，濾膜置于 R2A瓊脂培養(yǎng)基上。(2) 菌液組 將相當于10? 100cfu/ml菌懸液置于100ml無菌氯化鈉-蛋白胨緩 沖液過濾(3) 供試品對照組 取1ml純化水供試液置于100ml無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，過濾， 按菌落計數方法測定供試品本底菌數。結果判斷在3次獨立的平行試驗中，試驗組菌落數減去供試品對照組菌落的值與菌液對照組菌落數的比值應在？ 2

6、范圍內。試驗樣品純化水稀釋液和試劑：無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液器具無菌培養(yǎng)皿：(直徑90mm 次性注射器驗證用微生物名稱及其編號菌株名稱編號銅綠假單胞菌CMCC(B) 10 104枯草芽孢桿菌CMCB) 63 501名稱生產商培養(yǎng)基批號有效期瓊脂培養(yǎng)基S R2A瓊脂青島尼賽欣合生物技術驗證試驗操作試驗菌的制備和稀釋銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的微生物培養(yǎng)基質控品，使用前注入稀 釋液充分溶 解后，在漩渦混合器上振蕩混勻，制成1ml 相當于10? 100cfu/菌懸液.再用 無菌 氯化鈉-蛋白胨緩沖液將其稀釋制成10? 100cfu/ml的菌懸液。將試驗分為3組A樣品試驗組取純化水1ml,置于裝有無菌

7、氯化鈉-蛋白胨緩沖液100ml的三角燒瓶中或均質袋中，充分振搖1分鐘。每張濾膜抽濾100ml的供試液，用無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液100ml沖洗濾膜,最后參加10? 100cfu試驗菌，每株 試驗菌平行制備2個平皿,按膜過濾法測定其菌數。B菌液組 將10-100cfu/ml菌懸液置于裝有100ml無菌氯化鈉-蛋白胨緩 沖液的三角 燒瓶中或均質袋中，充分振搖1分鐘。每張濾膜抽濾100ml的供試液通過一張濾膜，平行 制備兩個以測定所加的菌數。C供試品對照組取純化水1ml，置于裝有無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液100ml的三角燒 瓶中或均質袋中，充分振搖1分鐘。每張濾膜抽濾100ml的供試液,用無菌氯化鈉-

8、蛋白胨 緩沖液100ml沖洗濾膜，平行制備2個平皿,按膜過濾法計數測定供試品的本底菌數。培養(yǎng)枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌在30? 35C下培養(yǎng)不少于5天，將點計菌落 數。并將結果記錄于附件。試驗結果試驗組的菌的回收率接入菌種菌落計數cfu/ 皿回收率試驗組供試品對照組菌液組銅綠假單胞菌平均值枯草芽抱桿菌平均值表中：回收率=試驗組的平均菌落數一供試品對照組的平均菌落數的值十菌液組的平均菌檢測人:復核人:復核日期:落數x 100%驗證結論？ 計數性培養(yǎng)基適用性檢查結論：試驗組菌落數減去供試品對照組菌落的值與菌 液對照組菌 落數的比值應在2范圍內，且菌落形態(tài)大小應與對照培養(yǎng)基上的菌 落一致。判定R2A

9、7脂 培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定?？捎糜诒竟炯兓⑸?物限度檢查實驗。校正因子修正系數 校正因子=1/回收率菌種名稱產品試驗組計數結果cfu/ 皿平均值銅綠假單胞菌枯草芽抱桿菌菌液組的微生物生長檢查記錄菌種名稱菌液組計數結果cfu/ 皿平均值銅綠假單胞菌枯草芽抱桿菌供試品對照組的微生物生長檢查記錄供試品供試品對照組計數結果cfu/ 皿平均值12測試人/測試日期:復核人/復核日期:批號：產品試驗組的微生物生長檢查記錄菌種名稱產品試驗組計數結果cfu/ 皿平均值銅綠假單胞菌枯草芽抱桿菌菌液組的微生物生長檢查記錄菌種名稱菌液組計數結果cfu/ 皿平均值銅綠假單胞菌枯草芽抱桿菌供試品對照組的微生物生長檢查記錄供試品供試品對照組計數結果cfu/ 皿平均值12測試人/測試日期：復核人/復核日期:批號：產品試驗組的微