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1、 基于表面等離子體共振的基于表面等離子體共振的H6亞型禽流感病毒快速檢測(cè)的亞型禽流感病毒快速檢測(cè)的光纖傳感器的初步研究光纖傳感器的初步研究物聯(lián)網(wǎng)1303 劉 偉20137700背背 景景 01目錄目錄內(nèi)內(nèi) 容容02 03結(jié) 果表面等離子體共振(SPR)是一種物理光學(xué)現(xiàn)象,當(dāng)一束平面單色偏振光在一定的角度范圍內(nèi)照射到兩種不同折射率的介質(zhì)界面(如玻璃表面的金屬銀或金鍍層)發(fā)生全反射時(shí),當(dāng)入射光的波向量與金屬薄膜內(nèi)表面電子的振蕩頻率相匹配時(shí),光線即被耦合進(jìn)入金屬膜,引起電子發(fā)生共振,即表面等離子體共振。有許多缺點(diǎn),如成本高、體積大、移動(dòng)機(jī)械部件。標(biāo)線也避開棱鏡的機(jī)械復(fù)雜性。以避免這些缺點(diǎn),光纖已被許
2、多研究人員作為一個(gè)更緊湊的和負(fù)擔(dān)得起的激發(fā)光耦合到表面等離子體能夠替代。SPR生物傳感器禽流感的暴發(fā)和流行是一種新興的威脅到世界各地的公共衛(wèi)生,因?yàn)檫@種疾病通常會(huì)導(dǎo)致高發(fā)病率和潛在的死亡率??焖僭\斷和及時(shí)監(jiān)測(cè)潛在的禽流感疫情,使控制禽流感繼續(xù)構(gòu)成挑戰(zhàn)。傳統(tǒng)的檢測(cè)方法,使用,病毒等化、免疫和分子測(cè)試。然而,分離和鑒定的病毒需要復(fù)雜的程序,是耗時(shí)的。原理簡(jiǎn)介 側(cè)光光纖表面等離子體共振(SPR)制作的以暴露芯表面再敷用波長(zhǎng)為40 nm的金薄膜的表面附近的有效感知傳感器折射率的變化與表面濃度或捕獲的禽流感病毒亞型H6厚度。通過(guò)等離子改性制備光纖SPR傳感器檢測(cè)表面分類方法結(jié)合自組裝單層異丙醇化學(xué)在光纖
3、的金表面。隨后,N-(3-二甲氨基丙基)/ N-羥基琥珀酰亞胺進(jìn)行活化,使eb2-b3單克隆抗體捕獲/雞/ 2838v / 00(H6N1)通過(guò)流動(dòng)注射系統(tǒng)。02具體內(nèi)容具體內(nèi)容LOREM包括一個(gè)薄金膜和側(cè)磨的結(jié)構(gòu),類似于SPR棱鏡耦合激發(fā)的電磁波的傳播,VES在光纖是局限于滿足全反射條件,芯包結(jié)構(gòu)。當(dāng)入射角大于材料的臨界角時(shí),就消失了接口可以與金屬和辯證層進(jìn)行交互。SPR傳感的核心區(qū)域的曝光可以通過(guò)剝離的熔覆層的各向同性化學(xué)埃特切,這是很難的均勻金膜的圓形沉積。從熔覆層到核心區(qū)域的定向機(jī)械拋光,將允許更好的薄膜質(zhì)量和因此,盡量減少由于制造工藝的變化。光纖SPR傳感器具有側(cè)磨結(jié)構(gòu)示意圖包括一個(gè)
4、850納米的LED光源,側(cè)流式細(xì)胞拋光SPR光纖一六口,介質(zhì)壓力噴射閥的艙壁,注射器泵、光電探測(cè)器和一個(gè)omm-6810b ILX功率計(jì)。光學(xué)系統(tǒng)采用850 nm LED光源是用來(lái)監(jiān)測(cè)aiv-h6交互響應(yīng)的實(shí)時(shí)使用的流通過(guò)程。PBS是由注射器泵通過(guò)推側(cè)拋光光纖進(jìn)入流電池,并記錄在每個(gè)步驟中的時(shí)間的函數(shù)的變化的透射光強(qiáng)度。光纖SPR傳感器表面改性與羧基山姆層和用EDC和NHS活化后,如圖所示。單克隆抗體eb2-b3稀釋在碳酸鈉緩沖液(15 mM Na2CO3 35 M碳酸氫鈉,pH 9.6)然后涂上的微孔板;隨后,微孔板孵育4 C過(guò)夜。用PBS洗滌后,板塊被一堵洗滌三次后30 min,共37處
5、C.緩沖液150 m l /培養(yǎng),板孵育with150毫升/禽流感或氣管樣本從雞30微型37 后盤子都洗了五次,一eb2-e5-mab-hrp 1:800稀釋100毫升/(檢測(cè)Tor的抗體)被添加到板上,并保持在37 C 30分鐘。光密度(OD)在450 nm與ELISA閱讀器讀取(生物- Tek的儀器、威努斯基,VT)。用Trizol提取RNA從氣管勻漿。采用RT-PCR方法檢測(cè)流感aiv-h6 RNA。一套h6ha基因特異性引物(進(jìn)行al.,2001)。這個(gè)RT-PCR擴(kuò)增:反轉(zhuǎn)錄在42 C 30分鐘,變性95 C 3分鐘,其次是35個(gè)周期的95 C 30 S,50 C 40,C 72 4
6、0美國(guó)隨后的mplification產(chǎn)物進(jìn)行1.5%瓊脂糖凝膠電泳,和目標(biāo)帶是由safeview核酸染色染色可視化。光纖SPR傳感器的比較,對(duì)甲型流感/雞2838v / 00臨床樣本的檢測(cè)方法及檢測(cè)03結(jié)結(jié) 果果描述了SPR信號(hào)從制作的光纖傳感器的各種aiv-h6濃度。透射光強(qiáng)歸一化計(jì)算每從生物分子的結(jié)合產(chǎn)生的光強(qiáng)度的百分比變化。無(wú)特定病原(SPF)抗原為陰性對(duì)照我們?yōu)榱舜_定光纖SPR傳感器檢測(cè)的特異性圖1(a)。當(dāng)SPF抗原的濃度 CFU / M L 100的注入流動(dòng)單元,發(fā)送如發(fā)生相應(yīng)的變化。在60 升/分鐘的流速,100 l樣品流經(jīng)傳感器,100秒后用PBS漂洗后,SPF抗原的SPR信號(hào)仍接近巴塞爾在透射光的強(qiáng)度,這意味著 CFU/mL SPF抗原陰性對(duì)照樣品沒有eb2-b3對(duì)aiv-h6單克隆抗體反應(yīng)。相比之下,發(fā)射的光強(qiáng)度對(duì)aiv-h6was洗掉多余的量明顯增加。圖1(b)顯示傳感信號(hào)從通常制作SPR傳感器。在aiv-h6注定與稀釋1至1000,透射光強(qiáng)變化從100% to106.5 %,表明檢測(cè)限是aiv-h6 1000稀釋。對(duì)光纖SPR傳感器驗(yàn)證、干擾和重代實(shí)驗(yàn)確認(rèn)。如圖2(a),強(qiáng)度從11.7兆瓦to11.9 MW,然后對(duì)初始強(qiáng)度水平。圖2(b)顯示該協(xié)會(huì)和地通過(guò)使用問(wèn)候語(yǔ)cfu/mL大腸桿菌單克隆抗體eb2-b3
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