蒽酮法測定可溶性糖方法

1、意酮法測定可溶性糖方法（一）實(shí)驗(yàn)原理糖在濃硫酸作用下，可經(jīng)脫水反應(yīng)生成糠醛或羥甲基糠醛，生成的糠醛或羥甲基糠醛可與意酮反應(yīng)生成藍(lán)綠色糠醛衍生物，在一定范圍內(nèi)，顏色的深淺與糖的含量成正比，故可用于糖的定量。糖類與慈酮反應(yīng)生成的有色物質(zhì)在可見光區(qū)吸收峰為630nm,故在此波長下進(jìn)行比色。（二）材料、儀器設(shè)備及設(shè)計(jì)1材料12種源砂生槐葉片，2種處理，4個重復(fù)，共96個樣。2儀器設(shè)備分光光度計(jì)，恒溫水浴鍋，20ml刻度試管，5ml和1ml刻度吸管，5ml和1ml的移液槍，記號筆，吸水紙適量。3試劑（1）慈酮乙酸乙酯試劑：取分析純慈酮1g,溶于50ml乙酸乙酯中，貯于棕色瓶中，在黑暗中可保存數(shù)周，如有結(jié)

2、晶析出，可微熱溶解。（2）100ug/L蔗糖溶液：1%蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液：精確稱取蔗糖1.000g,加入少量水溶解，移入100ml容量瓶，加0.5ml濃硫酸，定容至刻度線。100ug/L蔗糖溶液的配制：用移液槍精確吸取1%蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液1ml,加入到100ml容量瓶，加蒸儲水定容。（3）濃硫酸（比重1.84）（三）實(shí)驗(yàn)步驟1 .標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：按表1加入標(biāo)準(zhǔn)的蔗糖溶液，然后按順序向試管中加入0.5ml慈酮乙酸乙酯試劑和5ml濃硫酸，充分振蕩，立即將試管放入沸水浴中，逐管準(zhǔn)確保溫1min取出后自然冷卻至室溫，以空白作參比，在630nm波長下測其光密度，以光密度為縱坐標(biāo)，以糖含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并求出

3、標(biāo)準(zhǔn)線性方程。管號試劑01,23,45,67,89,10100g.1-1/ml00.20.40.60.81水/ml21.81.61.41.21蔗糖量/Rg020406080100y=0.0084x-0.0026R2=0.98581*0.864202 o o o O- 度光吸O 122 .取樣取不同種源砂生槐幼苗，用蒸儲水沖洗干凈，隨后用吸水紙吸干水分。將葉片切下，用錫箔紙包住，放入液氮中冷凍。取完后將樣品放入-80C冰箱中保存。3 .可溶性糖的提取將樣品從冰箱中取出，稱取0.200.30g,記錄重量，使用鐐子將樣品夾入刻度試管中，加入10mL蒸儲水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取2

4、次），提取液過濾入25ml容量瓶中，反復(fù)沖洗試管及殘?jiān)?，定容至刻度? .顯色測定吸取樣品提取液0.5ml于20ml刻度試管中（重復(fù)2次），加蒸儲水1.5ml,然后加入0.5ml慈酮乙酸乙酯試劑和5ml濃硫酸，充分振蕩，立即將試管放入沸水浴中，逐管準(zhǔn)確保溫1min取出后自然冷卻至室溫，以空白作參比（切勿忘掉對照）。在630nm波長下測其光密度，測定樣品的光密度。5 .計(jì)算可溶性糖的含量，計(jì)算公式：樣品含糖量（）=X100%WxV測X106其中：C在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出的糖含量（pg）,V 總一一提取液總體積（ml）,V 測一一測定時取用體積（ml）,D稀釋倍數(shù)，W樣品重量（g）,106一一樣品重量單

5、位由g換算成wg的倍數(shù)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)表海拔處理編號吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率標(biāo)準(zhǔn)方程求得糖含量C（ug）提取液量V（ml）吸取樣品液體積a（ml）稀釋倍數(shù)組織重量（W計(jì)算所得可溶性糖含量平均值2900CK111112113114PEG1211221231243000CK211212213214PEG2212222232243100CK311312313314PEG3213223233243258CK411412413414PEG4214224234243600CK511512513514PEG5215225235243600-1CK611612613614PEG6216226236243700CK711712713714PEG7217227237243800CK811812813814PEG8218228238243900CK911912913914PEG9219229239244000CK1011101210131014PEG1021102210231