法中飽和脂肪酸與不飽和脂肪酸測定與計算的探討

1、GCMS法中飽和脂肪酸與不飽和脂肪酸測定與計算的探討我從事食品檢測行業(yè)已經(jīng)6年了，真正接觸脂肪酸測還是在08年初。所以在這方面我并不是做得很好，但是由于這個方法，我從研發(fā)到初步的成型整整用了一年的時間。在這一年的研發(fā)過程中，我走了很多的歪路，但也從中學(xué)到很多，現(xiàn)在我把我的經(jīng)驗寫出來讓大家分享一下，同時也希望各位能給我指出我的不足之處，謝謝！當(dāng)時公司提出要開發(fā)食品營養(yǎng)標(biāo)簽的測試，這個營養(yǎng)標(biāo)簽中就有二個是用到氣相色譜法測定的，脂肪酸就其中的一個。雖然在大學(xué)里就有聽說過飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸、反式脂肪酸、單不飽和脂肪酸和多不飽和脂肪酸這個東西，但是我還真沒做過。開始拿到方法當(dāng)時還是GB/T1737

2、6-1998和17377-1998 我當(dāng)時拿著這兩個方法是看了又看看了又看就是看不明白他是怎么計算的。當(dāng)我搞明白計算方法后，又來了一個難題了，那就是為什么這個計算又分面積歸一化法和內(nèi)標(biāo)法呢？ 由于我主要說的是關(guān)于脂肪酸的測定，那么對于以上問題我是怎么去做的，在后面可能會講到，如果沒有講到的大家也可以給我留言大家相互交流。以下我來說說關(guān)于GCMS測定脂肪酸的方法。我們所有標(biāo)品是已經(jīng)甲脂化好的標(biāo)液。34種混合標(biāo)液。這37種混合標(biāo)準(zhǔn)品要一針全部走出來且要全部分開那可不是一件容易的事，所以當(dāng)時在做這個方法時，當(dāng)時標(biāo)液都用去了一半。由于之前在想60m的柱子（ZB-624）應(yīng)該就可以把這34種物質(zhì)全部份開

3、，但是沒想怎么不管我用多度的流速多小的升溫程序都是無法把C18里的幾個正反式分開，分得最好時也是有幾個三個峰連在一齊，是后實在不行，只能重新購買CP-Sil 88 VARIAN 100m的柱子。100m的柱子購買回來后就是一個不段的調(diào)試，以更能最好的把34種脂肪酸全部分開，這程就不多說了，現(xiàn)在就說說我們最終方法。進(jìn)樣口溫度220度，柱溫箱初溫150度保持15分鐘后以3度每分鐘的到220度保持3分鐘。柱流速我采用的是恒流模試1ml/min。MS從第8分鐘后才打開。也許在些會有很多人在想我為什么要以這個程序，我在些說明一下，每個方法的建立跟操作者是一定的關(guān)系，由于本人的一貫的做法都是以節(jié)儉時間為主

4、，因脂肪酸在150度才會出峰，所以我會把最低溫度設(shè)成150度，而脂肪酸基本上在220度就完全出完了，所以最我的溫度也只設(shè)到220度。哈哈，人懶就是那樣的，還有一定會有人在想為什么要用3度每分鐘做為升溫速率而不用2度或4度每分鐘呢？先說一下用4度每分鐘時C18：2中順反異構(gòu)體基本上有一半重合在一齊了。如果用2度每分鐘時C18里的好幾個峰基本上也是重合在一齊了，因為升溫速率高了各組分的出峰時間都快了，所以會導(dǎo)致沸點相近的物質(zhì)就會一齊出來了，而升溫速率低的會由于溶易出現(xiàn)拖尾從而導(dǎo)致峰從疊。有點一須要注意的是我們做樣品時跟我們進(jìn)標(biāo)液并不一樣，標(biāo)液濃度的比例基本一致，所以我們選擇進(jìn)樣時就不會因為某一樣品

5、濃度大而把其它的濃度小的物質(zhì)峰所掩蓋了，而樣品卻并不是34種脂肪酸都會出現(xiàn)，也有可能會出現(xiàn)34種以外的物質(zhì)的峰，有些物質(zhì)的其C18：1油酸的峰非常大經(jīng)常在色譜圖上看其保留時間與C18：1反油酸的時間最接近，而自然界中反式脂肪酸是不可能存在的，但由于些峰的保留時間與C18：1反油酸是最接近的你怎么去判斷其是油酸還是反油酸呢？在此之前我用過質(zhì)譜圖來判斷但是由于油酸與反油酸均是C18：1那他的質(zhì)譜圖可以說是完全一樣的，那么這樣用色譜和質(zhì)譜均無法判斷其是順的還是反的呢？最后想到了把樣品稀釋到與標(biāo)準(zhǔn)溶液相接進(jìn)的濃度時發(fā)現(xiàn)該物質(zhì)的保留時間往回靠了一點，正好與油酸的保留時間相重疊，這樣就可以判斷其是順式還是

6、反式，到這里就會有很多人說竟然這樣就可以判斷了為什么還要用質(zhì)譜做，而不用色譜做呢？大家想過沒有脂肪酸總共有多少種呢？無計其數(shù)，如果我們用色譜圖做的話那么就有可能把一些不是脂肪酸的物質(zhì)當(dāng)做脂肪酸計算進(jìn)去了，而是脂肪酸的卻沒有計算進(jìn)去，那么我們的測試就會有很大的結(jié)果差異，雖然說質(zhì)譜是一個半定量的一種檢測器，但我個人覺得只要不出現(xiàn)很大的干擾質(zhì)譜的定量還是非常的準(zhǔn)確的。以下的色譜圖大家可以看看這個是我所用的條件分出來的34種物質(zhì)的峰，分得還可以吧，我所用的GCMS是Agilent 6890N-5975, CP-Sil 88 VARIAN 100m的柱子,但是大家使用時也不一定要按我這個條件選擇啊，這個

7、圖只是跟我的儀器還用我使用的色譜柱有關(guān)，如果色譜柱已經(jīng)用了很久的話可能用這條件走出來的峰就會很差的哦。各組份為 丁酸甲酯(C4:0) Methyl Butyrate 623-42-7己酸甲酯(C6:0) Methyl Caproate 106-70-7辛酸甲酯(C8:0) Methyl Caprylate 111-11-5癸酸甲酯(C10:0) Methyl Pelargonate 110-42-9十一烷酸甲酯(C11:0) Methyl Hendecanoate 1731-86-8十

8、二烷酸甲酯(C12:0)/月桂酸甲酯 Methyl Laurate 111-82-0十三烷酸甲酯(C13:0) Methyl Tridecanoate 1731-88-0十四烷酸甲酯(C14:0)/豆蔻酸甲酯 Methyl Myristate 124-10-7十五烷酸甲酯(C15:0) Methyl Pentadecanoate 7132-64-1十六烷酸甲酯(C16:0)/棕櫚酸甲酯 Methyl Palmitate 112-39-0十七烷酸甲酯(C15:0) Methyl Marg

9、arate 十八烷酸甲酯(C18:0)/硬脂酸甲酯 Methyl Stearate 112-61-8二十烷酸甲酯(C20:0)/花生酸甲酯 Methyl Arachidate 1120-28-1二十二烷酸甲酯(C22:0)/山崳酸甲酯 Methyl Behenate 929-77-1十四碳烯酸甲酯(C14:1,順-9) Methyl Myristoleate 56219-06-8十五碳烯酸甲酯(C15:1,順-10) Methyl Cis-10-Pentadecenoate 十六碳烯酸

10、甲酯(C16:1,順-9)/棕櫚油酸甲酯 Methyl Palmitoleate 1120-25-8十七碳烯酸甲酯(C17:1,順-10) Methyl Cis-10-Heptadecenoate 十八碳烯酸甲酯(C18:1,順-9)/油酸甲酯 Methyl Oleate 112-62-9十八碳烯酸甲酯(C18:1T,反-9)/反油酸甲酯 Methyl Elaidate 2462-84-2十八碳二烯酸甲酯(C18:2,順-9,12)/亞油酸甲酯 Methyl Linoleate 112-63-0

11、十八碳三烯酸甲酯(C18:3,順-9,12,15)/-亞麻酸甲酯 Methyl Alpha-Linolenate 十八碳三烯酸甲酯(C18:3,順-6,9,12)/-亞麻酸甲酯 Methyl Gamma-Linolenate 二十碳烯酸甲酯(C20:1T,反-11) Methyl Trans-11-Eicosenoate 二十碳烯酸甲酯(C20:1,順-11)/花生一烯酸甲酯 Methyl Cis-11-Eicosenoate 二十碳二烯酸甲酯(C20:2,順-11,14) Methyl Cis-11,1

12、4-Eicosadienoate 二十碳三烯酸甲酯(C20:3,順-8,11,14) Methyl Homo-Gamma-Linolenate 二十碳三烯酸甲酯(C20:3,順-11,14,17) Methyl Cis-11,14,17-Eicosatrienoate 二十碳四烯酸甲酯(C20:4,順-5,8,11,14)/花生四烯酸甲酯(ARA-M) Methyl Cis-5,8,11,14-Eicosatetraenoate 二十二碳烯酸甲酯(C22:1,順-13)/順芥子酸甲酯 Methyl Erucate&

13、#160;1120-34-9二十二碳烯酸甲酯(C22:1T,反-13) Methyl Brassidate 二十二碳二烯酸甲酯(C22:2,順-13,16) Methyl Cis-13,16-Docosadienoate 二十二碳六烯酸甲酯(順-4,7,10,13,16,19)(DHA-M) Methyl Cis-4,7,10,13,16,19-Docosahexaenoate(Dha-M) 二十四碳烯酸甲酯(C24:1,順-15)/神經(jīng)酸甲酯 Methyl Nervonate 2733-88-2結(jié)果的計算現(xiàn)在行業(yè)

14、當(dāng)中有兩種計算方法其一是面積歸一化法，那就是用百分比來計算的。別一種是內(nèi)標(biāo)法計算，個人覺得內(nèi)標(biāo)法更準(zhǔn)確一點所以在些把內(nèi)標(biāo)法的計數(shù)公式列出來大家看看： 脂肪酸甲酯響應(yīng)因子Ri 式中：Ri脂肪酸甲酯i的響應(yīng)因子Psi混標(biāo)中各脂肪酸甲酯i的峰面積PsC11:0十一碳酸甲酯的峰面積Wi脂肪酸甲酯i的質(zhì)量WC11:0混標(biāo)中十一碳酸甲酯的質(zhì)量甘油三酯重量 式中： WFAMEi脂肪酸甲酯i的重量 WtC11:0內(nèi)標(biāo)物十一碳酸甲酯的重量 Pti脂肪酸甲酯i的峰面積 PtC11:0內(nèi)標(biāo)物十一碳酸甲酯的峰面積 Ri脂肪酸甲酯i響應(yīng)因子 1.0067十一碳酸甘油三酯轉(zhuǎn)換成十一碳酸甲酯的轉(zhuǎn)換系數(shù) fTGi脂肪酸甲酯i轉(zhuǎn)換成脂肪酸甘油三酯的系數(shù)樣品中總脂肪的含量 式中： T