血、尿液淀粉酶AMS兩點(diǎn)法測(cè)定-檢驗(yàn)科生化室作業(yè)書

1、【實(shí)用】檢驗(yàn)科SOP文件血、尿液淀粉的AMS兩點(diǎn)法測(cè)定1 .實(shí)驗(yàn)原理VitrosAMS試劑是一種干燥，多涂層的，在聚合物支撐基片上涂有分析成份的化學(xué)干片。將一滴10ul的患者樣品滴于干片上，樣品就被分布層均勻地分布 并滲透到下面的試劑層。分布層含有反應(yīng)所需的染色淀粉底物 （與支 鏈淀粉共價(jià)化合），樣品中的淀粉酶催化該染色淀粉水解成更小的有 色糖。隨后這些有色糖進(jìn)入下面的試劑層。分別在孵育2.3分鐘和5分鐘時(shí)用反射儀測(cè)定試劑層中有色糖的反射強(qiáng)度，兩次讀數(shù)間的差值與樣品中的淀粉酶活性成正比。測(cè)定方式：兩點(diǎn)法波長：540nm測(cè)試時(shí)間和溫度：37c約5分鐘反應(yīng)過程：淀粉酶染色支鏈淀粉> 有色糖2

2、標(biāo)本：1.1 病人準(zhǔn)備：無特殊。1.2 樣品類型：血清；肝素鋰/鈉抗凝血漿。定時(shí)收集的，稀釋后的 尿樣。1.3 標(biāo)本采集與處理：1.3.1 血清和血漿樣品藥海無涯學(xué)無止境專注醫(yī)學(xué)領(lǐng)域【實(shí)用】檢驗(yàn)科SOP文件血漿中淀粉酶活性約比血清中高 20U/L。不能使用鈣螯合物作抗凝劑，如草酸，枸椽酸和 EDTA樣品采集后4小時(shí)內(nèi)要離心標(biāo)本，吸 出血清。處理樣品時(shí)要將其當(dāng)成生物污染品。1.3.2 尿液樣品定時(shí)或隨時(shí)采集的尿液，特別要注意的是：含有冰醋酸，濃鹽酸或者防腐劑中有乙二羥化四甲鏤和氧化汞的樣品不能測(cè)淀粉酶。尿液樣品在測(cè)試前要冷藏在28C。處理樣品時(shí)要將其當(dāng)成生物污染品。3 .標(biāo)本的存放：血清、血漿、

3、尿液室溫下最多 7天；48c冷藏最 多1個(gè)月；樣品不可冷凍保存。4 .標(biāo)本的運(yùn)輸：樣品要放在帶蓋的容器內(nèi)以防污染和蒸發(fā)。5 .標(biāo)本拒收的標(biāo)準(zhǔn)：污染、抗凝劑、防腐劑不符合要求，標(biāo)本放置 時(shí)間過長。6 .試驗(yàn)材料：6.1 測(cè)試AMS所需的物品包括：Vitros化學(xué)定標(biāo)物Kit3; Vitros特 制質(zhì)控液；Vitros7%BSAffi釋液。強(qiáng)生廠家提供原裝進(jìn)口，試劑盒外包裝上標(biāo)明了測(cè)試項(xiàng)目名稱， 試 劑標(biāo)簽代碼，有效期限和儲(chǔ)藏溫度。6.1.1 試劑組成：干片成分：反應(yīng)成份是染色支鏈淀粉。其它成份有染色劑，粘合劑，緩沖劑， 表面活性劑，穩(wěn)定劑和媒染劑。干片標(biāo)記：試劑盒外包裝上標(biāo)明了測(cè) 試項(xiàng)目名稱，試

4、劑標(biāo)簽代碼，有效期限和儲(chǔ)藏溫度。6.1.2 試劑準(zhǔn)備從冰箱中取出干片盒，在將干片盒打開封裝并裝入儀器內(nèi)的干片儲(chǔ)藏器之前必須使其達(dá)到室溫狀態(tài)1828c。因此從藥海無涯 學(xué)無止境 專注醫(yī)學(xué)領(lǐng)域冰箱中取出的試劑盒至少要在室溫下要放置60分鐘，而冷藏的試劑盒至少要在室溫下放置30分鐘。去除內(nèi)包裝后立即將干片盒放入儀器的儲(chǔ)藏器中。說明：在試劑盒達(dá)到室溫后的24小時(shí)之內(nèi)必須將其裝入儀器中。6.1.3 試劑穩(wěn)定性與貯存未開封的干片盒：存儲(chǔ)在-18C或低于該范圍。在機(jī)內(nèi)干片儲(chǔ)藏器中的干片盒：在儀器上放置時(shí)間不能超過 2周， 否則要更換新試劑。當(dāng)儀器關(guān)閉時(shí)間不超過2個(gè)小時(shí)時(shí)，可將干片盒 留在儲(chǔ)藏器中。出現(xiàn)以下情

5、形要做質(zhì)控檢測(cè)：儀器關(guān)閉時(shí)間超過2小 時(shí)；再次裝載從儀器儲(chǔ)藏器中取出的干片盒。如果儲(chǔ)藏正確，VitrosAMS干片可保質(zhì)到包裝盒上標(biāo)明的有效期限。參見VITROS25阡化學(xué)分析儀試劑穩(wěn)定性及貯存.SOP文件。6.1.4 變質(zhì)指示：超過有效期的試劑干片不能使用。6.1.5 注意事項(xiàng)：為避免干片盒打開以前其內(nèi)包裝受損，不能摔打 干片盒；不要讓尖利物刺入內(nèi)包裝。6.2 校準(zhǔn)品：用Vitros化學(xué)定標(biāo)物Kit3。血清、血漿、尿液都用相 同的定標(biāo)液，不過各自的 SAVs值不同。有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)液的配制，使用及 保存的配制，保存和穩(wěn)定的詳情，可參閱VITROS25阡化學(xué)分析儀校 準(zhǔn)品和質(zhì)控品.SOP文件。6.3

6、質(zhì)控品：使用Vitros特制的質(zhì)控物品；若使用其它的一些質(zhì)控 物品，當(dāng)與別的AMS測(cè)試方法比較時(shí)就會(huì)出現(xiàn)差異，如：用人血清/ 血漿混合物分離制成的質(zhì)控物品；含有高濃度防腐劑，穩(wěn)定劑和其它 化學(xué)添加劑的質(zhì)控物品；豬或牛血清質(zhì)控品的淀粉酶值會(huì)偏低， 還會(huì)藥海無涯 學(xué)無止境 專注醫(yī)學(xué)領(lǐng)域【實(shí)用】檢驗(yàn)科SOP文件因測(cè)試方法不同而變化；酶的活性可能會(huì)由于酶源，稀釋溫度和復(fù)溶 活化時(shí)間不同而發(fā)生變化；乙烯乙二醇作穩(wěn)定劑質(zhì)控物品不能使用。有關(guān)質(zhì)控液的配制，保存和穩(wěn)定的詳情，可參閱VITROS25阡化學(xué) 分析儀校準(zhǔn)品和質(zhì)控品.SO找件。7 .儀器美國強(qiáng)生廠家VITROS25Qir自動(dòng)干式生化分析儀。具體測(cè)試程

7、序請(qǐng) 參閱操作手冊(cè)的介紹。8 .操作步驟：將試劑復(fù)溫后直接放入儀器，樣品編程，儀器 5分后 自動(dòng)打印結(jié)果。具體測(cè)試程序請(qǐng)參閱 VITROS25臊作手冊(cè).SOR具體 定標(biāo)程序：參閱操作手冊(cè)的相關(guān)章節(jié)內(nèi)容。何時(shí)進(jìn)行定標(biāo)：一一在維 護(hù)和保養(yǎng)時(shí)更換了儀器的重要部件。一一質(zhì)控結(jié)果持續(xù)超出線性范圍 內(nèi)時(shí)，詳情參閱操作手冊(cè)。一一管理?xiàng)l例上指定的時(shí)間，在美國，CLIA 要求至少每6個(gè)月定標(biāo)一次。9 .檢驗(yàn)結(jié)果的判斷與分析10 .質(zhì)量控制：操作建議：將質(zhì)控物質(zhì)當(dāng)成生物污染品來處理；將 質(zhì)控液與患者樣品同時(shí)進(jìn)行測(cè)試；每天至少做一次質(zhì)控以檢測(cè)儀器運(yùn) 行狀況；選擇質(zhì)控濃度來檢查與臨床的相關(guān)性； 其它詳情參閱操作手 冊(cè)

8、質(zhì)控章節(jié)的有關(guān)內(nèi)容。有關(guān)質(zhì)控操作的常規(guī)性條例可參照國際質(zhì)控 檢測(cè)（IQCT1的內(nèi)容。在每一批標(biāo)本中都應(yīng)把質(zhì)控血清作為未知標(biāo)本 進(jìn)行分析，以2s為質(zhì)控警告限，3s為失控限，繪制質(zhì)控圖，判斷是 否在控。質(zhì)控規(guī)則參見生化室室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程 .SOPt件。11 .計(jì)算方法：以用Vitros化學(xué)定標(biāo)物校準(zhǔn)儀器后，在病人結(jié)果可 報(bào)告范圍內(nèi)，儀器直接報(bào)告可靠的檢測(cè)結(jié)果，以 U/L報(bào)告。12 .參考值范圍國際單位（U/L）血清30-11013 比血清高約20尿液（隨機(jī)尿樣）32-64114 以下兒童比成人低。此參考范圍是測(cè)試98位健康成人，然后取靶值附近 95%的結(jié)果計(jì) 算所得。參考值因性別、年齡、飲食和地域

9、的不同而有所差別。根據(jù) 好的實(shí)驗(yàn)室經(jīng)驗(yàn)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立自己的參考值。13 .臨床意義：淀粉酶是淀粉分解和消化酶，由胰腺和唾液腺產(chǎn)生。 急性胰腺炎，胰腺潰瘍或假（性）囊腫，胰腺創(chuàng)傷，淀粉樣變，膽總 管阻塞和胸部手術(shù)后，會(huì)使淀粉酶增加。流行性腮腺炎和腎功能不全 也可能導(dǎo)致淀粉酶活性升高。14 .操作性能14.1 線性范圍：血清/尿液：30-1200U/L。14.2精密度：在Vitros250生化儀上用質(zhì)控液來測(cè)精密度。結(jié)果反 映了該方法的精密度。當(dāng)儀器維護(hù)，周圍環(huán)境，干片處理和保存，質(zhì) 控液的復(fù)溶以及樣品處理等方面發(fā)生變化都會(huì)影響結(jié)果的重復(fù)性。日間精密度血清x(U/L)s(U/L)CV(%)室間

10、精密度n=20 天x(U/L)s(U/L)CV(%)樣 品1n=79822.3樣品1822.73.3樣 品4504.6樣品24508.11.82n=78日間精密度尿液x(U/L)s(U/L)CV(%)室間精密度n=22 天x(U/L)s(U/L)CV(%)樣 品1n=88500.7樣品1501.12.2樣 品2n=841211.6樣品21211.61.3*日間精密度是將2至3份相同的樣品在一天中運(yùn)行兩次，然后對(duì) 測(cè)試結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)算。*室間精密度是用同一個(gè)批號(hào)的干片每周定標(biāo)一次，然后對(duì)測(cè)試結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)算。1.3 3方法學(xué)比較：用Vitros700儀器和對(duì)硝基苯酚法參考方法分別 測(cè)試相同血清樣

11、品，對(duì)比結(jié)果顯示Vitros方法的準(zhǔn)確度良好。用Vitros250儀器與Vitros700儀器測(cè)試相同的血清/尿液樣品，對(duì)比結(jié)果 顯示Vitros250方法的準(zhǔn)確度良好，血清：Y=0.99X+5.4（r=1.0, N=85, 檢測(cè)范圍 20-1039U/L）;尿液：Y=1.01X+7.6（r=0.998, N=39,檢測(cè)范 圍 25-1103U/L）。1.4 4靈敏度：本試劑的檢測(cè)下限為血清、尿液均為30U/L。1.5 5特異性：經(jīng)測(cè)試，以下物質(zhì)對(duì) VitrosAMS干片法均無干擾（偏 差9U/L）。阿司匹林30mg/Dl、維生素C3mg/d、膽紅素20mg/dL、膽 固醇500mg/dL、葡

12、聚糖1000mg/dL、乙醇300mg/dL、5-氟尿喀咤 125mg/L 等等。1.6 6病人結(jié)果可報(bào)告范圍：血清、尿液：30-1200U/L。15 .超出范圍結(jié)果處理：本法線性上限為血清、尿液為1200U/L。如果樣品中AMS濃度超出系統(tǒng)的測(cè)試線性范圍，請(qǐng)按下列步驟進(jìn)行稀 釋：血清和血漿：如果是脂血標(biāo)本或淀粉酶的活性超出系統(tǒng)的測(cè)試線 性范圍，可按下列步驟進(jìn)行稀釋：淀粉酶活性低的脂血標(biāo)本用Vitros特制稀釋液或生理鹽水配制的2%牛血清白蛋白（PH7.4）進(jìn)行稀釋。 說明：用Vitros特制稀釋?時(shí)先按1:1的比例稀釋樣品，結(jié)果乘以 2。重新測(cè)試。必要時(shí)，校正稀釋液的淀粉酶活性。測(cè)試結(jié)果乘以

13、稀 釋倍數(shù)就得到原始樣品中淀粉酶的活性。尿液：如果樣品中淀粉酶的活性超出系統(tǒng)的線性范圍，請(qǐng)按下列步驟進(jìn)行稀釋：用生理鹽水稀釋 樣品。重新測(cè)試。說明：稀釋液的量要盡可能少。由于稀釋樣品會(huì)產(chǎn) 生一個(gè)正偏差，因此結(jié)果只是近似值。16 .病危報(bào)警值的處理當(dāng)血清 AMS>300U/L時(shí)，在經(jīng)過復(fù)查等確認(rèn)手 段處理后應(yīng)及時(shí)向臨床主管醫(yī)生匯報(bào)。17 .方法局限性17.1 本法線性上限血清、尿液為1200U/L。血清和血漿：如果是脂 血標(biāo)本或淀粉酶的活性超出系統(tǒng)的測(cè)試線性范圍，可按下列步驟進(jìn)行 稀釋：淀粉酶活性低的脂血標(biāo)本用 Vitros特制稀釋液或生理鹽水配制 的2%牛血清白蛋白（PH7.4）進(jìn)行稀釋。說明：用Vitros特制稀釋液 時(shí)先