葡萄籽中白藜蘆醇提取和檢測(cè)方法的研究現(xiàn)狀

1、綜述與專題評(píng)論葡萄籽中白藜蘆醇提取和檢測(cè)方法的研究現(xiàn)狀黃德成李華王華(西北農(nóng)林科技大學(xué)葡萄酒學(xué)院,楊凌,712100)摘要介紹了白藜蘆醇的理化性質(zhì)及其提取和檢測(cè)方法的研究現(xiàn)狀,并對(duì)這些方法的優(yōu)缺點(diǎn)作出簡(jiǎn)要總結(jié),為葡萄籽功能性食品中白藜蘆醇的檢測(cè)提供參考。關(guān)鍵詞葡萄籽,白藜蘆醇,理化性質(zhì),提取,檢測(cè)白藜蘆醇(resveratrol),化學(xué)名稱為3,5,42三羥基21,22二苯乙烯(trans23,5,42trihydroxy2stilbene),是一種含有茂類結(jié)構(gòu)的多酚化合物;少量以游離態(tài)的形式廣泛存在于葡萄、虎杖和花生等天然植物或果實(shí)當(dāng)中,到目前為止至少己在21科、31屬的72種植物中發(fā)現(xiàn)了白

2、藜蘆醇1。多年來人們對(duì)白藜蘆醇研究結(jié)果表明,白藜蘆醇具有抗癌、抗菌、抗氧化、降血脂和抗誘變等作用2。在日本,已將含白藜蘆醇植物提取物作為食品添加劑使用;在我國,也有將白藜蘆醇提取物制成降脂、美容、膠囊3。統(tǒng)一的方法標(biāo)準(zhǔn)4、提取和檢測(cè)方法3,為葡萄籽功能性食品中白藜蘆醇檢測(cè)提供參考。爾吸收系數(shù)為126006。R=H.cisresveratrol=Glu.transpiceidR=Glu.cispiceid圖1白藜蘆醇及其苷的化學(xué)結(jié)構(gòu)2白藜蘆醇的提取目前,國內(nèi)外大多采用葡萄皮、葡萄籽和虎杖等植物為原料提取白藜蘆醇。先將原料粉碎,采用有機(jī)溶劑(如甲醇、乙醇、乙酸乙酯等)進(jìn)行提取,經(jīng)過濾后將濾液濃縮,

3、即得白藜蘆醇粗品。有機(jī)溶劑提取方法主要分為回流法、浸漬法、索氏法、超聲波法等。211回流法加熱回流提取白藜蘆醇的溶劑主要有甲醇、乙醇和乙酸乙酯,對(duì)提取液萃取分離的萃取劑有石油醚、氯仿、乙酸乙酯等。朱鴻津7利用加熱回流提取虎杖中白藜蘆醇的方法是稱取虎杖粉末(過40目篩)50g,用體積分?jǐn)?shù)95%乙醇水浴回流提取3次,第1次用4倍質(zhì)量乙醇回流提3h,第2、3次分別用3倍質(zhì)量乙醇回流提取各1h,合并提取液,冷卻,過濾,濾液減壓濃縮,得到白藜蘆醇粗品溶液?；亓鞣ㄓ兄崛÷瘦^高,成本低的優(yōu)點(diǎn);然而由于提取時(shí)間較長(zhǎng),導(dǎo)致白藜蘆醇的氧化,使檢測(cè)結(jié)果失真。212浸漬法姚寶書8等人以乙酸乙酯為提取劑,考察浸提時(shí)間

4、、浸提溫度、浸提次數(shù)、料液比對(duì)提取效果的影響,確定的最適的浸提條件:提取時(shí)間40min,溫度1白藜蘆醇的理化性質(zhì)白藜蘆醇為無色針狀結(jié)晶,分子式為C14H12O3,相對(duì)分子質(zhì)量228125,其結(jié)構(gòu)式有順、反2種,并各自可以與葡萄糖結(jié)合形成順、反式白藜蘆醇苷(其結(jié)構(gòu)見圖1),白藜蘆醇常與葡萄糖結(jié)合以糖苷的形式存在;白藜蘆醇熔點(diǎn)256257,261升華,易溶于乙醚、甲醇、乙醇、丙醇等。在366nm的紫外光照射下能產(chǎn)生熒光,并能和三氯化鐵2鐵氰化鉀起顯色反應(yīng)5。其反式異構(gòu)體的生物活性強(qiáng)于順式異構(gòu)體,在紫外光照射下反式白藜蘆醇能夠轉(zhuǎn)化為其順式異構(gòu)體。純白藜蘆醇對(duì)光不穩(wěn)定,在完全避光條件下,反式白藜蘆醇可

5、在乙醇中穩(wěn)定數(shù)月,僅在高pH(10)下穩(wěn)定性差一些;順式白藜蘆醇在避光條件下只有中性pH下較穩(wěn)定。反式與順式白藜蘆醇在紫外光(UV)210nm處有強(qiáng)吸收,其第二吸收峰分別在305330nm和280295nm。在乙醇中,反式在308nm的摩爾吸收系數(shù)為30000,順式于288nm的摩第一作者:碩士(李華教授為通訊作者)。收稿日期:2006-08-14113食品與發(fā)酵工業(yè)FOODANDFERMENTATIONINDUSTRIES60,提取次數(shù)2次,料液比(gmL)130。浸漬法提取效果比回流法和超聲波稍低,且提取時(shí)與空氣接觸時(shí)間長(zhǎng),也會(huì)導(dǎo)致白藜蘆醇的氧化。213索氏法于紅霞9等人利用索氏法提取葡萄

6、籽中白藜蘆醇,并測(cè)定其含量,方法如下:稱取適量經(jīng)烘干的葡萄籽粉,置索氏提取器中,加無水乙醇回流6h,蒸干溶劑,用無水乙醇定容,測(cè)定前,將樣品經(jīng)流動(dòng)相溶劑稀釋,用高效液相色譜儀測(cè)定,以白藜蘆醇標(biāo)準(zhǔn)作對(duì)照。索氏法提取效果差,提取時(shí)間長(zhǎng);進(jìn)一步延長(zhǎng)提取時(shí)間,可能會(huì)有好的得率,但同時(shí)也延長(zhǎng)了生產(chǎn)周期,效率反而不高。214超聲波法李華10等人研究利用超聲波輔助提取葡萄籽中總多酚?？疾炝顺暡ǖ念l率、作用時(shí)間、溫度、提取時(shí)間、料液比及提取次數(shù)5個(gè)單因素對(duì)總多酚提取率的影響,并在單因素的基礎(chǔ)上進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)得到多酚提取的最佳工藝條件:溫度45,頻率為40kHz,料液比(gmL)為112,共提取5次,55min

7、。,進(jìn)行梯度洗脫,紫外檢測(cè)器306nm下,外標(biāo)法定性、定量地測(cè)出不同葡萄酒中的白藜蘆醇的含量。張予林13等人采用HPLC法測(cè)定葡萄酒中的白藜蘆醇,將酒樣經(jīng)超濾脫氣后直接進(jìn)樣,色譜條件為:固定相為shim2parkVP2ODSC18柱,流動(dòng)相為乙腈-水(體積比4060)進(jìn)行等壓洗脫;流速:110mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為306nm,進(jìn)樣量10L。結(jié)果表明,白藜蘆醇含量在012540mg/L的范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。高年法等人14采用SCR2101H柱,流動(dòng)相為含40%體積乙腈的水溶液,流速為016mL/min,柱溫為25,檢測(cè)波長(zhǎng)為306nm,進(jìn)樣量20L,測(cè)出了葡萄酒中白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的含量

8、。高效液相色譜法具有簡(jiǎn)便快捷、選擇性好、準(zhǔn)確度高的特點(diǎn);但因白藜蘆醇的異構(gòu)化會(huì)導(dǎo)致測(cè)定損失,樣品需要量大,待測(cè)組分損失較為嚴(yán)重。312,其高效、高速、和發(fā)展前景。劉芳華15等人以毛細(xì)管電泳結(jié)合電化學(xué)檢測(cè)(ED)測(cè)定了葡萄和葡萄酒中的白藜蘆醇含m直徑的碳圓盤電極為量。在優(yōu)化條件下,以300工作電極,工作電位為+0185V(vs1SCE),在100mmol/L硼酸鹽(pH=912)的運(yùn)行緩沖液中,被測(cè)物濃度與峰電流在3個(gè)數(shù)量級(jí)范圍內(nèi)呈良好線性,檢出限為1×10-7g/mL。曹佳16等人在80mmol/L硼酸鹽(pH=8193)的運(yùn)行緩沖液中,采用電動(dòng)進(jìn)樣,進(jìn)樣電壓為12kV,進(jìn)樣時(shí)間10

9、s,分離電壓15kV的條件下,測(cè)定葡萄皮中白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的含量,檢出限為1125×10-4g/L,線性動(dòng)態(tài)范圍分別是4188×10-40131g/L和5137×10-40134g/L。用毛細(xì)管電泳法測(cè)定白藜蘆醇,所需設(shè)備和程序較簡(jiǎn)單,測(cè)定的定量分析結(jié)果與高效液相色譜和氣2質(zhì)聯(lián)用一致17,準(zhǔn)確度高。313薄層掃描法薄層掃描利用薄層色譜斑點(diǎn)(組分)發(fā)出的熒光強(qiáng)度或利用熒光薄層板上暗斑的熒光淬滅程度進(jìn)行定量分析;在對(duì)二苯乙烯類化合物的含量測(cè)定研究中,TLC法是較早應(yīng)用的分析方法。陳敏18等人以薄層掃描法同時(shí)測(cè)定葡萄酒中順反白藜蘆醇及其糖苷異構(gòu)體的方法,樣品用C18

10、固相柱提取,以聚酰胺薄膜為固定相,苯2甲醇2甲酸(體積比為1051)為展開劑進(jìn)行分離,熒光掃描法定量,4種組分的線性關(guān)蘆醇的實(shí)驗(yàn)室提取劉樹興11等人以虎杖為樣品考察了回流提取、熱水浸提、索氏提取、超聲波提取這4種方式的提取效果。所得結(jié)果見表1。表1不同提取方法比較表12提取方法回流提取熱水浸提索式提取超聲波提取由表1明顯可以看出,回流提取與超聲波提取的效果較好,索氏提取的效果最差。3白藜蘆醇的檢測(cè)目前,白藜蘆醇的檢測(cè)方法主要有高效液相色譜(HPLC)、毛細(xì)管電泳(CE)、薄層掃描(TLC)和氣相色譜2質(zhì)譜聯(lián)用(GC2MS)等。311高效液相色譜法高效液相色譜是在定性的基礎(chǔ)上定量,以純物質(zhì)作為標(biāo)

11、準(zhǔn)物,由已知量的被測(cè)物標(biāo)樣推算混合物中被測(cè)物的量12。它是中藥制劑質(zhì)量評(píng)價(jià)中常用的分析方法,也是目前企業(yè)及科研單位精確定量白藜蘆醇的主要方法。王華4等人采用直接進(jìn)樣法將處理好的酒樣通過C18柱,乙腈2水流動(dòng)相(體積比=1991)114綜述與專題評(píng)論系良好,相關(guān)系數(shù)為019972019996,平均回收率為9711%9815%,RSD為210%312%。薄層熒光掃描法的檢測(cè)靈敏度較低,與高效液相色譜相比,適用范圍較窄。314氣2質(zhì)聯(lián)用法氣2質(zhì)聯(lián)用法就是利用氣相色譜對(duì)混合物的高效分離能力和質(zhì)譜對(duì)純物質(zhì)的準(zhǔn)確鑒定能力而開發(fā)的分析儀器法。氣相色譜是質(zhì)譜的樣品處理器,質(zhì)譜是氣相色譜的檢測(cè)器1。李攻科19等

12、人在SPE2GC2MS法測(cè)定葡萄酒中順反式白藜蘆醇中確定了GC2MS操作條件:色譜條件,進(jìn)樣口溫度280,柱溫采2郜海燕,于震宇,陳杭君,等1白藜蘆醇功能和作用機(jī)理研究進(jìn)展J1中國食品學(xué)報(bào),2006,6(1):4114163張博1HPLC法測(cè)定紫金膠囊中白藜蘆醇的含量J1中草藥,2001,32(1):354王華,尉亞輝1葡萄酒中白藜蘆醇的HPLC測(cè)定J1西北用程序升溫,初溫100,保持2min后,以10/min速度升至300,恒溫10min,載氣為純氦氣,流速為110mL/min;質(zhì)譜條件,接口溫度280,EI離子源,電子能量70eV,離子源溫度230,四極桿溫度106,電子倍增器電壓1400

13、V,質(zhì)量掃描范圍30550。氣2質(zhì)聯(lián)用法耗時(shí)少、樣品用量少、待測(cè)組分損失少;但如果不衍生化而直接進(jìn)樣,色譜峰拖尾嚴(yán)重,且處理后的樣品容易帶水;,更為簡(jiǎn)便、快速、損失小,4小結(jié)檢測(cè)白藜蘆醇時(shí),應(yīng)根據(jù)各組分的理化性質(zhì),采取相應(yīng)純化和濃縮措施,減少干擾物質(zhì)對(duì)檢測(cè)白藜蘆醇的影響,提高白藜蘆醇的濃度,從而提高檢測(cè)效果。葡萄籽中白藜蘆醇含量很少,見光易發(fā)生異構(gòu)化,因此在測(cè)定過程中要求避光。不論采用哪種提取和檢測(cè)方法,都應(yīng)該根據(jù)白藜蘆醇的性質(zhì)及實(shí)驗(yàn)室的條件進(jìn)行合理的預(yù)處理,選擇最優(yōu)化的提取和檢測(cè)條件,從而取得較理想的檢測(cè)結(jié)果。參考文獻(xiàn)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),1999,27(4):81875向敏,匡曉東,楊勇,等1白藜

14、蘆醇及其藥理保健功能的研究J1中國食品添加劑,2004,(5):16206BrentCT,AndrewL,WaterhouseresveratrolisomericmolarabsorptivitiesstabilityJ1AgricFoodChem,1996,44(5):125312577朱鴻津1HPLC法測(cè)定虎杖中白藜蘆醇的含量J,中國野生植物資源,2005,01(20),49508姚寶書,齊崴1從葡萄皮渣中提取白藜蘆醇的研究J1天津輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào),1999(4):8159于紅霞,徐貴發(fā),趙秀蘭,等1葡萄籽中的黃酮和白藜蘆醇含量測(cè)定J1衛(wèi)生研究,2000,29(3):18910李華,沈潔1

15、J111,(12):45147M1北京:高等教育出版社,2003.648013張予林,王華,魏冬梅,等1HPLC法直接進(jìn)樣測(cè)定葡萄酒中的白藜蘆醇J1釀酒,2004(1):686914高年法,姜麗,張健,等1HPLC法測(cè)定葡萄酒中白藜蘆醇的基礎(chǔ)性研究J1釀酒,2005(1):798115劉芳華,彭友元,葉建農(nóng)1毛細(xì)管電泳-電化學(xué)檢測(cè)法測(cè)葡萄酒中的白藜蘆醇J1分析測(cè)試學(xué)報(bào),2005,24(3):12512716曹佳,陳冠華,杜鈺珊,等1毛細(xì)管區(qū)帶電泳法測(cè)定白藜蘆醇與白藜蘆醇苷J(rèn)1河北大學(xué)學(xué)報(bào),2006,26(1):9710017PrasongsidhBC,SkurrayGR1Capillaryel

16、ectrophoesisanal2ysisoftran-andcis-resveratrol,quercetin,catechinandgal2licacidinwineJ1FoodChem,1998,62(3):35518陳敏,舒友琴,何計(jì)國,等1薄層熒光掃描法測(cè)定葡萄酒中的白藜蘆醇及其糖苷異構(gòu)體J1分析化學(xué),2005(5):495219李攻科,李曉東,馬亭,等1SPE2GC2MS法測(cè)定葡萄酒中順反式白藜蘆醇J1中山大學(xué)學(xué)報(bào),2000,39(1):63671李華,張予林,袁春龍,等1葡萄與葡萄酒中白藜蘆醇分析方法的研究現(xiàn)狀J1中國食品學(xué)報(bào),2005,5(1):104107Extractionan