職業(yè)性慢性鉛中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則GB

1、職業(yè)性慢性鉛中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則GB 115041989職業(yè)性慢性鉛中毒是生產(chǎn)中長(zhǎng)期接觸鉛煙或鉛塵所致的全身性疾病。其早期表現(xiàn)為卟啉代謝障礙、神經(jīng)衰弱綜合征和消化系統(tǒng)癥狀，中毒較重時(shí)出現(xiàn)貧血、腹絞痛，嚴(yán)重時(shí)出現(xiàn)鉛性麻痹或中毒性腦病。1 主題內(nèi)容與適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了職業(yè)性慢性鉛中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則。本標(biāo)準(zhǔn)適用于生產(chǎn)中接觸鉛煙或鉛塵而引起的慢性中毒。2 診斷原則應(yīng)根據(jù)確切的職業(yè)史和以神經(jīng)、消化、血液系統(tǒng)損害為主的臨床表現(xiàn)及有關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢查，參考作業(yè)環(huán)境調(diào)查，進(jìn)行綜合分析后，方可診斷。3 診斷及分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)31 鉛吸收有密切鉛接觸史，尚無(wú)鉛中毒的臨床表現(xiàn)，尿鉛039molL（008mgL）或048m

2、ol24h（01mg24h）；或血鉛241molL（50gdL）；或診斷性驅(qū)鉛試驗(yàn)后尿鉛145molL（03mgL）而386molL（08mgL）者。32 輕度中毒321 常有輕度神經(jīng)衰弱綜合征，可伴有腹脹、便秘等癥狀，尿鉛或血鉛量增高。具有下列一項(xiàng)表現(xiàn)者，可診斷為輕度中毒：a尿氨基乙酰丙酸305molL（4mgL）或458mol24h（6mg24h）；b尿糞卟啉半定量（）；c血紅細(xì)胞游離原卟啉（FEP）231molL（130gdL），或紅細(xì)胞鋅原卟啉（ZPP）208molL（130gdL）。322 經(jīng)診斷性驅(qū)鉛試驗(yàn)，尿鉛386molL（08mgL）或482mol24h（1mg24h）者。33

3、 中度中毒在輕度中毒的基礎(chǔ)上，具有下列一項(xiàng)表現(xiàn)者，可診斷為中度中毒：a腹絞痛；b貧血；c中毒性周?chē)窠?jīng)病。34 重度中毒具有下列一項(xiàng)表現(xiàn)者，可診斷為重度中毒：a鉛麻痹；b鉛腦病。4 治療原則可用金屬絡(luò)合劑如依地酸二鈉鈣、二巰基丁二酸鈉等驅(qū)鉛治療，同時(shí)輔以對(duì)癥療法。鉛吸收者是否需予驅(qū)鉛治療，可根據(jù)具體情況而定。5 勞動(dòng)能力鑒定51 鉛吸收可繼續(xù)原工作，36月復(fù)查一次。52 輕度中毒驅(qū)鉛治療后可恢復(fù)工作，一般不必調(diào)離鉛作業(yè)。53 中度中毒驅(qū)鉛治療后原則上調(diào)離鉛作業(yè)。54 重度中毒必須調(diào)離鉛作業(yè)，并根據(jù)病情給予治療和休息。6 健康檢查的要求鉛作業(yè)工人應(yīng)作就業(yè)前體檢，并每年定期體檢一次。體檢時(shí)需作內(nèi)科

4、檢查、尿鉛或血鉛、尿糞卟啉或尿氨基乙酰丙酸、紅細(xì)胞游離原卟啉或鋅原卟啉測(cè)定。7 職業(yè)禁忌證a明顯貧血；b神經(jīng)系統(tǒng)器質(zhì)性疾??；c明顯的肝、腎疾??；d心血管器質(zhì)性疾??；e妊娠和哺乳期婦女。附錄 A尿中鉛的測(cè)定雙硫腙比色法（補(bǔ)充件）A1 原理在酸性介質(zhì)中，利用硫酸、硝酸、高氯酸的氧化作用，破壞尿中的有機(jī)質(zhì)，使鉛呈離子態(tài)，然后在pH85110與雙硫腙反應(yīng)，生成紅色絡(luò)合物，經(jīng)氯仿萃取后比色定量。A2 儀器分光光度計(jì)。A3 試劑a硫酸（優(yōu)級(jí)純）；b硝酸（優(yōu)級(jí)純）；c高氯酸（優(yōu)級(jí)純）；d11×10(上標(biāo)始)3(上標(biāo)終)molL（004）酚紅指示劑：稱(chēng)取01g酚紅放在小乳缽中，加2滴無(wú)鉛水研磨溶解，

5、再加無(wú)鉛水至250mL；e氯仿：每100mL氯仿中加1mL乙醇；f緩沖液：稱(chēng)取100g檸檬酸溶于70mL無(wú)鉛水中，置冷水浴中，分次加入100mL氨水，邊加邊振搖，冷卻后加入3g無(wú)水亞硫酸鈉，溶解后加氨水至250mL，將此液移至1L分液漏斗中，用透光度60雙硫腙氯仿溶液萃取鉛，至雙硫腙氯仿液保持綠色不變?yōu)橹?。再用適量氯仿洗去殘留的雙硫腙至氯仿層呈無(wú)色透明為止，棄去氯仿層，加500mL氨水，于冰箱內(nèi)保存；g15molL（10）氰化鉀溶液：取10g氰化鉀（優(yōu)級(jí)純），溶于無(wú)鉛水中，并稀釋至100mL；h雙硫腙氯仿溶液。雙硫腙的提純：溶解005g雙硫腙于50mL氯仿中，如有不溶物可過(guò)濾，然后移入250m

6、L分液漏斗中，用1100氨水萃取23次（每次約25mL），此時(shí)雙硫腙轉(zhuǎn)入氨水層中，合并氨水溶液，過(guò)濾后放至分液漏斗中，用鹽酸酸化，使雙硫蹤析出，用氯仿萃取23次，每次約20mL，此時(shí)雙硫腙轉(zhuǎn)入氯仿層，將此濃雙硫腙氯仿溶液用重蒸餾水洗滌氯仿提取液2次，然后放在棕色瓶?jī)?nèi)，于冰箱中保存。取提純的雙硫蹤用氯仿稀釋至透光度為60（于波長(zhǎng)510nm下測(cè)量）；i雙硫腙洗除液：取10mL15molL（10）氰化鉀溶液與30mL氨水混合，用無(wú)鉛水稀釋至500mL；j鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱(chēng)取15984g硝酸鉛（105烘2h），用少量水溶解，移入1L量瓶中，加10mL硝酸，用無(wú)鉛水稀釋至刻度，此溶液濃度為48×1

7、0(上標(biāo)始)3(上標(biāo)終)molL（10mgmL）的鉛，作為貯備液，將此液用199硝酸稀釋100倍，成為48×10(上標(biāo)始)5(上標(biāo)終)molL（10gmL）的鉛溶液，作應(yīng)用液。A4 尿樣分析步驟A41 取50mL尿樣于錐形燒瓶中，同時(shí)另取2個(gè)錐形燒瓶，各加50mL無(wú)鉛水，作為空白對(duì)照，各加3mL硫酸、5mL硝酸，加熱消化至炭化，離火稍冷。A42 加05mL高氯酸，搖勻，加熱使瓶?jī)?nèi)產(chǎn)生大量白色煙霧，繼續(xù)加熱使白色煙霧升至瓶口且溶液為無(wú)色透明，取下放冷。A43 混色法：用40mL無(wú)鉛水分次溶解內(nèi)容物，并轉(zhuǎn)移至125mL分液漏斗中，加2滴酚紅指示劑，搖勻。加緩沖液至溶液呈紅色，再加1mL緩

8、沖液，冷卻后，加1mL15molL（10）氰化鉀溶液，搖勻，加10mL60透光度的雙硫蹤氯仿溶液，振搖100次，待分層后，將氯仿層用脫脂棉過(guò)濾，于波長(zhǎng)510nm下以氯仿為參比液比色。A44 單色法：向混色法所得的雙硫腙鉛氯仿萃取液中加入30mL雙硫腙洗滌液，振搖50次，分層后吸去水層，再加20mL雙硫腙洗滌液，振搖30次，分層后，將氯仿層用脫脂棉過(guò)濾。于波長(zhǎng)510nm下以氯仿為參比液比色。A5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制A51 取0、01、03、05、07、09mL鉛標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液（相當(dāng)于0、1、3、5、7、9g鉛）分別置于150mL錐形燒瓶中，各加50mL無(wú)鉛水。A52 各加3mL硫酸、5mL硝酸，加熱消化

9、至水分蒸盡，離火稍冷。A53 按A42A44操作。A54 以吸光度為縱坐標(biāo)，鉛量為橫坐標(biāo)，繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。A6 計(jì)算根據(jù)測(cè)得樣品吸光度減去試劑空白吸光度，查標(biāo)準(zhǔn)曲線，得樣品中鉛的含量，按式（A1）計(jì)算：A7 說(shuō)明a本法的檢測(cè)下限為00006mg；b本法的回收率為98100；c本法的精密度（以變異系數(shù)表示）為3092（19gPb范圍）；d應(yīng)取新鮮尿樣進(jìn)行測(cè)定，如樣品需要放置，則按50mL尿加30mL硫酸保存；e所用試劑可根據(jù)空白試驗(yàn)結(jié)果，決定是否需要提純，一般試劑空白的吸光度不超過(guò)002；f玻璃儀器使用前需用079molL（5）硝酸浸泡、洗滌，再用無(wú)鉛水沖洗；g雙硫腙易被氧化，日光、高溫、一些金

10、屬離子及氧化劑均能氧化雙硫腙為二苯硫代偕二腙，因此在提純、保存、分析各個(gè)環(huán)節(jié)應(yīng)注意保持雙硫腙的純度和穩(wěn)定性；h酚紅指示劑在酸性溶液中呈橙紅色，中性溶液中呈黃色，堿溶液中（pH85及以上時(shí)）才呈紅色。附錄 B血中鉛的測(cè)定無(wú)焰原子吸收光譜法（補(bǔ)充件）B1 原理血液經(jīng)稀硫酸處理后，隨即導(dǎo)入石墨爐原子化器原子化，并根據(jù)其特征譜線的吸收強(qiáng)度定量。B2 儀器a配有石墨爐的原子吸收分光光度計(jì)；b鉛空心陰極燈；c石墨管原子化器；d微量取樣器；e具塞聚四氟乙烯（塑料）樣品杯（管）；f旋渦混勻器。B3 試劑a鉛標(biāo)準(zhǔn)液：精確稱(chēng)取光譜純金屬鉛10000g溶于少量濃硝酸后，移至1L容量瓶?jī)?nèi)，以超純水稀釋至1L，此液濃度

11、為48×10(上標(biāo)始)3(上標(biāo)終)molL（10mgmL），測(cè)試時(shí)將此液用0024molL（015）硝酸逐級(jí)稀釋成48×10(上標(biāo)始)7(上標(biāo)終)molL（01gmL）和97×10(上標(biāo)始)7(上標(biāo)終)molL（02gmL）的鉛標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液；b硝酸（MOS級(jí)）；c實(shí)驗(yàn)用水：由純水器制成的超純水（18M·cm）或?qū)⒅卣羲?jīng)石英亞沸蒸餾提純；d肝素。B4 血樣分析步驟B41 取20L血樣，置于盛有018mL0024molL（015）硝酸的具塞樣品杯中，充分搖勻使溶血。B42 試劑空白，以0024molL（015）硝酸作為試劑空白。B43 自動(dòng)進(jìn)樣（手動(dòng)進(jìn)樣）1

12、0L注入石墨管中進(jìn)行原子化，測(cè)其原子吸光度，測(cè)得樣品的吸光度減去試劑空白吸光度，查標(biāo)準(zhǔn)曲線，得樣品中鉛的含量，再乘以稀釋倍數(shù)。B5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取新鮮人血（肝素抗凝），用旋渦器充分混勻，在6個(gè)具蓋樣品杯中，分別加入鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液48×10(上標(biāo)始)7(上標(biāo)終)molL（01gmL）000、002、005、010、015mL和鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液97×10(上標(biāo)始)7(上標(biāo)終)molL（02gmL）01mL，用0024molL（015）硝酸使各管體積為018mL，加入正常人血20L，此時(shí)各管相應(yīng)濃度為048×10(上標(biāo)始)7(上標(biāo)終)molL（0100gL），加蓋劇烈振搖，使其

13、溶血，按上述分析步驟進(jìn)行測(cè)定，以不同濃度所測(cè)得的吸光度為縱坐標(biāo)，鉛濃度為橫坐標(biāo)，繪成標(biāo)準(zhǔn)曲線。B6 說(shuō)明a本法的檢測(cè)下限為208×10(上標(biāo)始)9(上標(biāo)終)molL（043gL）稀釋血樣； b本法的回收率為98104；c本法的精密度（以變異系數(shù)表示）為1742（002005gPb范圍）；d使用的玻璃、塑料器皿及注射器等洗凈后，必須在1：1硝酸中浸泡過(guò)夜，用重蒸水淋洗干凈后，最后用超純水至少淋洗三次，烘干包裝備用；e采血房間應(yīng)潔凈，防止環(huán)境中的鉛污染血樣；f采血時(shí)，用048molL（3）硝酸棉球、超純水棉球、酒精棉球依次擦凈被檢者取血部位的皮膚；g儀器工作條件（PE3030型原子吸收分

14、光光度計(jì)，HGA500型石墨爐，AS40自動(dòng)進(jìn)樣器）：波 長(zhǎng) 283.3nm 干 燥 100 50s 10s燈電流 8mA 灰 化 500 30s 10s狹 縫 0.7nm 原子化 2200 0s 4s石墨容器 熱解涂層石墨管 凈 化 2600 1s 4s能 量 59 載氣流量為300mLmin原子化時(shí)停氣 附錄 C血中原卟啉的測(cè)定熒光光度法（補(bǔ)充件）C1 原理原卟啉（FEP）為一熒光物質(zhì)。血樣經(jīng)生理鹽水稀釋后，用乙酸乙酯和冰乙酸混和液破壞血中紅細(xì)胞，使原卟啉溶解于混和液中，再以稀鹽酸萃取原卟啉，在激發(fā)光波長(zhǎng)403nm時(shí)，發(fā)射光在605nm波長(zhǎng)處顯示其熒光譜峰，根據(jù)熒光強(qiáng)度定量。C2 儀器a離

15、心機(jī)：801型；b旋渦混合器：XW80型；c電磁低壓吸引器：CX-1型；d具塞試管；e熒光分光光度計(jì)或930型熒光光度計(jì)。C3 試劑a肝素抗凝劑：取一支12500u肝素抗凝劑，用0154molL（09）氯化鈉溶液稀釋至25mL（500umL）；b50gL（5）硅藻土生理鹽水懸浮液：稱(chēng)取5g硅藻土（kieslgubr 化學(xué)純），以生理鹽水配制成100mL；c41乙酸乙酯冰乙酸混和液；d05molL鹽酸；e原卟啉標(biāo)準(zhǔn)貯備液：用十萬(wàn)分之一天平精確稱(chēng)取000100g原卟啉加入125mL鹽酸溶解，移入100mL容量瓶中，用去離子水稀釋至刻度，此溶液濃度為18molL（100gmL）原卟啉；f原卟啉標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)

16、用液：取050mL貯備液置于50mL容量瓶中，用41乙酸乙酯冰乙酸混合液稀釋至刻度，此溶液為018molL（01gmL）的原卟啉。C4 血樣分析步驟C41 取20L耳垂或手指血置于盛有01mL肝素抗凝劑溶液的小試管中，加入2滴硅藻土生理鹽水懸浮液，混勻，加入40mL乙酸乙酯冰乙酸混和液。C42 另取2個(gè)小試管，一為空白管，一為標(biāo)準(zhǔn)管，各加2滴硅藻土生理鹽水懸浮液；在空白管中加入40mL乙酸乙酯冰乙酸混合液，標(biāo)準(zhǔn)管中加入05mL原卟啉標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液（含原卟啉005g）再加35mL乙酸乙酯冰乙酸混和液。C43 將溶液混勻后，離心（3000rmin）15min，將上清液分別移入25mL具塞試管中，各加4

17、0mL 05molL鹽酸，用旋渦混合器旋渦2min或手振搖5min，待分層后，棄去上層有機(jī)溶劑。C44 將下層稀鹽酸溶液在30min內(nèi)，分別用比色皿，在激發(fā)光波長(zhǎng)403nm（狹縫10nm）、發(fā)射波長(zhǎng)605nm（狹縫5nm）處，靈敏度3+0，測(cè)其熒光強(qiáng)度。C5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取6支離心管，向各管中加入2滴硅藻土生理鹽水混懸液，然后配制表C1中標(biāo)準(zhǔn)系列：表C1將溶液混勻后，按上述操作步驟C43C44進(jìn)行操作，以峰高（扣除空白的峰高）為縱坐標(biāo)，原葉啉量為橫坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。注：如用930型熒光光度計(jì)測(cè)定，則應(yīng)選用第一濾色片波長(zhǎng)420nm（581G型光電比色計(jì)上42號(hào)濾色片）；第二濾色片波

18、長(zhǎng)550nm；機(jī)械調(diào)零；調(diào)節(jié)100開(kāi)關(guān)至最大；靈敏度開(kāi)關(guān)至5檔時(shí)，測(cè)定熒光強(qiáng)度。C6 計(jì)算在標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)，根據(jù)樣品測(cè)得的峰高（cm或格數(shù)）按式（C1）計(jì)算：血中原卟啉（FEP）的含量molL（g100mL血）C7 說(shuō)明C71 本法的檢測(cè)下限為0005g。C72 本法的回收率為90100。C73 本法的精密度（以變異系數(shù)表示）為：a023106（00101g）熒光分光光度計(jì)。b024833（00101g）930型熒光計(jì)。C74 樣品收集和保存的要求：a采血時(shí)，血樣中要加入肝素抗凝劑，防止血液凝固；b血樣要冷藏保存，一般可保存3天。C75 操作中的有關(guān)注意事項(xiàng)：a操作中使用的玻璃器皿，要用

19、清潔液浸泡，不能用肥皂粉清洗；b各種試劑一定要用去離子水配制。附錄 D血中鋅原卟啉的測(cè)定儀器法（補(bǔ)充件）D1 原理鋅原卟啉（ZPP）具有特征性的熒光光譜，在激發(fā)光波長(zhǎng)420nm時(shí)，發(fā)射光波長(zhǎng)為594nm，用表面熒光法測(cè)量其熒光強(qiáng)度進(jìn)行定量。D2 儀器a血液熒光計(jì)（AVIV Hematofluorometer）；b蓋玻片24mm×24mm；c血紅蛋白吸管。D3 血樣分析步驟將ZPP標(biāo)準(zhǔn)片置于儀器的測(cè)量架上進(jìn)行測(cè)定，如顯示數(shù)據(jù)與標(biāo)準(zhǔn)片一致，說(shuō)明儀器工作正常。換上清潔的蓋玻片，先測(cè)空白時(shí)的讀數(shù)，然后加一滴血（約1020L），使鋪滿測(cè)量區(qū)測(cè)樣品讀數(shù)。 D4 計(jì)算如儀器測(cè)定值用ggHb表示，則

20、需同時(shí)測(cè)定血紅蛋白，并用式（D1）、（D2）計(jì)算：ZPPggHb樣品讀數(shù)空白讀數(shù)（D1）ZPPmolL（gdL）ZPPggHb×HbgL（g）（D2）式中：HbgL用氰化高鐵血紅蛋白法測(cè)定的1000mL血中血紅蛋白的克數(shù)。D5 注意事項(xiàng)a所用蓋玻片必須很清潔，如手指觸及測(cè)量區(qū)即能引起結(jié)果偏高；b血液標(biāo)本如未鋪滿測(cè)量區(qū)，或內(nèi)有氣泡，都能影響測(cè)定結(jié)果；c缺鐵性貧血患者鋅原卟啉亦可能增高；d本儀器宜在室溫1825下操作。附錄 E尿中氨基乙酰丙酸的測(cè)定乙酰乙酯萃取比色法（補(bǔ)充件）E1 原理在pH為46及溫度100的條件下，尿中氨基乙酰丙酸（ALA）與乙酰乙酸乙酯縮合生成吡咯化合物。此化合物可

21、被乙酸乙酯萃取，并與改良顯色劑（對(duì)二甲氨基苯甲醛）作用生成紅色化合物，根據(jù)顏色深淺進(jìn)行比色定量。E2 儀器a具塞比色管（10mL），具塞離心管（10mL）；b離心機(jī)；c水浴鍋；d分光光度計(jì)。E3 試劑a乙酰乙酸乙酯；b乙酸乙酯；c乙酸鹽緩沖液（pH46）：于700mL水中加入57mL冰乙酸、82g無(wú)水乙酸鈉，溶解后加水1000mL；d對(duì)二甲氨基苯甲醛改良顯色劑：于50mL量筒中，依次加入30mL冰乙酸、1g對(duì)二甲氨基苯甲醛、5mL116molL（70）高氯酸（原裝）、5mL水，溶解后，用冰乙酸稀釋至50mL，混勻，轉(zhuǎn)入試劑瓶中，貯于冰箱中；eALA標(biāo)準(zhǔn)液貯備液：準(zhǔn)確稱(chēng)取氨基乙酰丙酸鹽酸鹽（-A

22、LA·HCl）128mg，用水溶解，并稀釋至100mL。此液濃度為7628molL（1mL100g）ALA，貯于冰箱中可保存兩個(gè)月以上。應(yīng)用液：取貯備液10mL于100mL容量瓶中，并稀釋至刻度，此液濃度約等于7628molL（1mL10g）ALA。E4 尿樣分析步驟E41 分別量取2mL尿樣于兩支10mL具塞比色管內(nèi)，各加入2mL乙酸緩沖液，混勻，其一為樣品管，另一為尿樣空白管。向樣品管中加入04mL乙酰乙酸乙酯，向尿樣空白管中補(bǔ)加04mL乙酸緩沖液，分別混勻，同時(shí)置沸水浴中加熱10min，取出冷卻至室溫。E42 以下步驟按標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制E53E55進(jìn)行。E5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制E51

23、 取10mL具塞離心管6支，按表E1配制標(biāo)準(zhǔn)色列：表E1E52 各加2mL乙酸緩沖液，04mL乙酰乙酸乙酯，混勻，于沸水浴中加熱10min，取出冷至室溫。E53 各加4mL乙酸乙酯，加塞振搖50次，離心5min，取出靜置分層。E54 各取2mL乙酸乙酯萃取液，于另外6支10mL具塞比色管中，各加改良顯色劑2mL，加塞振搖，靜置10min。E55 用比色皿在波長(zhǎng)553nm（或綠色濾光片）下，以乙酸乙酯作參比，測(cè)得各標(biāo)準(zhǔn)管吸光度。E56 以吸光度（扣除空白吸光度）為縱坐標(biāo)，ALA量為橫坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。E6 計(jì)算樣品管吸光度減去尿空白管吸光度，查標(biāo)準(zhǔn)曲線得樣品管中ALA含量mol（g）

24、。尿中ALA的含量mo1L（mgL）E7 說(shuō)明a乙酸乙酯、乙酰乙酸乙酯最好為近期產(chǎn)品。改良顯色劑宜新鮮配制；b加入顯色劑后，應(yīng)靜置10min，比色應(yīng)在30min內(nèi)完成；c尿液易腐敗，可導(dǎo)致pH升高，影響測(cè)定結(jié)果。如不能及時(shí)測(cè)定，應(yīng)將尿液保存在冰箱中；d其他與對(duì)二甲氨基苯甲醛顯色劑反應(yīng)的陽(yáng)性物質(zhì)，由于不被乙酸乙酯萃取，故不干擾測(cè)定；e測(cè)定尿樣時(shí)，可同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定（取2mL標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液）。計(jì)算：式中：U測(cè)定管吸光度；O空白管吸光度；S標(biāo)準(zhǔn)管吸光度。附錄 F尿中氨基乙酰丙酸的測(cè)定氯仿萃取比色法（補(bǔ)充件）F1 原理尿中ALA與乙酰乙酸乙酯在pH68及100條件下，作用生成吡咯衍生物，與對(duì)二甲氨基苯甲醛反

25、應(yīng)生成紅色化合物，用氯仿提取，比色定量（尿中干擾物質(zhì)在弱酸性條件下先用正丁醇抽取去除）。F2 儀器721分光光度計(jì)。F3 試劑a35molL（20）乙酸溶液（VV）；b正丁醇（分析純）；c氯仿（分析純）；d0.5molL（M）磷酸鹽緩沖液（pH68）：05molL（M）Na(下標(biāo)始)2(下標(biāo)終)HPO(下標(biāo)始)4(下標(biāo)終)溶液：稱(chēng)取Na(下標(biāo)始)2(下標(biāo)終)HPO(下標(biāo)始)4(下標(biāo)終)·12H(下標(biāo)始)2(下標(biāo)終)O8954g，用蒸餾水稀釋至500mL。05molL（M）NaH(下標(biāo)始)2(下標(biāo)終)PO(下標(biāo)始)4(下標(biāo)終)溶液：稱(chēng)取NaH(下標(biāo)始)2(下標(biāo)終)PO4·2H

26、(下標(biāo)始)2(下標(biāo)終)O3001g，用蒸餾水稀釋至500mL。以上兩種溶液等量混合即成pH68磷酸鹽緩沖液；e02molL（M）二氯化汞液：稱(chēng)取二氯化汞54304g，用蒸餾水稀釋至100mL置棕色瓶，保存在37水溫箱中；f顯色劑：稱(chēng)取對(duì)二甲氨基苯甲醛4g，加入冰乙酸128mL 116molL（70）濃高氯酸40mL，02molL（M）二氯化汞液10mL，濃鹽酸40mL，混勻，置棕色瓶，冰箱備用；g乙酰乙酸乙酯磷酸鹽緩沖液：乙酰乙酸乙酯1份加入19份磷酸鹽緩沖液即成（臨用時(shí)需振搖）；hALA貯存標(biāo)準(zhǔn)液7628molL（100gmL）：準(zhǔn)確稱(chēng)取氨基乙酰丙酸鹽酸鹽（C(下標(biāo)始)5(下標(biāo)終)H(下標(biāo)始

27、)9(下標(biāo)終)NO(下標(biāo)始)3(下標(biāo)終)·HC1）128mg置于100mL容量瓶中，用蒸餾水溶解并稀釋至刻度；iALA應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)液1525molL（20gmL）：精確吸取ALA貯存標(biāo)準(zhǔn)液20mL，置于100mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度。F4 尿樣分析步驟F41 提取：于25mL具塞試管中加入尿液2mL，35molL（20）乙酸溶液2mL及正丁醇8mL，緊塞，用力振搖30s，靜置分層，另取具塞試管2只，作為空白管和測(cè)定管。各管加入經(jīng)正丁醇抽提后的下層尿液05mL。F42 顯色：在測(cè)定管中加入15mL乙酰乙酸乙酯緩沖液，空白管中加入pH68磷酸鹽緩沖液15mL，分別混勻后置沸水浴中加熱

28、10min，取出用冷水迅速冷卻后，各管中加入2mL顯色劑，混勻，放置10min，加入氯仿8mL，緊塞振搖20次，分層后用水泵或毛細(xì)管吸棄上層水液，加入無(wú)水硫酸鈉約1g，振搖除去水分，在1030min內(nèi)，用光徑（1cm）比色杯于556nm處比色，以空白管校正吸光度至零點(diǎn)，讀取吸光度，查閱標(biāo)準(zhǔn)曲線。F5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取具塞試管6只，分別標(biāo)號(hào)為1、2、3、4、5、6，然后按表F1進(jìn)行操作：表F1加35molL（20）乙酸溶液2mL及正丁醇8mL，緊塞，用力振搖30s，靜置分層，吸取經(jīng)正丁醇抽提后的下層液05mL于另外6只具塞試管中，然后按尿樣分析法中顯色步驟進(jìn)行操作，以1號(hào)管作空白管，讀取各管吸光

29、度讀數(shù)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。F6 計(jì)算測(cè)定時(shí)，尿液、乙酸和正丁醇混勻抽提后，下層液05mL仍相當(dāng)于原來(lái)的尿標(biāo)本05mL。尿ALAmolL（mgL）05mL尿內(nèi)ALA之mol（g）數(shù)（標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出）×1/0.505mL尿中ALA之mol（g）數(shù)×2（F1）F7 說(shuō)明a當(dāng)尿中ALA含量在7628mol（10g）范圍內(nèi)，呈直線關(guān)系，當(dāng)其含量高時(shí)，宜稀釋后進(jìn)行測(cè)定；b尿提取液須加入管之底部，使之與乙酰乙酸乙酯充分混勻，不然結(jié)果偏低；c顯色劑置于冰箱內(nèi)；d空白管在一般情況下可省去；e尿樣宜新鮮，腐敗尿不能用；f正常人尿中含有少量ALA。注：上海市楊浦區(qū)中心醫(yī)院1978年測(cè)定101例正常人（一次尿），其結(jié)果ALA為1778±527molL（297±088mgL）。附錄 G尿中糞卟啉（棕色素）的半定量測(cè)定（補(bǔ)充件）G1 原理尿液中糞卟啉原經(jīng)過(guò)氧化氫氧