流式細胞術在腫瘤學中的應用

1、整理ppt流式細胞術在腫瘤學中的應用流式細胞術在腫瘤學中的應用整理ppt內(nèi)容內(nèi)容 流式細胞儀概念、原理及應用流式細胞儀概念、原理及應用 流式細胞術優(yōu)勢流式細胞術優(yōu)勢 流式細胞術在腫瘤學中的應用流式細胞術在腫瘤學中的應用整理ppt流式細胞術（流式細胞術（Flow CytometryFlow Cytometry）是利用流式細胞儀檢測細是利用流式細胞儀檢測細胞或其它顆粒性物質(zhì)的物理、化學特性。同時利用熒光染料胞或其它顆粒性物質(zhì)的物理、化學特性。同時利用熒光染料, ,激光技術激光技術, ,單抗技術以及計算機技術的發(fā)展單抗技術以及計算機技術的發(fā)展, ,大大提高了檢測速大大提高了檢測速度與統(tǒng)計精確性度與統(tǒng)

2、計精確性, ,而且從同一個細胞中可以同時測得多種參數(shù)而且從同一個細胞中可以同時測得多種參數(shù), ,為生物醫(yī)學與臨床檢驗學發(fā)展提供了一個全新的視角和強有為生物醫(yī)學與臨床檢驗學發(fā)展提供了一個全新的視角和強有力的手段。力的手段。 流式細胞術流式細胞術整理ppt流式細胞儀檢測流程流式細胞儀檢測流程整理ppt流式細胞術優(yōu)勢（分析型）流式細胞術優(yōu)勢（分析型）u高速測定細胞，大樣本計數(shù)高速測定細胞，大樣本計數(shù)u檢測稀有細胞檢測稀有細胞u多參數(shù)分析多參數(shù)分析整理pptFC500 FC500 流式細胞儀流式細胞儀整理ppt050001000015000Quantitative cell fluorescenceL

3、eukemia LymphomaDendritic cellsIntracellular signal transductionIntracellular receptorsCell viabilityCell adhesionAutoimmuneStem cellOrgan transplantationCell signalingImmune functionApoptosisHIVActivationCytokinesCell DNACell surface receptors流式細胞術的應用流式細胞術的應用檢測特性：大小、顆粒度檢測特性：大小、顆粒度 、細胞受體、細胞受體/ /分子、核

4、酸分子、核酸 (DNA/RNA)(DNA/RNA)、蛋白、蛋白整理ppt腫瘤學中的應用腫瘤學中的應用v腫瘤免疫腫瘤免疫v腫瘤細胞周期和凋亡腫瘤細胞周期和凋亡v腫瘤干細胞的研究腫瘤干細胞的研究v血液中循環(huán)腫瘤細胞的研究血液中循環(huán)腫瘤細胞的研究整理ppt 天然免疫天然免疫中性粒細胞中性粒細胞嗜酸性細胞嗜酸性細胞嗜堿性細胞嗜堿性細胞單核細胞單核細胞 / / 巨噬細胞巨噬細胞樹突細胞樹突細胞: mDC - pDC: mDC - pDCNK NK 細胞細胞NKT NKT 細胞細胞 T 淋巴細胞CD5+ B CD5+ B 細胞細胞獲得性免疫獲得性免疫B B細胞細胞輔助性輔助性T T細胞細胞Th1Th1Th

5、2Th2細胞毒細胞毒T T細胞細胞調(diào)節(jié)性調(diào)節(jié)性T T細胞細胞 整理ppt淋巴細胞免疫分型淋巴細胞免疫分型整理ppt腫瘤細胞免疫特點腫瘤細胞免疫特點CD3CD4CD8CD4/CD8NKCIK正常正常正常正常正常正常正常正常正常正常 正常正常正常正常 正常正常 正常正常 正常正常 正常正常整理pptTh1Th2Th1Th2細胞因子分泌細胞測定細胞因子分泌細胞測定Th1Th1細胞：細胞：介導細胞免疫、細胞毒性介導細胞免疫、細胞毒性T T細胞的細胞的生長和活生長和活化、巨噬細胞的活化、介導遲發(fā)型過敏反應。其功化、巨噬細胞的活化、介導遲發(fā)型過敏反應。其功能亢進將導致炎癥慢性遷延，器官特異性自身免疫能亢進

6、將導致炎癥慢性遷延，器官特異性自身免疫病，急性排異反應和接觸性皮炎等的發(fā)病和免疫病病，急性排異反應和接觸性皮炎等的發(fā)病和免疫病理損傷。理損傷。Th2Th2細胞細胞 ：介導體液免疫，促進介導體液免疫，促進B B細胞的生長、活化細胞的生長、活化和分化，是和分化，是IgG1IgG1和和IgEIgE類抗體的轉(zhuǎn)換因子，其功能類抗體的轉(zhuǎn)換因子，其功能亢進將導致特異性過敏反應，參與高亢進將導致特異性過敏反應，參與高IgEIgE綜合癥和綜合癥和嗜酸性粒細胞增多癥。嗜酸性粒細胞增多癥。整理pptTh1/Th2Th1/Th2漂移與腫瘤免疫漂移與腫瘤免疫腫瘤可使腫瘤可使Th1/Th2Th1/Th2平衡向平衡向Th2

7、Th2偏移偏移, ,而而Th1/Th2Th1/Th2偏移又偏移又會促進腫瘤的發(fā)展會促進腫瘤的發(fā)展, ,故探討故探討Th1/Th2Th1/Th2功能狀況以判斷功能狀況以判斷腫瘤患者的免疫狀態(tài)可為腫瘤生物治療提供有效的腫瘤患者的免疫狀態(tài)可為腫瘤生物治療提供有效的理論依據(jù)。理論依據(jù)。整理pptCD4+CD25+CD4+CD25+調(diào)節(jié)性調(diào)節(jié)性T T細胞細胞 調(diào)節(jié)性調(diào)節(jié)性T T細胞具有免疫抑制功能，在多種細胞具有免疫抑制功能，在多種免疫性疾病中起重要的調(diào)節(jié)作用，成為近年免疫性疾病中起重要的調(diào)節(jié)作用，成為近年來免疫學領域研究的重要內(nèi)容。來免疫學領域研究的重要內(nèi)容。 整理ppt 許多研究表明：在實體腫瘤和血

8、液惡性腫瘤患許多研究表明：在實體腫瘤和血液惡性腫瘤患者中者中TregTreg數(shù)目增多。數(shù)目增多。 在乳腺癌、卵巢癌、肺癌以及肝癌等多種實體在乳腺癌、卵巢癌、肺癌以及肝癌等多種實體腫瘤患者外周血和腫瘤局部微環(huán)境中腫瘤患者外周血和腫瘤局部微環(huán)境中,Treg,Treg比例增高比例增高, ,且數(shù)目與患者腫瘤進展程度和預后、生存率呈負相且數(shù)目與患者腫瘤進展程度和預后、生存率呈負相關。關。 血液惡性腫瘤患者中血液惡性腫瘤患者中TregTreg數(shù)目呈腫瘤發(fā)展階段數(shù)目呈腫瘤發(fā)展階段相關性增長。但是相關性增長。但是,Treg,Treg增高的機制尚不清楚。增高的機制尚不清楚。 去除去除TregTreg或封閉其抑制

9、功能，可以增強抗腫瘤或封閉其抑制功能，可以增強抗腫瘤免疫反應。免疫反應。整理ppt 化療作為一種重要的治療腫瘤的方法化療作為一種重要的治療腫瘤的方法, ,對腫瘤患對腫瘤患者外周血中的者外周血中的TregTreg數(shù)目可產(chǎn)生一定影響。數(shù)目可產(chǎn)生一定影響。 化療藥物可能通過抑制腫瘤微環(huán)境中血管生成化療藥物可能通過抑制腫瘤微環(huán)境中血管生成, ,促進促進TregTreg凋亡凋亡, ,從而起到有效控制腫瘤的作用。從而起到有效控制腫瘤的作用。 但也有報道證明腫瘤患者接受化療后但也有報道證明腫瘤患者接受化療后, ,外周血中外周血中TregTreg數(shù)目增多。數(shù)目增多。整理ppt 化療究竟對化療究竟對TregTr

10、eg會產(chǎn)生怎樣的影響會產(chǎn)生怎樣的影響, ,目前目前尚無定論尚無定論, ,有待于進一步研究。有待于進一步研究。 因此因此,Treg,Treg在腫瘤治療方面的應用成為研在腫瘤治療方面的應用成為研究的熱點。如何清除或逆轉(zhuǎn)究的熱點。如何清除或逆轉(zhuǎn)TregTreg的抑制作用的抑制作用是腫瘤免疫治療的一個關鍵問題。是腫瘤免疫治療的一個關鍵問題。整理ppt樹突狀細胞樹突狀細胞 (DC)(DC) DCDC控制體內(nèi)免疫和耐受的平衡控制體內(nèi)免疫和耐受的平衡 控制控制T,B T,B 細胞對可溶性抗原的反應細胞對可溶性抗原的反應 影響產(chǎn)生免疫球蛋白的分類影響產(chǎn)生免疫球蛋白的分類 DC DC 亞群亞群 分為分為MDC

11、MDC 和和PDC PDC MDCMDC誘導免疫應答誘導免疫應答 PDCPDC誘導免疫耐受誘導免疫耐受整理ppt樹突狀細胞流式分析樹突狀細胞流式分析陰性表達抗原設門陰性表達抗原設門Lin (CD3,14,19,20,56)/HLADRLin (CD3,14,19,20,56)/HLADR組合組合 DC: LinDC: Lin-/-/HLADR+HLADR+DCDC亞群分析亞群分析 骨髓骨髓DC:DC: CD11c CD11c+ + 外周血外周血DCDC: CD123: CD123+ + (IL3Ra) (IL3Ra)陽性表達抗原設門陽性表達抗原設門CD85k (ILT3) CD85k (ILT

12、3) 陽性設門陽性設門 僅在單核巨噬細胞及僅在單核巨噬細胞及DCDC細胞表達細胞表達 比比HLADRHLADR表達更具特異性表達更具特異性 避免陰性設門避免陰性設門Differentiation of DC subsets:Differentiation of DC subsets: 外周血外周血DCDC: CD123: CD123+ + (IL3Ra) (IL3Ra) 骨髓骨髓DCDC: CD33: CD33+ +整理pptILT3-PEILT3-PECD14+CD16-FITCCD33-PC5CD33-PC51234骨髓骨髓DC : CD14 CD16/CD85K（ILT3）/CD33整理

13、pptILT3-PEILT3-PECD14+CD16-FITCCD123-PC5CD123-PC5外周外周血血DC: CD14 CD16/ CD85K（ILT3） /CD123整理ppt生物免疫治療生物免疫治療 CIKCIK細胞細胞( (cytokine-induced killer)cytokine-induced killer)是一群以是一群以CDCD3 3+ +T T細胞為細胞為主的異質(zhì)性細胞群體，包括主的異質(zhì)性細胞群體，包括CDCD3 3+ +CDCD5656- -、CDCD3 3- -CDCD5656+ +及及CDCD3 3+ +CDCD5656+ +三種亞群三種亞群, , 主要效應

14、細胞為主要效應細胞為CDCD3 3+ +CDCD5656+ +細胞。細胞。 CIK CIK細胞來源于外周血中的細胞來源于外周血中的CDCD4 4- -CDCD8 8+ +及及CDCD4 4- -CDCD8 8- -T T細細胞。因其同時表達胞。因其同時表達CDCD3 3和和CDCD5656兩種膜蛋白分子，故兼有兩種膜蛋白分子，故兼有T T淋巴細胞強大的抗瘤活性和淋巴細胞強大的抗瘤活性和NKNK細胞非細胞非MHCMHC限制性殺瘤特限制性殺瘤特點，是目前所知殺傷活性最強的一種免疫效應細胞。點，是目前所知殺傷活性最強的一種免疫效應細胞。整理pptCIKCIK細胞治療過程的評價細胞治療過程的評價治療前

15、病人免治療前病人免疫狀況評價疫狀況評價T亞群、亞群、NK、CIK、細胞、細胞因子因子是否適合做、能否能是否適合做、能否能培養(yǎng)、值得做培養(yǎng)、值得做CIK采集MNCMNC數(shù)目、純度、數(shù)目、純度、 T亞群、亞群、NK、CIK數(shù)目及比例數(shù)目及比例是否達到培養(yǎng)要求、是否達到培養(yǎng)要求、調(diào)節(jié)細胞數(shù)調(diào)節(jié)細胞數(shù)MNC數(shù)目、數(shù)目、 T亞群、亞群、NK、CIK數(shù)目及比例、數(shù)目及比例、CD3、CD8活化狀況活化狀況培養(yǎng)培養(yǎng)是否達標、回輸培養(yǎng)是否達標、回輸時機時機回輸后T亞群、亞群、NK、CIK、細胞、細胞因子因子療效評價、監(jiān)測、下療效評價、監(jiān)測、下次治療的時機次治療的時機CIKCIK治療程序治療程序FCMFCM檢測項

16、目檢測項目意義意義整理pptCIKCIK治療前患者的免疫功能評價治療前患者的免疫功能評價評價的項目評價的項目免疫功能六項：免疫功能六項：CD3CD3、CD4CD4、CD8CD8、CD4/CD8CD4/CD8、 NKNK、 CIK CIKTh1/Th2Th1/Th2細胞因子細胞因子 整理pptFCMFCM檢測的方法檢測的方法 免疫功能六項免疫功能六項 試劑：試劑：CD45/CD4/CD8/CD3CD45/CD4/CD8/CD3、CD3/CD56/CD45CD3/CD56/CD45 標本類型：外周抗凝血標本類型：外周抗凝血 評價的指標：評價的指標：CD3%CD3%、CD4%CD4%、CD8%CD8

17、%、NK%NK%、CIK%CIK%（也可以做絕對計數(shù)）（也可以做絕對計數(shù)）整理ppt評價的意義評價的意義1 1、CIKCIK治療的適應癥：治療的適應癥： 除外除外T T細胞相關腫瘤、有可見包塊細胞相關腫瘤、有可見包塊2 2、是否適合做、是否適合做3 3、能否培養(yǎng)、能否培養(yǎng)4 4、值不值得做、值不值得做整理ppt腫瘤細胞免疫特點腫瘤細胞免疫特點CD3CD4CD8CD4/CD8NKCIK正常正常正常正常正常正常正常正常正常正常 正常正常正常正常 正常正常 正常正常 正常正常 正常正常整理ppt采集物評價（培養(yǎng)體系）采集物評價（培養(yǎng)體系）評價的項目評價的項目 MNCMNC數(shù)目、純度、數(shù)目、純度、 T T亞群、亞群、NKNK、CIKCIK數(shù)目及比例數(shù)目及比例FCMFCM方法評價方法評價評價的意義評價的意義 是否達到培養(yǎng)要求、調(diào)節(jié)細胞數(shù)是否達到培養(yǎng)要求、調(diào)節(jié)細胞數(shù)整理ppt培養(yǎng)中的監(jiān)測培養(yǎng)中的監(jiān)測評價的項目評價的項目1. MNC1. MNC數(shù)目、數(shù)目、 T T亞群、亞群、NKNK、CIKCIK數(shù)目及比例、數(shù)目及比例、CD3CD3、CD8CD8活化狀況活化狀況2. 2. 培養(yǎng)體系中的細胞因子水平培養(yǎng)體系中的細胞因子水平3. 3.CIKCIK細胞質(zhì)量：壞死、凋亡狀況細胞質(zhì)量：壞死