人類性染色質(zhì)小體的制備和觀察

1、實(shí)驗(yàn)二人類性染色質(zhì)小體人類性染色質(zhì)小體（巴氏小體）（巴氏小體）的制備與觀察的制備與觀察一、目的一、目的l1，掌握人類，掌握人類x小體（巴氏小體）玻片標(biāo)本小體（巴氏小體）玻片標(biāo)本制作方法。制作方法。l2，觀察識(shí)別巴氏小體形態(tài)特征及所在部位，觀察識(shí)別巴氏小體形態(tài)特征及所在部位，鑒定個(gè)體的性別。鑒定個(gè)體的性別。二、原理二、原理l巴氏小體又稱巴氏小體又稱X小體：正常女性，位于間期細(xì)胞小體：正常女性，位于間期細(xì)胞核中，緊貼核膜內(nèi)緣，大小約核中，緊貼核膜內(nèi)緣，大小約11.5 um，呈現(xiàn)，呈現(xiàn)三角或橢圓形小體，數(shù)量為三角或橢圓形小體，數(shù)量為x染色體數(shù)減一。巴染色體數(shù)減一。巴氏小體是由于女性兩個(gè)氏小體是由于女

2、性兩個(gè)X染色體中的一個(gè)失活形染色體中的一個(gè)失活形成的。成的。l具有兩個(gè)（或以上）具有兩個(gè)（或以上）X染色體的細(xì)胞中，不活化染色體的細(xì)胞中，不活化的的X染色體所濃縮形成的緊密結(jié)構(gòu)。染色體所濃縮形成的緊密結(jié)構(gòu)。l它會(huì)依附在細(xì)胞核邊緣的核膜內(nèi)側(cè)，雖然此染色它會(huì)依附在細(xì)胞核邊緣的核膜內(nèi)側(cè)，雖然此染色體上的小部份區(qū)域能保持著活躍的狀態(tài)，但大多體上的小部份區(qū)域能保持著活躍的狀態(tài)，但大多數(shù)的基因都是不會(huì)表現(xiàn)的。只有位于性腺之細(xì)胞數(shù)的基因都是不會(huì)表現(xiàn)的。只有位于性腺之細(xì)胞內(nèi)的巴爾氏體在進(jìn)行減數(shù)分裂時(shí)會(huì)再度活化。內(nèi)的巴爾氏體在進(jìn)行減數(shù)分裂時(shí)會(huì)再度活化。lLyon的劑量補(bǔ)償學(xué)說認(rèn)為：女性有兩個(gè)的劑量補(bǔ)償學(xué)說認(rèn)為：

3、女性有兩個(gè)X染色體，染色體，但所表達(dá)的絕大部分遺傳物質(zhì)與只有但所表達(dá)的絕大部分遺傳物質(zhì)與只有1個(gè)個(gè)X染色體染色體的男性是一樣多的。的男性是一樣多的。l這是因?yàn)榕缘倪@是因?yàn)榕缘腦染色體中只有染色體中只有1個(gè)保持活性，而個(gè)保持活性，而另一個(gè)是晚復(fù)制的，沒有活性。該失活的染色體另一個(gè)是晚復(fù)制的，沒有活性。該失活的染色體在形態(tài)學(xué)上呈異染色體，即在形態(tài)學(xué)上呈異染色體，即DNA螺旋壓的很緊，螺旋壓的很緊，染色深而致密，稱之為巴氏小體。染色深而致密，稱之為巴氏小體。三、實(shí)驗(yàn)材料三、實(shí)驗(yàn)材料l口腔粘膜細(xì)胞，毛根鞘細(xì)胞口腔粘膜細(xì)胞，毛根鞘細(xì)胞，顯微鏡，載顯微鏡，載玻片，蓋玻片，牙簽，吸管，固定液（玻片，蓋玻

4、片，牙簽，吸管，固定液（乙乙醇醇:冰醋酸冰醋酸3:1），），乙醇，二甲苯，乙醇，二甲苯，卡寶品卡寶品紅染液紅染液四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟l1）取材）取材l口腔粘膜細(xì)胞：受檢者清水漱口數(shù)次，用口腔粘膜細(xì)胞：受檢者清水漱口數(shù)次，用潔凈牙簽從女性口腔兩側(cè)刮取粘膜，原位潔凈牙簽從女性口腔兩側(cè)刮取粘膜，原位刮刮23次，第次，第1次舍去，第次舍去，第2，3次分別涂于次分別涂于干凈載玻片上。干凈載玻片上。l發(fā)根細(xì)胞：拔取女性帶有毛囊的頭發(fā)（約發(fā)根細(xì)胞：拔取女性帶有毛囊的頭發(fā)（約2cm），置于載玻片上。），置于載玻片上。l2）固定）固定l口腔粘膜細(xì)胞加入新配置的固定液（口腔粘膜細(xì)胞加入新配置的固定液（95%乙

5、醇乙醇:冰醋酸冰醋酸3:1），固定），固定30min以上，空以上，空氣干燥。氣干燥。l2）固定）固定l毛囊細(xì)胞毛囊細(xì)胞-拔取一根毛根比較大的毛發(fā)，在一張干拔取一根毛根比較大的毛發(fā)，在一張干凈的載玻片中央滴一滴凈的載玻片中央滴一滴45%的醋酸，靜置約的醋酸，靜置約5分鐘，分鐘，待毛根稍軟后，待毛根稍軟后，用鑷子尖把外層毛囊的組織細(xì)胞用鑷子尖把外層毛囊的組織細(xì)胞輕輕刮下，棄去毛干。將細(xì)胞用解剖針在載玻片輕輕刮下，棄去毛干。將細(xì)胞用解剖針在載玻片上均勻攤平，并在空氣中晾干上均勻攤平，并在空氣中晾干。l實(shí)驗(yàn)改進(jìn)意見：實(shí)驗(yàn)改進(jìn)意見：拿起上述發(fā)根的梢部，將其上毛拿起上述發(fā)根的梢部，將其上毛囊細(xì)胞輕輕蹭于另

6、一干凈載片上即可達(dá)到轉(zhuǎn)移的囊細(xì)胞輕輕蹭于另一干凈載片上即可達(dá)到轉(zhuǎn)移的目的。目的。（若用刀片或鑷子將毛囊細(xì)胞刮下，可造（若用刀片或鑷子將毛囊細(xì)胞刮下，可造成細(xì)胞的堆積，同樣會(huì)出現(xiàn)多層細(xì)胞的現(xiàn)象。成細(xì)胞的堆積，同樣會(huì)出現(xiàn)多層細(xì)胞的現(xiàn)象。1根發(fā)根的毛囊細(xì)胞可以轉(zhuǎn)移到根發(fā)根的毛囊細(xì)胞可以轉(zhuǎn)移到3-4張載片上，以達(dá)張載片上，以達(dá)到充分利用實(shí)驗(yàn)材料的目的。觀察時(shí)又可以看到到充分利用實(shí)驗(yàn)材料的目的。觀察時(shí)又可以看到清晰的單層涂布細(xì)胞，便于觀察統(tǒng)計(jì)。）清晰的單層涂布細(xì)胞，便于觀察統(tǒng)計(jì)。）l3）染色、制片）染色、制片l滴加染液，室溫滴加染液，室溫10min（勿干）；（勿干）；l在在95%的酒精中分色的酒精中分色

7、1-3分鐘；分鐘；l在無水乙醇中繼續(xù)分色兩次，每次在無水乙醇中繼續(xù)分色兩次，每次1分鐘分鐘l用二甲苯透明兩次，每次約用二甲苯透明兩次，每次約3分鐘；分鐘；l加蓋玻片，壓片。加蓋玻片，壓片。l巴氏小體為女性細(xì)胞中所特有的染色體結(jié)構(gòu)，是巴氏小體為女性細(xì)胞中所特有的染色體結(jié)構(gòu)，是1條條X染染色體呈異固縮狀態(tài)所形成，各實(shí)驗(yàn)室所統(tǒng)計(jì)的觀察率不盡色體呈異固縮狀態(tài)所形成，各實(shí)驗(yàn)室所統(tǒng)計(jì)的觀察率不盡相同，從相同，從30一一50不等，有些實(shí)驗(yàn)室中在男性的細(xì)胞不等，有些實(shí)驗(yàn)室中在男性的細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)中發(fā)現(xiàn)X小體有小體有2%的出現(xiàn)率，但小體結(jié)構(gòu)不規(guī)范、典型。的出現(xiàn)率，但小體結(jié)構(gòu)不規(guī)范、典型。l巴氏小體常位于核膜內(nèi)側(cè)。直

8、徑為巴氏小體常位于核膜內(nèi)側(cè)。直徑為1m左右，其形狀有微左右，其形狀有微凸形、三角形、卵形、短棒形和雙球形等。觀察時(shí)需注意凸形、三角形、卵形、短棒形和雙球形等。觀察時(shí)需注意巴氏小體與細(xì)胞的比例。巴氏小體與細(xì)胞的比例。 l正常女性細(xì)胞中僅可觀察到正常女性細(xì)胞中僅可觀察到1個(gè)巴氏小體，而正常男性細(xì)個(gè)巴氏小體，而正常男性細(xì)胞中無巴氏小體或僅在個(gè)別細(xì)胞中有不典型的巴氏小體存胞中無巴氏小體或僅在個(gè)別細(xì)胞中有不典型的巴氏小體存在。在。 箭頭所示為巴氏小體（女性細(xì)胞箭頭所示為巴氏小體（女性細(xì)胞左左中存在，男性細(xì)胞中存在，男性細(xì)胞右右中沒有）中沒有）六、注意事項(xiàng)六、注意事項(xiàng)l1在實(shí)驗(yàn)中取材時(shí)應(yīng)該注意安全；在實(shí)驗(yàn)

9、中取材時(shí)應(yīng)該注意安全；l2如果用毛囊細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)，采樣前應(yīng)清如果用毛囊細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)，采樣前應(yīng)清 洗頭發(fā)，因出油后拔取毛發(fā)時(shí)不易帶出毛洗頭發(fā)，因出油后拔取毛發(fā)時(shí)不易帶出毛囊細(xì)胞。囊細(xì)胞。 程序程序l取材取材：受檢者清水漱口數(shù)次，用潔凈牙簽受檢者清水漱口數(shù)次，用潔凈牙簽從女性口腔兩側(cè)刮取粘膜，原位刮從女性口腔兩側(cè)刮取粘膜，原位刮23次，次，第第1次舍去次舍去，第，第2，3次分別涂于干凈載玻片次分別涂于干凈載玻片上。上。l固定固定：口腔粘膜細(xì)胞加入新配置的固定液口腔粘膜細(xì)胞加入新配置的固定液（95%乙醇乙醇:冰醋酸冰醋酸3:1），），固定固定30min以以上，空氣干燥。上，空氣干燥。（固定液（固定液勿干勿干）l染色、