(精品)PCR質(zhì)量手冊前言

1、某某省某某醫(yī)院臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室建于 20032003 年 1212 月.實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置、設(shè)備及人員配置均嚴(yán)格根據(jù)部、省臨床基因診斷實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合自身?xiàng)l件而建立.各項(xiàng)治理制度、質(zhì)量保證體系以及根本操作要求和標(biāo)準(zhǔn)操作程序均已制定.某某省某某醫(yī)院臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室將面向全省衛(wèi)生系統(tǒng),開展臨床基因診斷實(shí)驗(yàn)和相關(guān)知識的培訓(xùn)工作,使被培訓(xùn)人員掌握臨床基因診斷根底理論知識、實(shí)驗(yàn)室治理和質(zhì)量保證舉措、標(biāo)準(zhǔn)化操作方法以及了解基因診斷領(lǐng)域的進(jìn)展.同時還將開展基因主要是遺傳基因方面的臨床檢測及科學(xué)研究工作,為我省臨床基因診斷事業(yè)的開展做出一份奉獻(xiàn).質(zhì)量方針臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室是嚴(yán)格根據(jù)部、省臨床基因

2、擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行治理與操作,始終遵循：以病人為中央以質(zhì)量為核心以科學(xué)為依據(jù)崗位責(zé)任1 1 . .實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人崗位責(zé)任(1)(1)確定質(zhì)量方針,編制質(zhì)量手冊,并組織人員學(xué)習(xí),統(tǒng)一思想.(2)(2)負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)室全面質(zhì)量,包括試劑盒的質(zhì)量檢驗(yàn)；操作的質(zhì)量檢查；質(zhì)量限制(室內(nèi)室間質(zhì)評)的結(jié)果檢查；實(shí)驗(yàn)結(jié)果的核對、質(zhì)檢和簽發(fā)報告；確定人員培訓(xùn)方案；安排日常工作,保證及時發(fā)出質(zhì)量合格的報告.(3)(3)定期審核和評審質(zhì)量手冊的運(yùn)行情況.(4)(4)對實(shí)驗(yàn)室對內(nèi)外發(fā)出的報告負(fù)責(zé),并以簽名簽字形式表示.2 2 . .技術(shù)人員崗位責(zé)任(1)(1)按時消毒、清潔實(shí)驗(yàn)室,并記錄簽字.(2)(2)檢查儀器設(shè)備的

3、維護(hù)狀況,記錄使用情況并簽字.(3)(3)按質(zhì)量手冊規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)(SOP)操作試驗(yàn),并填寫報告簽字(4)(4)按規(guī)定進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的自主質(zhì)控工作(每次試驗(yàn)必須有室內(nèi)質(zhì)控舉措)并做好記錄簽字.人員培訓(xùn)及成果1 1 . .人員組成及技術(shù)檔案本室有工作人員 2 2 人,其中 1 1 名中級,1 1 名初級.2 2 . .培訓(xùn)記錄及專業(yè)文章發(fā)表情況實(shí)驗(yàn)室設(shè)施環(huán)境及規(guī)章制度1 1、實(shí)驗(yàn)室分區(qū)治理平面圖：見圖示 1 1.2 2、實(shí)驗(yàn)室根本設(shè)施：分隔和面積：實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)格根據(jù)標(biāo)準(zhǔn),分隔為三個獨(dú)立的工作室：試劑準(zhǔn)備室、樣品處理室、基因擴(kuò)增室.工作流程：從試劑準(zhǔn)備一樣品處理一基因擴(kuò)增,工作人員只能單向流動

4、.進(jìn)入下一區(qū)域,必須更換工作服、手套.通風(fēng)：各室空氣流通性良好.照明：室內(nèi)有良好的照明度.環(huán)境：潔凈、無菌；各室均配有紫外消毒設(shè)備.各室的儀器、實(shí)驗(yàn)和文具用具以及清潔物品均屬于各室專用.3 3、實(shí)驗(yàn)室消毒隔離及污物處理：見實(shí)驗(yàn)室廢棄物處理的標(biāo)準(zhǔn)操作程序.4 4、實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度：4.14.1 總那么4.1.14.1.1 進(jìn)入基因診斷實(shí)驗(yàn)室的任何工作人員都必須遵守實(shí)驗(yàn)室規(guī)那么； 非工作人員未經(jīng)允許不得入內(nèi),尤其不得為找人而逆向誤入 PCRPCR 實(shí)驗(yàn)室,以免造成不應(yīng)有的污染.4.1.24.1.2 臨床基因診斷實(shí)驗(yàn)室分試劑準(zhǔn)備、樣品處理、基因擴(kuò)增室三個室,各室擁有專用的儀器設(shè)備及實(shí)驗(yàn)物品含加樣器、試

5、管架、吸頭、記錄紙、筆、甚至清潔用品等,不得混用,須貼上不同顏色標(biāo)簽予以區(qū)別；試劑準(zhǔn)備室為白色標(biāo)識、樣品制備室為藍(lán)色標(biāo)識、擴(kuò)增室為綠色標(biāo)識.4.1.34.1.3 臨床基因診斷實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)具備醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、微生物學(xué)檢驗(yàn)根本知識、大中專以上學(xué)歷、并受過 PCRPCR 實(shí)驗(yàn)的根本知識和技能培訓(xùn).1.1.11.1.1進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的工作人員必須遵守實(shí)驗(yàn)室的唯一流向的規(guī)定, ,嚴(yán)禁反向流動.1.1.21.1.2進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室,必須更換本室有顏色標(biāo)識的工作服含帽和鞋.勤換洗工作服.1.1.31.1.3接收樣品時應(yīng)檢查樣品是否符合要求、貼上標(biāo)簽并做好登記.1.1.41.1.4 實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員必須嚴(yán)格根據(jù) PCRPC

6、R 實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行,包括實(shí)驗(yàn)室擦洗、臺面消毒,離心管、吸頭的無菌滅活準(zhǔn)備,儀器使用和廢棄物處理等.1.1.51.1.5 進(jìn)入 PCRPCR 實(shí)驗(yàn)室后區(qū)的物品不許帶進(jìn) PCRPCR 實(shí)驗(yàn)室前區(qū).1.1.61.1.6 任何實(shí)驗(yàn)操作包括儀器使用等情況均須做好記錄.1.1.71.1.7 檢測結(jié)果報告應(yīng)完整包括：檢驗(yàn)工程、靶核酸類型及結(jié)果等,并經(jīng)專業(yè)負(fù)責(zé)人審核簽字前方可發(fā)出.1.1.81.1.8 每天實(shí)驗(yàn)開始前,結(jié)束后均應(yīng)按要求清潔、消毒地面和實(shí)驗(yàn)臺面.1.1.91.1.9 保持臨床基因診斷實(shí)驗(yàn)室內(nèi)空氣唯一流向和空氣流通.1.1.101.1.10 定期校準(zhǔn)和維修 PCRPCR 儀、離心機(jī)、水浴箱、

7、冰箱等儀器、設(shè)備.1.1.111.1.11實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不得從事與實(shí)驗(yàn)無關(guān)事宜如聊天、飲食、吸煙等；室內(nèi)禁用電風(fēng)扇.1.1.121.1.12 每天下班前處理好廢棄物品,關(guān)好水、電和門窗.4.34.3 試劑準(zhǔn)備室4.3.14.3.1 實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入該室須穿本室專用白色工作服.實(shí)驗(yàn)中須戴手套.4.3.24.3.2 每天實(shí)驗(yàn)開始前,清潔實(shí)驗(yàn)臺并應(yīng)翻開紫外線燈消毒 3030 分鐘.4.3.34.3.3 取出當(dāng)天實(shí)驗(yàn)需配制和使用的試劑,其余試劑要立即收好,放回冰箱內(nèi).4.3.44.3.4 試驗(yàn)中使用的離心管、吸頭等應(yīng)經(jīng)過滅活無菌處理,應(yīng)在消毒的有效期內(nèi).4.3.54.3.5 其它室的用品不得帶入本室.4.3.6

8、4.3.6 每次試驗(yàn)均有記錄；且使用本室專用的、帶有本室標(biāo)識的記錄本、紙筆.4.3.74.3.7 實(shí)驗(yàn)完畢后要整理、清潔工作臺面.4.44.4 樣品準(zhǔn)備室4.4.14.4.1 實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入該室須穿本室專用蘭色工作服.實(shí)驗(yàn)中須戴手套,手套需常更換.4.4.24.4.2每天實(shí)驗(yàn)開始前,清潔實(shí)驗(yàn)室和實(shí)驗(yàn)臺,并應(yīng)翻開紫外燈消毒 3030 分鐘.4.4.34.4.3樣品的接受,登記,保存和提取按標(biāo)準(zhǔn)操作程序及試劑盒要求進(jìn)行.4.4.44.4.4使用本室專用的,經(jīng)滅菌處理的加樣器和帶濾心的吸頭.4.4.54.4.5做好實(shí)驗(yàn)記錄,并使用本室專用的記錄本和筆.4.4.64.4.6PCRPCR 擴(kuò)增后區(qū)的物品不

9、得帶入本室.4.4.74.4.7實(shí)驗(yàn)完畢清潔實(shí)驗(yàn)室和實(shí)驗(yàn)臺,并翻開紫外燈消毒.4.54.5 基因擴(kuò)增室4.5.14.5.1 實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入該室須穿本室專用綠色工作服.實(shí)驗(yàn)中須戴手套,手套需常更換.4.5.24.5.2每天實(shí)驗(yàn)開始前,清潔實(shí)驗(yàn)室和實(shí)驗(yàn)臺,并應(yīng)翻開紫外燈消毒 3030 分鐘.4.5.34.5.3使用本室專用的,經(jīng)滅菌處理的加樣器和帶濾心的吸頭.4.5.44.5.4 需在此進(jìn)行操作的,如巢式擴(kuò)增,第一次擴(kuò)增的模板必須在本室內(nèi)從反響管中取出,并參加另一只反響管中,此操作不可返回?cái)U(kuò)增前區(qū)進(jìn)行.4.5.54.5.5 非全封閉操作即須開啟反響管,應(yīng)翻開排風(fēng)扇 2424 小時排氣,保持室內(nèi)負(fù)壓狀

10、態(tài).4.5.64.5.6做好實(shí)驗(yàn)記錄,且使用本室專用的記錄本和筆.4.5.74.5.7PCRPCR 擴(kuò)增室的物品不得帶入擴(kuò)增前區(qū).4.5.84.5.8實(shí)驗(yàn)完畢清潔實(shí)驗(yàn)室和實(shí)驗(yàn)臺,并翻開紫外燈消毒.儀器設(shè)備和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)1 1 . .儀器設(shè)備的配置1.11.1 試劑準(zhǔn)備室內(nèi)配置的設(shè)備：紫外燈、普通高速臺式離心機(jī)、旋渦振蕩器、一套連續(xù)可調(diào)式移液槍和無菌過濾咀型移液器槍頭、冰箱、各種規(guī)格的無菌備用的離心管、PCRPCR 反響管和玻璃器皿、實(shí)驗(yàn)臺及本室專用的文具、紙張；本室專用的白色隔離服、一次性手套、污物桶及清潔用品.1.21.2 樣品制備室內(nèi)配置的設(shè)備：紫外燈、臺式高速冷凍離心機(jī)、旋渦振蕩器、恒溫水浴

11、鍋、二套連續(xù)可調(diào)式移液槍、無菌過濾咀型移液器槍頭、冰箱、各種規(guī)格的無菌備用的離心管和玻璃器皿、實(shí)驗(yàn)臺及本室專用的樣品登記本、文具、紙張；本室專用的藍(lán)色隔離服、一次性手套、污物桶及清潔用品.1.31.3 基因擴(kuò)增室內(nèi)配置的設(shè)備：紫外燈、PCRPCR 擴(kuò)增儀、實(shí)驗(yàn)臺及本室專用的文具、紙張；本室專用的綠色隔離服、一次性手套、污物桶及清潔用品.2 2 . .儀器設(shè)備的使用、維護(hù)及校準(zhǔn)見儀器使用、維護(hù)及校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序.3 3 . .儀器設(shè)備的記錄和標(biāo)識所有有關(guān)基因診斷實(shí)驗(yàn)室儀器使用、維護(hù)及校準(zhǔn)的操作均記錄備案.校準(zhǔn)后的儀器貼上標(biāo)識,說明校準(zhǔn)日期和狀態(tài).4 4 . .標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)陽性、陰性對照：來源于相應(yīng)的

12、檢測試劑盒.室內(nèi)質(zhì)控物、室間質(zhì)評物：來源于衛(wèi)生部和省臨檢中央.編制:日期:審批:日期:1. .移液器、擴(kuò)增儀、離心機(jī)等對檢測結(jié)果有效性、準(zhǔn)確性有影響的檢驗(yàn)設(shè)備,投入使用前必須進(jìn)行校準(zhǔn),并每年校準(zhǔn) 1 1 次.2 .參加衛(wèi)生部組織的室間質(zhì)評.檢驗(yàn)方法1.1.檢驗(yàn)工程及方法工程：乙型肝炎病毒 DNADNA 定量檢測、丙型肝炎病毒 RNARNA 定量檢測方法：TaqManTaqMan 熒光定量 PCRPCR 法乙型肝炎病毒 DNADNA 定量檢測TaqManTaqMan 熒光定量 PCRPCR 法丙型肝炎病毒 RNARNA 定量檢測2.2.操作手冊儀器使用、維護(hù)及校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序樣品采集、保存及運(yùn)輸

13、標(biāo)準(zhǔn)操作程序?qū)嶒?yàn)過程標(biāo)準(zhǔn)操作程序包括：試劑準(zhǔn)備、樣品制備、基因擴(kuò)增和產(chǎn)物檢測 SOPSOP各檢測工程標(biāo)準(zhǔn)操作程序?qū)嶒?yàn)室消毒及污物處理標(biāo)準(zhǔn)操作程序3.3.質(zhì)量保證舉措室內(nèi)質(zhì)控3.3.1 1 核酸提取質(zhì)控在核酸提取中,帶一份弱陽性質(zhì)控樣本和一份陰性質(zhì)控樣本 基質(zhì)與待測樣本相同,分別判定核酸提取的有效性和核酸提取過程中是否發(fā)生污染.3.3.2 2 核酸擴(kuò)增質(zhì)控靶核酸為 DNA:DNA:帶一份弱陽性靶 DNADNA 質(zhì)控和一份陰性質(zhì)控,以判定 DNADNA 擴(kuò)增的有效性；靶核酸為 RNA:RNA:一份弱陽性 cDNAcDNA 質(zhì)控、一份弱陽性 RNARNA 質(zhì)控和一份陰性對照以判定轉(zhuǎn)錄和DNADNA

14、擴(kuò)增的有效性3.3.3 3 產(chǎn)物檢測質(zhì)控一份靶 DNADNA 或已稀釋的擴(kuò)增靶 DNADNA 陽性質(zhì)控、一份陰性質(zhì)控以及一份試劑空白質(zhì)控與待測的擴(kuò)增樣本同步檢測,以判定產(chǎn)物檢測中核酸雜交及顯色測定的有效性.室間質(zhì)控參加由衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中央組織的全國臨床基因擴(kuò)增工程的室間質(zhì)量評價.樣品處置1 1.樣本的標(biāo)識： 標(biāo)識由三局部構(gòu)成-標(biāo)本采集日期、 該檢測批次的標(biāo)本序號和標(biāo)本類型,三局部間無間隔符號,例如：0208010102080101B B 分別表示年、月、日、序號和血液標(biāo)本,序號01-9901-99, ,整個標(biāo)識為 8-118-11 位；2 2 .樣本的采集、保存和運(yùn)輸：見樣品采集、保存及運(yùn)輸標(biāo)準(zhǔn)操作程序.3 3 .樣本的接收、記錄：樣品接收后,立即貼上本室設(shè)計(jì)的樣品標(biāo)識,并在接收標(biāo)本記錄表上按要求進(jìn)行登記.無簽、遲送的樣品、樣品量缺乏、溶血的樣品及其它未按規(guī)定采集的樣品,拒絕接收并記錄于拒收標(biāo)本登記表.4 4 .樣本的處理：見樣品制備標(biāo)準(zhǔn)操作程序報告包括以下信息：實(shí)驗(yàn)室名稱檢測工程如丙型肝炎病毒 RNARNA 定量