有機(jī)化學(xué)實驗-曾小耘9_紙層析-20140519

1、實驗實驗9 9 紙層析紙層析 實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康?實驗原理實驗原理 實驗儀器和試劑實驗儀器和試劑 實驗步驟實驗步驟 注意事項注意事項 實驗結(jié)果實驗結(jié)果 思考題思考題 實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康牧私饧垖游龅幕驹砹私饧垖游龅幕驹碚莆占垖游龅幕静僮骷夹g(shù)掌握紙層析的基本操作技術(shù)實驗原理實驗原理紙層析是以濾紙為惰性支持物的分配層析。紙層析是以濾紙為惰性支持物的分配層析。濾紙纖維吸附水作為固定相，有機(jī)溶劑為流動相。濾紙纖維吸附水作為固定相，有機(jī)溶劑為流動相。當(dāng)流動相流經(jīng)固定相時，物質(zhì)在兩相間不斷分配而得到分離。當(dāng)流動相流經(jīng)固定相時，物質(zhì)在兩相間不斷分配而得到分離。由于它們的分配系數(shù)不同，不同氨基酸隨流動相移

2、動的速率就不由于它們的分配系數(shù)不同，不同氨基酸隨流動相移動的速率就不同，于是就將這些氨基酸分離開來，形成距原點不等的層析點。同，于是就將這些氨基酸分離開來，形成距原點不等的層析點。 溶質(zhì)在濾紙上的移動速度用溶質(zhì)在濾紙上的移動速度用R Rf f 值表示：值表示： 一定的物質(zhì)在兩相間有固定的分配系數(shù)，在恒定條件下，各物一定的物質(zhì)在兩相間有固定的分配系數(shù)，在恒定條件下，各物質(zhì)有固定的質(zhì)有固定的R Rf f 據(jù)此可達(dá)到分析鑒定的目的。據(jù)此可達(dá)到分析鑒定的目的。原點至展開劑前沿的原點至展開劑前沿的距離距離原點至層析斑點中心的距離原點至層析斑點中心的距離= =Rf lmnABA+BlnRAf=,lmRBf

3、=,R Rf f值的大小與物質(zhì)的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、溶劑系統(tǒng)、值的大小與物質(zhì)的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、溶劑系統(tǒng)、層析濾紙的質(zhì)量和層析溫度等因素有關(guān)。層析濾紙的質(zhì)量和層析溫度等因素有關(guān)。儀器：儀器：層析缸層析缸層析濾紙層析濾紙直尺直尺鉛筆鉛筆毛細(xì)管毛細(xì)管電吹風(fēng)電吹風(fēng)試劑：試劑：展開劑：展開劑： 正丁醇正丁醇: :醋酸醋酸: :乙醇乙醇: :水水 = 4:1:1:2= 4:1:1:2顯色劑顯色劑: : 1% 1%茚三酮丙酮溶液茚三酮丙酮溶液樣品樣品: : A: A:丙氨酸丙氨酸(2%)(2%)乙醇溶液乙醇溶液 B:B:丙氨酸丙氨酸(2%)(2%)和亮氨酸和亮氨酸(2%)(2%)混合溶液混合溶液H2NCOOHCH3HH

4、2NCOOHCH2HCHCH3H3C丙氨酸：丙氨酸：亮氨酸：亮氨酸：實驗儀器與試劑實驗儀器與試劑實驗步驟實驗步驟1 1 準(zhǔn)備準(zhǔn)備2cm2cmA B手不要接觸手不要接觸濾紙中部濾紙中部A A丙氨酸丙氨酸B B丙氨酸丙氨酸+ +亮氨酸亮氨酸2 2 點樣點樣點樣干后再點一次點樣干后再點一次點樣直徑不超過點樣直徑不超過3mm3mm3 3 展開展開濾紙濾紙不要淹沒濾紙起點線不要淹沒濾紙起點線不要跟層析缸壁接觸不要跟層析缸壁接觸層析缸封閉層析缸封閉20 min20 min劃出展開劑前沿位置劃出展開劑前沿位置電吹風(fēng)吹干電吹風(fēng)吹干4 4 顯色顯色噴茚三酮溶液噴茚三酮溶液電吹風(fēng)吹干溶劑電吹風(fēng)吹干溶劑直至紫紅色斑

5、點出現(xiàn)直至紫紅色斑點出現(xiàn)劃出斑點的輪廓劃出斑點的輪廓標(biāo)出斑點的中心標(biāo)出斑點的中心nml5 5 計算計算注意事項注意事項實驗過程中手不要接觸濾紙中部實驗過程中手不要接觸濾紙中部實驗成敗決定于點樣的好壞，要求點的樣直徑不超過實驗成敗決定于點樣的好壞，要求點的樣直徑不超過3mm3mm展開劑不要淹沒濾紙上起點線；起點線應(yīng)與展開劑液面展開劑不要淹沒濾紙上起點線；起點線應(yīng)與展開劑液面平行；濾紙不要跟層析缸玻璃壁接觸；展開時層析缸封平行；濾紙不要跟層析缸玻璃壁接觸；展開時層析缸封閉閉分別計算丙氨酸和亮氨酸的分別計算丙氨酸和亮氨酸的R Rf f值值每人單獨操作，樣品層析濾紙附在實驗報告上每人單獨操作，樣品層析濾紙附在實驗報告上實驗結(jié)果實驗結(jié)果R Rf f值的意義