致突變實驗綜合分析及評價

1、致突變實驗綜合分析及評價致突變實驗綜合分析及評價第二部分第二部分2022-4-1101020304CONTENTS細(xì)菌回復(fù)突變試驗（Ames試驗）實驗方案結(jié)果判斷依據(jù)分析評價背景資料背景資料v某單位欲對農(nóng)藥96%二氯吡啶酸原藥，進(jìn)行致突變試驗綜合分析及評價，見相關(guān)資料。v現(xiàn)請根據(jù)所學(xué)知識，查閱資料和文獻(xiàn)，思考并討論以下問題。2022-4-11細(xì)菌回復(fù)突變試驗（細(xì)菌回復(fù)突變試驗（AmesAmes試驗）試驗）11vAmes 試驗是利用突變體的測試菌株，觀察受試物能否糾正或補償突變體所攜帶的突變改變，判斷其突變性。v原理：采用鼠傷寒沙門菌組氨基酸缺陷突變株作為指示微生物，檢測受試物致突變的實驗。鼠傷

2、寒沙門菌突變型菌株為組氨基酸缺陷型(his-),不能自行合成組氨酸,在無組氨酸的選擇性培養(yǎng)基上不能正常生長，而在含組氨酸的培養(yǎng)基上則可正常生長，當(dāng)受到致突變物誘變后突變型回復(fù)突變?yōu)橐吧停╤is+），表現(xiàn)為在無組氨酸的培養(yǎng)基上也能生長的菌落數(shù)。如圖示： 正向突變 野生型細(xì)菌（his+） 突變型細(xì)菌（his-） 回復(fù)突變v目的：根據(jù)試驗菌株在無組氨酸的培養(yǎng)基上能否形成菌落以及形成菌落的多少，判定受試物是否具有致突變性及致突變性的強(qiáng)弱。2022-4-11實驗方案實驗方案2-52-5一、實驗名稱：96%二氯吡啶酸原藥的鼠傷寒沙門氏菌回復(fù)突變試驗二、實驗?zāi)康模河^察95二氯吡啶酸原藥對鼠傷寒沙門菌回復(fù)突

3、變試驗(Ams試驗)菌株基因突變，初步探討其致突變性的強(qiáng)弱。為該農(nóng)藥的毒理學(xué)安全性評價提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。 三、實驗原理：鼠傷寒沙門菌突變型菌株為組氨基酸缺陷型(his-),不能自行合成組氨酸,在無組氨酸的選擇性培養(yǎng)基上不能正常生長，而在含組氨酸的培養(yǎng)基上則可正常生長，當(dāng)受到致突變物誘變后突變型回復(fù)突變?yōu)橐吧停╤is+），表現(xiàn)為在無組氨酸的培養(yǎng)基上也能生長的菌落數(shù)。根據(jù)試驗菌株在無組氨酸的培養(yǎng)基上能否形成菌落以及形成菌落的多少，判定受試物是否具有致突變性及致突變性的強(qiáng)弱。為彌補體外實驗缺乏代謝活化系統(tǒng)的不足，在測試系統(tǒng)中加入哺乳動物微粒體酶（S9）。2022-4-11實驗方案實驗方案四、試驗步驟1

4、、受試物5：95二氯吡啶酸原藥，白色絮狀固體。2、溶劑：二甲基亞砜(DMSO)，光譜純，無菌。3、Ames菌株：鼠傷寒沙門菌標(biāo)準(zhǔn)突變株TA97、TA98、TA100和TA102。劑量：采用平板摻入法，在加S9(+S9)和不加S9(一S9)條件下進(jìn)行測試。在不加S9的條件下測試該藥對TA100菌株產(chǎn)生的最小毒性的濃度作為劑量選擇的依據(jù)。查閱相關(guān)文獻(xiàn)后（若沒有相關(guān)文獻(xiàn)則根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果）以每皿5 000ug為最高劑量，按5倍組距下設(shè)每皿1 000、200、40、8ug4個劑量組。4、對照組：設(shè)自發(fā)對照組、陰性對照組和陽性對照組。陽性對照組不加S9的TA97、TA98和TAl02菌株用敵克松(Dexo

5、n)，TAl00菌株用疊氮鈉(NaN3)；陽性對照組加S9的TA97、TA98和TAl00菌株用2-氨基芴(2-AF)，TAl02菌株用1，8二羥基蒽醌(1，8-HAQ)。37培養(yǎng)48 h后計數(shù)每皿回變菌落數(shù)，每個劑量作3個平行皿。五、結(jié)果與評價。2022-4-11實驗結(jié)果判斷實驗結(jié)果判斷44若96%二氯吡啶酸原藥的回變菌落數(shù)超過自發(fā)回變菌落數(shù)的兩倍以上，且各劑量組間呈劑量一反應(yīng)關(guān)系，則該藥對鼠傷寒沙門菌標(biāo)準(zhǔn)突變型菌株有誘發(fā)基因突變的作用，反之，這無該作用。2022-4-11統(tǒng)計分析統(tǒng)計分析2022-4-11統(tǒng)計分析統(tǒng)計分析2022-4-11結(jié)果評價結(jié)果評價結(jié)果評價4：試驗結(jié)果表明，受試物各劑量組對各測試菌株在加或不加S9的條件下，其回變菌落數(shù)均未超過陰性對照組回變菌落數(shù)的2倍，亦無明顯的劑量反應(yīng)關(guān)系，而陽性對照組各測試菌株的回變菌落數(shù)均明顯增加，并超過陰性對照組回變菌落數(shù)的2倍以上。因此可認(rèn)為95二氯吡啶酸原藥無誘發(fā)菌株基因突變活性。2022-4-11參考文獻(xiàn)參考文獻(xiàn)1王心如.毒理學(xué)基礎(chǔ)M.人民衛(wèi)生出版社，2014,162.2GB 15193.4-2014 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 細(xì)菌回復(fù)突變試驗(S)3GB15670-1995,農(nóng)藥登記毒理學(xué)試驗方法 (S)4張愛華，張華.公共衛(wèi)生與預(yù)防