湖北貝母總生物堿平喘作用及其機(jī)理的研究

1、湖北貝母總生物堿平喘作用及其機(jī)理的研究         09-08-30 15:02:00     編輯：studa20            作者：徐仿周，張鵬，張勇慧，阮漢利，皮慧芳，吳繼洲 【摘要】  目的研究湖北貝母總生物堿對(duì)豚鼠的平喘作用及其機(jī)理。方法采用豚鼠整體動(dòng)物引喘和豚鼠離體氣管螺旋條的實(shí)驗(yàn)方法，分別研究湖北貝母總生物堿對(duì)乙酰膽堿組

2、胺(Ach-Histamine)整體動(dòng)物的平喘作用、對(duì)離體氣管平滑肌基礎(chǔ)張力的影響及對(duì)各種致痙劑收縮氣管平滑肌的抑制作用。結(jié)果湖北貝母總生物堿在4 mg/kg劑量下灌胃給藥1 h后,能明顯延長(zhǎng)AchHistamine所致豚鼠哮喘的引喘潛伏期，表現(xiàn)出良好的平喘效應(yīng)；對(duì)豚鼠離體氣管平滑肌的基礎(chǔ)張力無顯著影響；對(duì)Histamine和5HT引起的收縮也無明顯的抑制作用；但對(duì)于Ach引起的收縮，湖北貝母總生物堿在2.5 mg/L的濃度時(shí)即呈現(xiàn)出顯著的抑制作用(P<0.01),對(duì)20 mol/ L Ach的IC50為13.130 4 mg /L；湖北貝母總生物堿可使Ach量效累積曲線向右平移,而最大

3、效應(yīng)不降低。結(jié)論湖北貝母總生物堿對(duì)豚鼠具有較強(qiáng)的平喘作用,其機(jī)理可能與競(jìng)爭(zhēng)性拮抗氣管平滑肌M受體從而擴(kuò)張氣管平滑肌作用有關(guān)。 【關(guān)鍵詞】  湖北貝母 總生物堿 平喘 離體氣管平滑肌Abstract：ObjectiveTo investigate the antiasthmatic effect and its mechanism of the total alkaloids from Fritillaria hupehensis in guinea pigs. MethodsWe investigated the antiasthmatic effect of the total a

4、lkaloids through observing the latent period of asthma induced by acetylcholine-histamine in guinea pigs. By measuring the tension of isolated guinea pig tracheal strips in vitro, we observed the influence of the total alkaloids from Fritillaria hupehensis both on the basal tension and the contracti

5、on induced by acetylcholine, histamine and 5-HT.Results4 mg / kg (i.g) of the total alkaloids could significantly prolong the latent period of asthma in guinea pigs. In the isolated guinea pig tracheal smooth muscle experiments, though the total alkaloids from Fritillaria hupehensis could not change

6、 the basal tension and the contraction induced by histamine and 5-HT, it could antagonize the contraction induced by acetylcholine. The IC50 was 13.130 4 mg/L. Moreover, the cumulative concentration-response curves of acetylcholine were shifted to the right in a concentration-dependent manner, and t

7、he maximal contraction was not changed significantly. ConclusionThe total alkaloids from Fritillaria hupehensis has obvious autiasthmatic effect, which may be correlated with the competitive antagonism of muscarinic receptor on guinea pig tracheal smooth muscle. The total alkaloids from Fritillaria

8、hupehensis may be an novel and good antiasthmatic agent.Key words： Fritillaria hupehensi Hsiao et K. C. Hsia;   Total alkaloids;   Antiasthmatic effect;   Isolated tracheal smooth muscle    中藥貝母為百合科(Liliaceae)貝母屬Fritillaria L.多種植物的干燥鱗莖，具有清熱潤(rùn)肺、止咳祛痰和平喘的功效，在

9、我國(guó)使用歷史悠久，至今仍是防治呼吸系統(tǒng)疾病之要藥。湖北貝母 Fritillaria hupehensis Hsiao et K.C. Hsia 原野生于湖北省恩施自治州，俗稱“板貝”或“窯貝”，民間習(xí)作川貝藥用，歷史悠久，現(xiàn)已收載于中國(guó)藥典2000及2005版中，發(fā)展為僅次于浙貝母的第二大貝母主流品種。自1979年開始，吳繼洲教授等對(duì)湖北貝母作了化學(xué)成分、急性毒性、藥效學(xué)和一般藥理學(xué)等品質(zhì)評(píng)價(jià)的系統(tǒng)研究，不僅闡明了湖北貝母中主要的生物堿和非生物堿等化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)1，2，而且進(jìn)一步的藥效學(xué)研究還得出湖北貝母鎮(zhèn)咳、祛痰和平喘的活性部位為總生物堿3。雖然湖北貝母的藥效部位已明確為總生物堿，但對(duì)其平喘

10、效應(yīng)、平喘效應(yīng)的量效關(guān)系及平喘機(jī)理尚未有研究報(bào)道。為配合湖北貝母總生物堿的新藥開發(fā)，本文以乙酰膽堿組胺引喘法研究了湖北貝母總生物堿對(duì)豚鼠的平喘效應(yīng)及其量效關(guān)系，并進(jìn)一步用離體氣管平滑肌對(duì)其平喘的機(jī)理作了深入的探討。1  材料與儀器1.1  試劑及藥品氯化乙酰膽堿(上海三愛思試劑有限公司, 050209)；磷酸組胺(上海麗珠東風(fēng)生物技術(shù)有限公司，040506)；5-羥色胺(ABCR Gmbh，Germany)；0.9%氯化鈉注射液(武漢濱湖雙鶴藥業(yè)有限公司，050815)；氨茶堿注射液（常州蘭陵制藥有限公司，0508091）；吲哚美辛(山西臨汾云鵬藥業(yè)有限公司)；湖北貝母總生

11、物堿由本教研室提供；其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純；Krebs-Henseleit 營(yíng)養(yǎng)液組成如下（mmol/L）：NaCl 118.4，KCl 4.7，CaCl2 2.5，MgSO4·7H2O 0.8，KH2PO4 1.2，NaHCO3 25，Glucose 11.1。加蒸餾水至1 000 ml并調(diào)節(jié)pH至7.4。1.2 儀器402AI型超聲噴霧儀（江蘇魚躍醫(yī)療器械有限公司）；高靈敏度肌肉張力換能器(JZJ01H型，四川成都儀器廠)；RM6240BD型多道生理記錄儀、HSS1B型超級(jí)恒溫器及麥?zhǔn)虾銣卦〔?四川成都儀器廠)。1.3 動(dòng)物豚鼠，體重(170±20) g，雌雄兼用；豚鼠

12、，雄性，體重（300±50）g，由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。2 方法2.1 乙酰膽堿組胺整體動(dòng)物引喘實(shí)驗(yàn)4取(170±20) g的豚鼠，雌雄不拘，逐一測(cè)定引喘潛伏期，挑選合格者。將豚鼠放入密封透明塑料盒中，以402AI型超聲噴霧儀恒速噴入2%氯化乙酰膽堿和0.1%磷酸組胺的等量混合液15 s，密切注意豚鼠的反應(yīng)。觀察6 min之內(nèi)豚鼠出現(xiàn)喘息性抽搐的潛伏期即引喘潛伏期與發(fā)生抽搐的動(dòng)物數(shù)，如見豚鼠跌倒應(yīng)立即將其取出，以免死亡。并記錄引喘潛伏期，若引喘潛伏期大于120 s則認(rèn)為不合格而不予選用。次日將合格豚鼠隨機(jī)分組，每組8只。分別ig給予陰性對(duì)照生理鹽水、氨茶堿

13、和不同劑量的湖北貝母總生物堿，給藥60 min后，以同樣條件引喘并測(cè)定引喘潛伏期。計(jì)算給藥前后豚鼠引喘潛伏期的差值。2.2 豚鼠離體氣管平滑肌實(shí)驗(yàn)4擊斃豚鼠，迅速取出氣管，放入通有5%CO2和95%O2的Krebs-Henseleit營(yíng)養(yǎng)液中，輕柔去除氣管周圍的疏松結(jié)締組織后，剪成寬約35 mm、長(zhǎng)約20 mm的螺旋條。迅速置于盛有5 ml營(yíng)養(yǎng)液并持續(xù)通以5%CO2和95%O2的麥?zhǔn)虾銣卦〔壑?37.2)，氣管螺旋條上端接肌肉張力換能器，標(biāo)本前負(fù)荷為3.0 g。采用RM6240BD型四道生理記錄儀記錄氣管平滑肌肌張力的變化，每15 min換液1次，平衡2 h后開始實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)前用低濃度的Ach預(yù)收縮23次。在正式實(shí)驗(yàn)中，每次換液均同時(shí)加入吲哚美辛2 mol/L，以抑制環(huán)加氧酶，消除PGS對(duì)標(biāo)本的影響。每次實(shí)