細(xì)菌分類鑒定方法的研究進(jìn)展

1、細(xì)菌分類鑒定方法的研究進(jìn)展目錄細(xì)菌分類鑒定方法的研究進(jìn)展4摘 要4ABSTRATC51、引言51.1細(xì)菌分類鑒定51.1.1 細(xì)菌常規(guī)鑒定方法5細(xì)菌的數(shù)值分類和自動(dòng)化鑒定61.1.3化學(xué)分類鑒定法6分子遺傳學(xué)分類鑒定法61.2細(xì)菌分類鑒定方法的前景6細(xì)菌的鑒定方法的介紹與總結(jié)71、細(xì)菌常規(guī)鑒定方法71. 1 免疫診斷技術(shù)71. 1. 1 凝集試驗(yàn)71. 1. 2 免疫酶技術(shù)71.1. 3 免疫熒光技術(shù)71. 1. 4 放射免疫測(cè)定技術(shù)71. 1. 5 免疫膠體金標(biāo)記技術(shù)71. 2 蛋白質(zhì)圖譜分析72、細(xì)菌的數(shù)值分類和自動(dòng)化鑒定83、化學(xué)分類鑒定法83.1 磷脂脂肪酸分析技術(shù)（PLFA）6832

2、 高效液相色譜（HPLC）783.3 氣相色譜（GC）784、分子遺傳學(xué)分類鑒定法94. 1 細(xì)菌染色體DNA G+ C mol %含量測(cè)定94. 2 核酸雜交技術(shù)94. 3 限制性核酸內(nèi)切酶分析法94. 4 質(zhì)粒圖譜分析法94. 5 脈沖場(chǎng)凝膠電泳分析法94. 6 PCR技術(shù)94. 7 16SrRNA 序列和16S23SrRNA 間區(qū)序列分析法104. 8 微生物全基因組測(cè)序106、參考文獻(xiàn)10細(xì)菌分類鑒定方法的研究進(jìn)展摘 要細(xì)菌分類鑒定方法包括表型鑒定法和分子遺傳學(xué)鑒定法兩大類,分成4個(gè)水平:細(xì)菌形態(tài)和生理生化水平、細(xì)胞組分水平、蛋白質(zhì)水平和核酸水平。表型鑒定法是對(duì)前3個(gè)水平的鑒定,包括常

3、規(guī)鑒定法、數(shù)值分類鑒定法和化學(xué)分類鑒定法。分子遺傳學(xué)鑒定法1是核酸水平的鑒定,對(duì)細(xì)菌染色體或質(zhì)粒DNA 進(jìn)行分析,核酸雜交、PCR 技術(shù)、16SrRNA 和16 23SrRNA 序列分析、全基因組測(cè)序等,此類方法使細(xì)菌種屬定位和親源關(guān)系判別由表型特征深化為基因型鑒定。本文主要來介紹各種分類方法以及每種方法的優(yōu)缺點(diǎn)。關(guān)鍵詞：細(xì)菌分類鑒定 表型鑒定 分子遺傳學(xué)鑒定Bacterial classification and identification of the research progressABSTRATCBacterial classification and identification

4、 method two categories, including the the phenotype identification method and molecular genetic identification method is divided into four levels: the bacterial morphological and physiological and biochemical level, the level of cellular components, protein level and the nucleotide level. The phenot

5、ypic identification law is the identification of the first three levels, including conventional identification method, numerical classification and identification and chemical classification identification method. Identification of molecular genetics method 1 is the identification of the nucleic aci

6、d level, analysis of the bacterial chromosome or plasmid DNA, nucleic acid hybridization, PCR, 16SrRNA and the 16 23SrRNA sequence analysis of whole-genome sequencing, such positioning method bacterial species and phylogenetic discrimination by the deepening of the phenotypic characteristics of geno

7、typing. This paper is mainly to introduce the various classification methods as well as the advantages and disadvantages of each method.Key word ：Bacterial classification and identification Phenotypic identification Molecular genetic identification1、引言1.1細(xì)菌分類鑒定1.1.1 細(xì)菌常規(guī)鑒定方法細(xì)菌常規(guī)鑒定法是細(xì)菌形態(tài)和生理生化水平及蛋白質(zhì)水平

8、的鑒定,前者是最經(jīng)典、最常用的分類鑒定指標(biāo),也是現(xiàn)代化分類鑒定的依據(jù),后者包括免疫診斷技術(shù)、蛋白質(zhì)圖譜分析和氨基酸序列分析等。細(xì)菌的數(shù)值分類和自動(dòng)化鑒定目前應(yīng)用較多的自動(dòng)化鑒定系統(tǒng)主要有:Vitek - AMS(Automated Microbic System) 2 、Biolog、MicroScan 、Entero2tube 、MIDI、Sensititte 、Autosceptor 、Crystal 等鑒定系統(tǒng)。數(shù)值分類法是近20 年來發(fā)展起來的細(xì)菌分類理論,它應(yīng)用大量已知菌對(duì)相關(guān)生化試驗(yàn)反應(yīng)出現(xiàn)的頻率得出數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,優(yōu)化組合數(shù)10 項(xiàng)生理生化指標(biāo)集合成套試劑,根據(jù)相似系數(shù)大小判斷細(xì)菌

9、種屬間的親源性。自動(dòng)化微生物鑒定系統(tǒng)即采用數(shù)值分類原理。微生物數(shù)值分類鑒定集數(shù)學(xué)、電子、信息及自動(dòng)分析技術(shù)于一體,具有系統(tǒng)化、標(biāo)準(zhǔn)化、微量化和簡(jiǎn)易化等優(yōu)點(diǎn),采用商品化的鑒定測(cè)試卡,將未知菌鑒定到屬、種、亞種或生物型,可不同來源的臨床標(biāo)本進(jìn)行針對(duì)性鑒定,所得結(jié)果以數(shù)字方式表達(dá),與數(shù)據(jù)庫數(shù)據(jù)(手冊(cè)或軟件) 對(duì)比得出鑒定結(jié)果?；瘜W(xué)分類鑒定法20 世紀(jì)50 年代中期由Cummins 和Harris 建立起來的化學(xué)分類鑒定法3主要通過細(xì)菌細(xì)胞壁化學(xué)成分即氨基酸和糖的分析進(jìn)行分類鑒定,屬的分類主要測(cè)定各種氨基酸組分,種的鑒定主要是對(duì)糖的分析。另外,還有全細(xì)胞水解液糖型分析、脂肪酸分析、磷酸類脂成分分析、枝

10、菌酸分析、醌類分析和光合色素成分分析等,常使用紅外光譜、氣相色譜、高效液相色譜和質(zhì)譜等新技術(shù)。分子遺傳學(xué)分類鑒定法分子遺傳學(xué)分類法是以微生物的遺傳型（基因型）特征為依據(jù)，判斷微生物間的親緣關(guān)系，排列出一個(gè)個(gè)的分類群。目前較常使用的方法有：細(xì)菌染色體DNA G+ C mol %含量測(cè)定、核酸雜交技術(shù)、限制性核酸內(nèi)切酶分析法、質(zhì)粒圖譜分析法、脈沖場(chǎng)凝膠電泳分析法、PCR技術(shù)、16SrRNA 序列和16S23SrRNA 間區(qū)序列分析法、微生物全基因組測(cè)序1.2細(xì)菌分類鑒定方法的前景每種鑒定方法均有其優(yōu)點(diǎn)和缺陷,常規(guī)鑒定法常出現(xiàn)表型表達(dá)不穩(wěn)定、敏感性不高、測(cè)試項(xiàng)目多、費(fèi)時(shí)費(fèi)力等問題;免疫診斷技術(shù)若無相

11、應(yīng)抗體則無法鑒定;細(xì)菌自動(dòng)化鑒定適于快速鑒定,但目前數(shù)據(jù)庫中模式菌種數(shù)量有限,部分細(xì)菌只能鑒定至屬,對(duì)革蘭氏陽性菌和厭氧菌的鑒定效果較差;分子遺傳學(xué)鑒定是從本質(zhì)上闡明細(xì)菌間的親源關(guān)系,但所需試劑和儀器昂貴,鑒定時(shí)間較長,專業(yè)性強(qiáng),適于科研上的細(xì)菌分類研究,不適于基層和臨床微生物的快速鑒定。因此,細(xì)菌分類鑒定必須同時(shí)使用幾種方法或系統(tǒng)全面鑒定,表型鑒定和分子遺傳學(xué)鑒定結(jié)合可對(duì)未知菌進(jìn)行準(zhǔn)確合理定位,目前應(yīng)充分利用和完善現(xiàn)有鑒定技術(shù),繼續(xù)積累核酸數(shù)據(jù)庫資源,研究和推廣新的分子遺傳學(xué)鑒定法,使其在敏感性、特異性和實(shí)用性上更適合細(xì)菌快速準(zhǔn)確鑒定的需要,使其發(fā)揮應(yīng)有的和更大的作用。隨著細(xì)菌鑒定方法的不斷

12、建立和完善,將為科研和臨床工作者提供簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、微量、靈敏和成本低廉的檢測(cè)方法和更先進(jìn)、更全面的檢測(cè)手段。細(xì)菌的鑒定方法的介紹與總結(jié)1、細(xì)菌常規(guī)鑒定方法1. 1 免疫診斷技術(shù)1. 1. 1 凝集試驗(yàn)?zāi)壳俺Ｓ玫氖瞧咸亚蚓鷧f(xié)同凝集試驗(yàn)(SPA - CoA) ,金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁的A 蛋白(SPA) 能與動(dòng)物血清中IgG的Fc 結(jié)合,成為致敏的顆粒載體,特異性IgG的Fc 與SPA 結(jié)合后, F ( ab) 2 段暴露在葡萄球菌表面,與相應(yīng)細(xì)菌反應(yīng)呈現(xiàn)凝集現(xiàn)象,此法用于細(xì)菌快速鑒定和分型。1. 1. 2 免疫酶技術(shù)免疫酶技術(shù)( EIA , Enzymeimmunoa2ssay) 是將酶標(biāo)記的

13、抗抗體與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合形成抗原- 抗體- 酶標(biāo)記抗抗體復(fù)合物,加入酶底物產(chǎn)生有色產(chǎn)物。以酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定( ELISA) 和斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)(Dot - ELISA) 應(yīng)用較廣泛。1.1. 3 免疫熒光技術(shù)免疫熒光技術(shù)( FIA , Fuorescenceimmunoassay) 是將一抗滴加于待檢抗原上,再加一抗的熒光抗體(二抗) ,呈現(xiàn)特異性的熒光抗原抗體復(fù)合物以鑒定病原菌。此法比ELISA 更直觀,可直接觀察到菌體形態(tài)。1. 1. 4 放射免疫測(cè)定技術(shù)放射免疫測(cè)定( RIA , Rad2ioimmunoassay) 是用放射性同位素標(biāo)記抗原或抗體,與相應(yīng)的抗體或抗原結(jié)合后通過放射

14、自顯影定性和定量抗原或抗體。1. 1. 5 免疫膠體金標(biāo)記技術(shù)膠體金是繼酶、熒光素和放射同位素后免疫標(biāo)記技術(shù)中令人矚目的新標(biāo)記物。膠體金是氯金酸(HAuCl4) 在還原劑如白磷、枸櫞酸鈉等的作用下,聚合成特定大小的金顆粒,通過靜電作用與抗體或抗原形成一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài),即為免疫金,免疫金與相應(yīng)的抗原抗體結(jié)合后,呈現(xiàn)特定的顏色反應(yīng)。1. 2 蛋白質(zhì)圖譜分析蛋白質(zhì)圖譜分析主要采用聚丙烯酰胺凝膠電泳( PAGE ,Polyacrylamide Gel Electrophoresis)和SDS - PAGE。聚丙烯酰胺凝膠是單體丙烯酰胺(Acr) 和N ,N- 亞甲雙丙烯酰胺(Bis) 在催化劑過硫酸

15、銨和加速劑四甲基乙二胺(TEMED) 作用下聚合為含酰胺基側(cè)鏈的脂肪族長鏈,相鄰長鏈通過甲叉橋連接形成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物質(zhì),PAGE 根據(jù)電荷、形狀和分子大小分離和定性、定量分析蛋白質(zhì)和多肽。SDS - PAGE 根據(jù)分子量的不同分離蛋白質(zhì),SDS 是一種陰離子表面活性劑,與蛋白質(zhì)疏水部分結(jié)合使蛋白質(zhì)帶大量負(fù)電荷且使蛋白質(zhì)的形狀趨向一致,抵消了蛋白質(zhì)本身所帶電荷和形狀的影響,因此,樣品分子量的對(duì)數(shù)與其在凝膠中的遷移率呈直線關(guān)系。2、細(xì)菌的數(shù)值分類和自動(dòng)化鑒定法國生物- 梅里埃(Bio - Merieux) 公司的Vitek - AMS系統(tǒng)是應(yīng)用最普遍的細(xì)菌自動(dòng)化鑒定系統(tǒng)之一,品種齊全,鑒定范圍廣,

16、可鑒定18 000 多種細(xì)菌。它的系列主要有Vitek30 、Vitek60 、Vitek120及半自動(dòng)鑒定儀ATB expression4全自動(dòng)鑒定是從接種、培養(yǎng)、讀數(shù)到報(bào)告的全過程自動(dòng)完成,利用負(fù)壓將菌液加入測(cè)試卡各孔,封口機(jī)封口,置孵箱孵育,閱讀器以665 nm 波長每小時(shí)將測(cè)試卡拉出1 次對(duì)各孔底物進(jìn)行光掃描,動(dòng)態(tài)觀察其變化,計(jì)算機(jī)將判讀結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫比較得出鑒定結(jié)果。ATB expression 細(xì)菌鑒定系統(tǒng)包括ATB 光電比濁儀、ATB 接種器、ATB 閱讀器、ID 32E 測(cè)試卡、計(jì)算機(jī)與打印機(jī)6 部分,用于腸桿菌科及其他革蘭氏陰性菌的鑒定。此系統(tǒng)配制菌液和接種測(cè)試卡由人工完成

17、,結(jié)果由閱讀器和計(jì)算機(jī)模式株數(shù)據(jù)庫判讀,測(cè)試卡的32 項(xiàng)生化試驗(yàn)形成11 位數(shù)的生物編碼,與標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫比較得出細(xì)菌的鑒定概率%id 和模式頻率T 值。該系統(tǒng)可在424 h 鑒定600多種細(xì)菌,操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確,適用于醫(yī)院及科研單位?！癇iolog”細(xì)菌鑒定系統(tǒng)5由不同氧化還原指示劑和發(fā)酵性碳源的培養(yǎng)基干粉組成96 孔細(xì)菌培養(yǎng)板。將待檢菌的新鮮純培養(yǎng)物配制成適當(dāng)濃度的菌懸液,由多頭接種器快速完成96 孔接種,37 培養(yǎng)424 h ,置檢察室的分光光度計(jì)中檢測(cè),計(jì)算機(jī)自動(dòng)分析該菌的“指紋圖譜”得出鑒定結(jié)果。此系統(tǒng)適用于動(dòng)植物檢疫,醫(yī)學(xué)臨床檢驗(yàn)及食品、飲水衛(wèi)生的監(jiān)控等。MicroScan 細(xì)菌鑒定

18、系統(tǒng)包括全自動(dòng)系列Walkway 40 、Walkway 96 和半自動(dòng)系列AutoScan - 4 。全自動(dòng)Walkway系列采用RENOK真空接種器接種菌懸液,一次完成96 孔接種,自動(dòng)孵育、自動(dòng)判讀結(jié)果。此系統(tǒng)可鑒定近500 種細(xì)菌,為臨床診斷和院內(nèi)感染控制提供了良好途徑。3、化學(xué)分類鑒定法3.1 磷脂脂肪酸分析技術(shù)（PLFA）6磷脂脂肪酸(Phospholipid fatty acid, PLFA)分析技術(shù)是基于不同物種PLFA 的不同而進(jìn)行的分析技術(shù)。PLFAs 的提取,鑒定和定量分析可以提供水環(huán)境中總的生物群體的有關(guān)信息。群體中生物的大體代謝地位和此群體的應(yīng)力也可以表現(xiàn)出來。對(duì)樣品

19、中磷脂脂肪酸的常規(guī)分析可以與放射標(biāo)記的特定菌種結(jié)合起來應(yīng)用，再對(duì)放射性的PLFAs 進(jìn)行分析。此技術(shù)提取了微生物放射性標(biāo)記的指紋圖譜。它可用于研究生物群落中代謝選擇的自然生物和非生命物質(zhì)的混合物。目前PLFA 技術(shù)還不能很好地對(duì)微生物群落進(jìn)行準(zhǔn)確分類，因?yàn)橐恍┪⑸镆部赡芎胁顒e不大的PLFA，這成為應(yīng)用此技術(shù)的一大障礙。32 高效液相色譜（HPLC）7應(yīng)用于放線菌的分子鑒定和細(xì)胞化學(xué)成分分析可直接測(cè)定菌株DNA 的堿基組成和甲基萘醌型,為菌種的分類鑒定提供有利的證據(jù)。3.3 氣相色譜（GC）7應(yīng)用于放線菌的鑒定，可直接測(cè)定菌株主要脂肪酸的組成及含量，該分析是化學(xué)鑒定中重要的指標(biāo)之一。4、分子

20、遺傳學(xué)分類鑒定法4. 1 細(xì)菌染色體DNA G+ C mol %含量測(cè)定細(xì)菌染色體DNA G+ C mol %含量測(cè)定對(duì)表型相似的疑難菌株鑒定、新的分類單位建立和細(xì)菌親源關(guān)系判定等是一項(xiàng)重要的分類鑒定指標(biāo)和參考標(biāo)準(zhǔn),包括紙層析法、浮力密度法、高效液相色譜法8 、熱變性溫度(Tm) 9法和熒光法等。4. 2 核酸雜交技術(shù)核酸雜交技術(shù)10,11根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原理,將2 條不同來源的單鏈核酸進(jìn)行復(fù)性以鑒定菌株間的親源關(guān)系,用于DNA - DNA(Southern 雜交) 、DNA -RNA、RNA - RNA(Northern 雜交) 和PNA - DNA 雜交( PNA為肽核酸) 。DNA -

21、DNA 雜交適用于種水平的研究, 而DNA - rRNA 雜交用于屬和屬以上水平的分類研究。核酸雜交目前常采用固相雜交法,將待測(cè)菌株雙鏈核酸解成單鏈固定在硝酸纖維素濾膜等固相支持物上,置入含有經(jīng)同位素標(biāo)記、酶切并解鏈的參照菌株的單鏈核酸( 探針) 液中復(fù)性,形成新的雙鏈核酸,測(cè)定雜合雙鏈的相對(duì)放射性強(qiáng)度來確定菌株間的同源性程度。一般認(rèn)為核酸雜交同源性小于20 %為不同菌屬,20 %60 %為屬內(nèi)緊密相關(guān)的種,60 %70 %為同種內(nèi)不同亞種,大于70 %為同一亞種。另外,對(duì)線粒體DNA(mtDNA) 進(jìn)行雜交分析將對(duì)種內(nèi)和種間的分類更加靈敏。4. 3 限制性核酸內(nèi)切酶分析法限制性核酸內(nèi)切酶分析

22、法(REA ,Restriction Enzyme Analysis) 是用限制性內(nèi)切酶消化不同細(xì)菌染色體DNA 產(chǎn)生不同長度限制性片段的酶切圖譜,將圖譜與已知菌進(jìn)行比較鑒定細(xì)菌。4. 4 質(zhì)粒圖譜分析法質(zhì)粒是獨(dú)立于細(xì)菌染色體之外進(jìn)行復(fù)制的輔助性遺傳單位,不是細(xì)菌生長繁殖所必需的,但質(zhì)?？墒顾拗骶哂心承┓侨旧w決定的生物學(xué)性狀如耐藥性、溶血性、細(xì)菌毒力等。質(zhì)粒圖譜分析( PP分析,Plasmid Profile Analysis) 是通過比較電泳圖譜上質(zhì)粒DNA 數(shù)目和分子量分析細(xì)菌,該法特異性好、分析周期短、穩(wěn)定可靠,幾乎適用于所有細(xì)菌的分型,特別適用于尚未建立標(biāo)準(zhǔn)分型方法和缺乏血清型的菌

23、屬(種) 的鑒定和分型。4. 5 脈沖場(chǎng)凝膠電泳分析法脈沖場(chǎng)凝膠電泳分析法12(PFGE ,Pulsed - field Gel Electrophoresis) 采用定時(shí)改變電場(chǎng)方向的交變電源,每次電流方向改變后持續(xù)15 s 再改變電流方向,如此反復(fù)循環(huán)。PFGE 運(yùn)用罕見切點(diǎn)的內(nèi)切酶切割染色體DNA ,產(chǎn)生10800 kb 長的520 條大的DNA 片段。PFGE 是目前分辨力最高的分型方法之一,但技術(shù)要求高。4. 6 PCR技術(shù)PCR 技術(shù)是在模板、引物和4 種脫氧核苷酸存在的條件下依賴DNA 聚合酶的酶促反應(yīng),包括高溫變性、低溫復(fù)性和中溫延伸3 個(gè)階段,經(jīng)2530 個(gè)循環(huán),原始模板可擴(kuò)

24、增106 以上。PCR 技術(shù)具有高度的特異性和敏感性,是臨床微生物檢驗(yàn)的理想工具,用于細(xì)菌和病毒感染的早期診斷、遺傳性疾病的診斷、腫瘤基因分析和法醫(yī)學(xué)診斷等, 現(xiàn)已衍生出多種PCR 技術(shù), 如: 錨定PCR、反向PCR、多重PCR、原位PCR、不對(duì)稱PCR、重復(fù)序列PCR、巢式PCR、反轉(zhuǎn)錄PCR、差異顯示PCR、免疫PCR、PCR - ELISA、隨機(jī)擴(kuò)增DNA 多態(tài)性分析(RAPD) 和擴(kuò)增片段長度多態(tài)性(AFLP) 等。RAPD 又稱為隨機(jī)引物PCR 法(AP - PCR) ,可用于未知菌株的快速鑒定和流行病學(xué)調(diào)查,細(xì)菌種間、亞種間乃至株間的親緣關(guān)系分析。AFLP 技術(shù)1995 年由Vo

25、s 等首次報(bào)道,用于各種大小的基因組指紋分析,為研究物種間尤其是原核生物屬以下及株間的親緣關(guān)系提供有效手段。4. 7 16SrRNA 序列和16S23SrRNA 間區(qū)序列分析法rRNA 是研究細(xì)菌進(jìn)化和親源關(guān)系的重要指標(biāo),含量大(約占細(xì)菌RNA 總量80 %) ,素有“細(xì)菌化石”之稱,是細(xì)菌系統(tǒng)分類學(xué)最有用和常用的分子鐘。原核生物的5SrRNA、16SrRNA 和23SrRNA 位于同一操縱子上, 其中16SrRNA 為細(xì)胞所共有,分子大小適合操作,其功能同源且最為古老,既含保守序列又含可變序列。保守性反映生物物種的親源關(guān)系,為系統(tǒng)發(fā)育提供線索;高變性則揭示生物物種的特征核酸序列,是種屬鑒定的

26、分子基礎(chǔ),其序列變化與進(jìn)化距離相對(duì)應(yīng),在細(xì)菌種屬分類鑒定中廣泛應(yīng)用。16SrRNA13序列分析是一種非培養(yǎng)分析技術(shù),能快速鑒定目前尚不能人工培養(yǎng)的微生物。若兩菌的16SrRNA 同源性大于99 % , 且染色體DNA 雜交率大于70 % ,基因水平上為同一種細(xì)菌。16S23SrRNA 間區(qū)14 ( ISR , Intergenic Spacer Region)近幾年來在細(xì)菌分類鑒定中倍受關(guān)注,已成為新熱點(diǎn)。16S23SrRNA 的ISR 序列作為16SrRNA 序列系統(tǒng)分類的一個(gè)有力補(bǔ)充,可根據(jù)細(xì)菌間ISR 的數(shù)目、長度、種類和序列的不同進(jìn)行分類。16S23SrRNA 的ISR 序列作為細(xì)菌分

27、類新的目標(biāo)基因具有屬、種、型、株的特異性與靈敏性,ISR 作為細(xì)菌分類鑒定的研究熱點(diǎn),將具有無可比擬的優(yōu)越性,為細(xì)菌系統(tǒng)發(fā)育學(xué)帶來新的飛躍。4. 8 微生物全基因組測(cè)序微生物全基因組測(cè)序15 是當(dāng)前國際生命科學(xué)領(lǐng)域中掌握微生物全部遺傳信息的最佳途徑。1990 年10 月1 日人類基因組計(jì)劃(HGP ,HumanGenome Project) 的正式啟動(dòng)極大地推動(dòng)了微生物基因組學(xué)和微生物蛋白質(zhì)組學(xué)的飛速發(fā)展,1995 年7 月首次報(bào)道了流感嗜血桿菌的全基因組序列(1. 8 Mb) ,至今已正式公布的微生物基因組序列有53 種,正在進(jìn)行的至少有100余種,由此迎來了“后基因組生物學(xué)時(shí)代”。5、結(jié)束

28、語每種鑒定方法都有各自的適用范圍及優(yōu)缺點(diǎn)，我們應(yīng)充分利用和完善現(xiàn)有鑒定技術(shù),繼續(xù)積累核酸數(shù)據(jù)庫資源,研究和推廣新的分子遺傳學(xué)鑒定法,使其在敏感性、特異性和實(shí)用性上更適合細(xì)菌快速準(zhǔn)確鑒定的需要,使其發(fā)揮應(yīng)有的和更大的作用。隨著細(xì)菌鑒定方法的不斷建立和完善,將為科研和臨床工作者提供簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、微量、靈敏和成本低廉的檢測(cè)方法和更先進(jìn)、更全面的檢測(cè)手段。6、參考文獻(xiàn)1 焦振泉,劉秀梅. 細(xì)菌分類鑒定的分子生物學(xué)方法研究進(jìn)展J . 國外醫(yī)學(xué):衛(wèi)生學(xué)分冊(cè),1996 ,(6) :356 - 361.2 閻東輝,許淑珍,馬紀(jì)平,等. VITEK- AMS 在臨床細(xì)菌鑒定中的應(yīng)用J . 中華實(shí)用醫(yī)學(xué),20

29、00 ,(10) :9 - 10.3 姜遠(yuǎn)良. 化學(xué)分類法在細(xì)菌和真菌系統(tǒng)分類中的應(yīng)用和發(fā)展J . 遼寧師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版) ,1995 ,(2) :152 - 155.4 Roger F ,Roger A. Evaluation of the ATB 32 E systemfor automated identifica2tion of EnterobacteriaceaeJ . Pathol Biol ,1992 , (1) :78 - 80.5 Holmes B ,Costas M,Ganner M,et al. Evaluation of biolog systemfor ide

30、ntifica2tion of some gram- negative bacteria of clinical importanceJ. J Clin Microbi2ol ,1994 , (8) :1 970 - 1 975.6 曲直,阮繼生. 高效液相色譜和氣相色譜在放線菌分類鑒定中的應(yīng)用R. 曲直 中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所,阮繼生 ,中國科學(xué)院微生物研究所.7 王巨存,趙鳳儀. 高效液相色譜法分析分枝菌酸鑒定分枝桿菌.天津醫(yī)院中心試驗(yàn)室R. 2005.8 銀燕,黃愛娣. 用高效液相色譜法進(jìn)行G+ C 的測(cè)定J . 中國微生物學(xué)雜志,2002 ,(2) :112 - 113.Environ Microbiol ,2002 , (11) :770 - 773. 9 Gonzalez J M,Saiz - Jimenez C.Afluorimetric method for the estimation of G+Cmol % content in microorganisms by thermal denaturation temperature J.10黃