直抗陽性和免疫溶貧

1、2021/3/261直接抗人球蛋白實驗陽性直接抗人球蛋白實驗陽性和免疫溶血性貧血和免疫溶血性貧血2021/3/262抗球抗球蛋白蛋白試驗試驗 - - 檢測檢測 IgGIgG通過抗人球蛋白通過抗人球蛋白抗體的特異性橋抗體的特異性橋連作用連作用, ,促進紅促進紅細胞的凝集。可細胞的凝集。可分為直接和間接分為直接和間接抗球蛋白試驗。抗球蛋白試驗。2021/3/263直接抗球蛋白試驗直接抗球蛋白試驗檢查受檢者紅細胞在機體內(nèi)是否被抗體致敏檢查受檢者紅細胞在機體內(nèi)是否被抗體致敏產(chǎn)生直抗陽性的條件產(chǎn)生直抗陽性的條件 自身免疫溶血性貧血自身免疫溶血性貧血 溶血性輸血反應(yīng)溶血性輸血反應(yīng) 新生兒溶血病新生兒溶血病

2、2021/3/264間接抗球蛋白試驗間接抗球蛋白試驗證實紅細胞在體外被抗體結(jié)合的試驗證實紅細胞在體外被抗體結(jié)合的試驗 是檢查血清中是檢查血清中IgGIgG抗體特異性抗體特異性 或紅細胞抗原的重要手段或紅細胞抗原的重要手段可用于可用于 未知抗體的檢出與確認未知抗體的檢出與確認 交叉配合試驗交叉配合試驗 確認抗原確認抗原2021/3/265間接抗球蛋白試驗間接抗球蛋白試驗步驟1:致敏步驟2:洗滌步驟3:加入抗人球蛋白試劑（AHG） 2021/3/266增強介質(zhì)增強介質(zhì) 可以增強反應(yīng)性和減少孵育時間可以增強反應(yīng)性和減少孵育時間LISS 電解質(zhì)增加溶液的介電常數(shù)電解質(zhì)增加溶液的介電常數(shù),減弱了抗原抗體

3、減弱了抗原抗體的靜電作用。降低離子強度可以顯著增加抗原抗體的靜電作用。降低離子強度可以顯著增加抗原抗體結(jié)合率結(jié)合率Polybrene 堿性高分子物質(zhì)堿性高分子物質(zhì),有效中和紅細胞表面負有效中和紅細胞表面負電荷電荷,降低降低zeta電位，縮短紅細胞之間的距離電位，縮短紅細胞之間的距離PeG 極強的親水性，減少紅細胞與抗體周圍的水分極強的親水性，減少紅細胞與抗體周圍的水分22Bovine albuminEnzymes2021/3/267增強介質(zhì)增強介質(zhì)柱凝集（柱凝集（Column agglutination）固相技術(shù)（固相技術(shù)（Solid-phase technology）復(fù)合方法復(fù)合方法Red

4、blood cells panelPlasma or serumScreen DiluentNanoLysAnti-Human Globulin (AHG) 2021/3/2682. Incubation 20 at 37C3. Shake and Magnetize in the same time12 l of serum or plasmaScreenLysH1 H2 H3NanoLys60 l of NanoLys15 l of Hemascreen1,2,3ScreenDiluent60 l of Screen Diluent抗體篩選方法抗體篩選方法1.Dispensing2021/

5、3/269MAGNET抗體篩選方法抗體篩選方法MAGNETMAGNETMAGNET2021/3/2610DATDAT陽性血液標本的收集陽性血液標本的收集EDTAEDTA抗凝血抗凝血 提供紅細胞提供紅細胞 DAT DAT測定測定, ,定型定型, ,洗脫洗脫, ,自身吸收自身吸收不抗凝血不抗凝血 提供血清提供血清 抗體篩選，抗體鑒定抗體篩選，抗體鑒定2021/3/2611DAT陽性血清學研究陽性血清學研究多特異性抗球蛋白多特異性抗球蛋白, ,抗抗IgG, ,抗抗C3 測定附著在紅細胞上的免疫球蛋白的類型測定附著在紅細胞上的免疫球蛋白的類型血清抗體篩選與鑒定血清抗體篩選與鑒定 自身抗體自身抗體, ,

6、同種抗體同種抗體 自身同種抗體自身同種抗體放散試驗放散試驗 確認附著抗體的特異性確認附著抗體的特異性直抗（直抗（IgG）陽性，而血清與洗脫液皆無反應(yīng)）陽性，而血清與洗脫液皆無反應(yīng) 需進一步研究需進一步研究: : 藥物處理細胞，藥物處理細胞，A和和B細胞，酶處理細胞細胞，酶處理細胞2021/3/2612紅細胞鑒定紅細胞鑒定定型定型 ABO/Rh ABO/Rh, ,磷酸氯奎放散磷酸氯奎放散, ,收集網(wǎng)織紅細胞收集網(wǎng)織紅細胞DAT IgG,C3 放散放散 陰性陰性:A:A和和B B細胞，酶處理，藥物處理細胞細胞，酶處理，藥物處理細胞 陽性陽性: :同種抗體，自身抗體，同種自身同種抗體，自身抗體，同種

7、自身自身吸收自身吸收 2021/3/2613血清抗體鑒定血清抗體鑒定陽性陽性 自身抗體自身抗體 溫抗體溫抗體, ,冷抗體冷抗體 同種抗體同種抗體 特異性鑒定特異性鑒定 自身吸收鑒定同種抗體自身吸收鑒定同種抗體陰性陰性 IgG IgG抗抗A,A,抗抗B B抗體抗體 酶處理細胞酶處理細胞 藥物依賴抗體藥物依賴抗體2021/3/2614抗體放散方法抗體放散方法方法方法用途用途要點要點Lui freeze-thawABO HDFN快速；紅細胞用量少；快速；紅細胞用量少；其它抗體難放散其它抗體難放散Heat(56 0C)ABO HDFN；IgM凝集抗體容易；容易；IgG同種和自身同種和自身抗體難放散抗體

8、難放散酸放散試劑盒溫自身和同種抗體容易；當高效價的抗體存容易；當高效價的抗體存在時放散液有假陽性在時放散液有假陽性洋地黃皂苷酸溫自身和同種抗體 洗滌消耗時間洗滌消耗時間乙醚放散溫自身和同種抗體2021/3/2615紅細胞疾病紅細胞疾病紅細胞增多紅細胞增多紅細胞減少紅細胞減少 紅細胞生成減少紅細胞生成減少 紅細胞破壞過多（溶血性貧血）紅細胞破壞過多（溶血性貧血） 紅細胞丟失過多紅細胞丟失過多2021/3/2616溶血性貧血溶血性貧血紅細胞內(nèi)在缺陷紅細胞內(nèi)在缺陷 遺傳性紅細胞增多癥遺傳性紅細胞增多癥 紅細胞酶缺乏的貧血紅細胞酶缺乏的貧血 珠蛋白生成障礙性貧血珠蛋白生成障礙性貧血 異常血紅蛋白病異常

9、血紅蛋白病 陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥紅細胞外來因素紅細胞外來因素 免疫溶血性貧血免疫溶血性貧血 機械性溶血性貧血機械性溶血性貧血 其它因素引起的溶血性貧血其它因素引起的溶血性貧血2021/3/2617免疫溶血性貧血的分類免疫溶血性貧血的分類自身免疫溶血性貧血自身免疫溶血性貧血（AIHA） Warm AIHA (WAIHA) Cold Agglutinin Syndrone (CAS) Mixed-type AIHA Paroxysmal Cold Hemoglobinura (PCH) DAT-negative AIHA同種免疫溶血性貧血同種免疫溶血性貧血 Hemoly

10、tic Transfusion Reaction Hemolytic Disease of the Fetus and Newborn (HDFN)藥物誘發(fā)的免疫溶血性貧血藥物誘發(fā)的免疫溶血性貧血 Drug-dependent Drug-independent2021/3/2618自身免疫溶血性貧血的血清學特征自身免疫溶血性貧血的血清學特征WAIHACASMixed-type AIHAPCHDATIgGIgGIgG+C3IgG+C3C3C3C3 onlyIgG+C3C3C3 only免疫抗體免疫抗體類型類型IgGIgMIgG,IgMIgG放散液放散液IgG抗體沒有反應(yīng)IgG抗體沒有反應(yīng)血清血清

11、IAT；在20 C，35%未凝集IgM凝集抗體，4 C效價1000 (60%)IgG IAT-反應(yīng)抗體和IgM凝集抗體在DLT試驗中IgG雙相溶血特異性特異性廣范圍反應(yīng)；多種特異性報道通常為抗I通常未知抗P2021/3/2619溫抗體型自身免疫溶血性貧血溫抗體型自身免疫溶血性貧血(WAIHA)發(fā)病率發(fā)病率 1/800001/80000, ,女性比男性高女性比男性高, ,年齡多數(shù)年齡多數(shù)4040病因分類病因分類 網(wǎng)狀內(nèi)皮細胞腫瘤網(wǎng)狀內(nèi)皮細胞腫瘤 慢性淋巴瘤慢性淋巴瘤; ;霍奇金病霍奇金病; ;非霍奇金淋巴瘤病非霍奇金淋巴瘤病 膠原病膠原病 系統(tǒng)性紅斑狼瘡系統(tǒng)性紅斑狼瘡; ;類風濕性關(guān)節(jié)炎等類風濕

12、性關(guān)節(jié)炎等 免疫性疾病免疫性疾病 免疫缺陷綜合癥免疫缺陷綜合癥; ;低球蛋白血癥等低球蛋白血癥等 胃腸道疾病胃腸道疾病 某些良性腫瘤某些良性腫瘤2021/3/2620WAIHA 發(fā)病機制發(fā)病機制 免疫調(diào)節(jié)紊亂免疫調(diào)節(jié)紊亂 免疫器官對自身紅細胞失去識別能力免疫器官對自身紅細胞失去識別能力 紅細胞膜損傷紅細胞膜損傷, ,改變膜的抗原性改變膜的抗原性 2021/3/2621WAIHA 診斷標準診斷標準臨床表現(xiàn)臨床表現(xiàn) 起病慢起病慢, ,數(shù)月后才發(fā)現(xiàn)貧血數(shù)月后才發(fā)現(xiàn)貧血, ,表現(xiàn)為全身虛弱及頭昏。表現(xiàn)為全身虛弱及頭昏。 各有各有1/31/3患者皮膚粘膜蒼白及黃膽患者皮膚粘膜蒼白及黃膽, ,半數(shù)以上有脾

13、腫大。半數(shù)以上有脾腫大。實驗室檢查實驗室檢查 1. 1.貧血貧血: :程度不一，可暴發(fā)急性溶血現(xiàn)象。外周血涂片上可見程度不一，可暴發(fā)急性溶血現(xiàn)象。外周血涂片上可見 多量球形細胞及數(shù)量不等的幼紅細胞，多量球形細胞及數(shù)量不等的幼紅細胞，; ; 2.2.骨髓涂片骨髓涂片: :呈幼紅細胞增生象呈幼紅細胞增生象; ; 3.3.再生危象再生危象: :網(wǎng)織紅細胞極度減少，骨髓象呈細胞再生障礙，網(wǎng)織紅細胞極度減少，骨髓象呈細胞再生障礙， 血象呈全細胞減少；血象呈全細胞減少； 4.DAT4.DAT試驗陽性，為抗試驗陽性，為抗IgGIgG和抗和抗C3C3型。型。 2021/3/2622WAIHA 診斷依據(jù)診斷依據(jù)

14、直抗陽性直抗陽性 患者近患者近4 4個月無輸血或特殊藥物服用史個月無輸血或特殊藥物服用史, ,結(jié)合臨床表現(xiàn)和實驗室檢查結(jié)合臨床表現(xiàn)和實驗室檢查, ,可診斷為可診斷為溫抗體溫抗體型自身免疫溶血性貧血。型自身免疫溶血性貧血。直抗陰性直抗陰性 但臨床表現(xiàn)較符合本病癥狀但臨床表現(xiàn)較符合本病癥狀, ,腎上腺皮質(zhì)腎上腺皮質(zhì)激素或切脾術(shù)有效，其它溶血性貧血除外，激素或切脾術(shù)有效，其它溶血性貧血除外，可診斷為抗球蛋白蛋白試驗陰性的溫抗體型可診斷為抗球蛋白蛋白試驗陰性的溫抗體型自身免疫溶血性貧血。自身免疫溶血性貧血。 2021/3/2623WAIHA 療效標準療效標準緩解緩解 患者臨床癥狀消失患者臨床癥狀消失部

15、分緩解部分緩解 患者臨床癥狀基本消失。血紅蛋白量在患者臨床癥狀基本消失。血紅蛋白量在80g/L80g/L以上以上, ,網(wǎng)織紅細胞數(shù)在網(wǎng)織紅細胞數(shù)在5 5以下以下, ,血清總膽紅素測定血清總膽紅素測定34umol/L1000； 4.4.DAT試驗陽性，為試驗陽性，為C3型型2021/3/2629PCH 發(fā)病機制發(fā)病機制 以全身或局部受寒冷刺激后突然發(fā)生大量血以全身或局部受寒冷刺激后突然發(fā)生大量血管內(nèi)溶血和血紅蛋白尿為特征管內(nèi)溶血和血紅蛋白尿為特征,罕見罕見原發(fā)性發(fā)病者極為罕見原發(fā)性發(fā)病者極為罕見繼發(fā)性主要由梅毒特別是先天性梅毒及晚期繼發(fā)性主要由梅毒特別是先天性梅毒及晚期梅毒靜止期所引起梅毒靜止期

16、所引起,現(xiàn)在此病大多出現(xiàn)于某些現(xiàn)在此病大多出現(xiàn)于某些病毒感染病毒感染,如麻疹、流行性感冒、水痘、傳染如麻疹、流行性感冒、水痘、傳染性單核細胞增多癥等傳染病之后，以兒童居性單核細胞增多癥等傳染病之后，以兒童居多多 2021/3/2630PCH 診斷標準診斷標準臨床表現(xiàn)臨床表現(xiàn) 患者多數(shù)受寒后即有急性發(fā)作患者多數(shù)受寒后即有急性發(fā)作, ,表現(xiàn)為寒戰(zhàn)、發(fā)表現(xiàn)為寒戰(zhàn)、發(fā)熱（體溫可高達熱（體溫可高達40 0C）, ,全身無力及腰背痛全身無力及腰背痛, ,隨后即隨后即有血紅蛋白尿，多數(shù)持續(xù)幾小時，偶有幾天有血紅蛋白尿，多數(shù)持續(xù)幾小時，偶有幾天實驗室檢查實驗室檢查 1. 1.發(fā)作時貧血嚴重，進展迅速，外周血有

17、紅細胞大發(fā)作時貧血嚴重，進展迅速，外周血有紅細胞大 小不一及畸形，并有球形紅細胞、紅細胞碎片、小不一及畸形，并有球形紅細胞、紅細胞碎片、 嗜堿性點彩細胞及幼紅細胞嗜堿性點彩細胞及幼紅細胞; ; 2.2.反復(fù)發(fā)作者有含鐵血黃素尿反復(fù)發(fā)作者有含鐵血黃素尿; ; 3.3.DL試驗陽性；試驗陽性； 4.4.DAT試驗陽性，為試驗陽性，為C3型型2021/3/2631DL 冷溶血試驗冷溶血試驗Donath-Landsteiner testDL冷溶血素冷溶血素IgG冷反應(yīng)性抗體冷反應(yīng)性抗體, ,能結(jié)合于幾乎能結(jié)合于幾乎所有正常人紅細胞均有的所有正常人紅細胞均有的P血型抗原血型抗原, ,是一種是一種冷溫雙相

18、溫度的冷溶血素冷溫雙相溫度的冷溶血素, ,具有強烈的溶血作具有強烈的溶血作用。體外最適反應(yīng)溫度用。體外最適反應(yīng)溫度0 0C -4 0C，150C以下以下補體不能按序最終激活，故不發(fā)生補體溶血，補體不能按序最終激活，故不發(fā)生補體溶血，回升回升37 0C時抗體與細胞解離，但補體卻依次時抗體與細胞解離，但補體卻依次激活，導致溶血。激活，導致溶血。先置于冰水中約先置于冰水中約30分鐘，再置于分鐘，再置于37 0C水浴中水浴中2小時，溶血，小時，溶血，DL抗體存在?？贵w存在。 2021/3/2632冷自身免疫溶血性貧血的輸血冷自身免疫溶血性貧血的輸血慢性冷凝集素病很少需要輸血慢性冷凝集素病很少需要輸血,

19、 ,但是發(fā)生大量但是發(fā)生大量溶血時溶血時, ,病人溫度約病人溫度約40 0C的環(huán)境。當?shù)沫h(huán)境。當紅細胞輸紅細胞輸入開始入開始10分鐘紅細胞快速在病人血液中破壞分鐘紅細胞快速在病人血液中破壞, ,然后破壞速度變慢然后破壞速度變慢陣發(fā)性寒冷性血紅蛋白尿患者很少需要輸血，陣發(fā)性寒冷性血紅蛋白尿患者很少需要輸血，因抗體反應(yīng)溫度常只到因抗體反應(yīng)溫度常只到20 0C ，所以很少引起，所以很少引起溶血，當抗體反應(yīng)溫度如上升到溶血，當抗體反應(yīng)溫度如上升到30 0C即可引即可引起溶血。輸起溶血。輸P陰性血，但有人成功的輸予沒洗陰性血，但有人成功的輸予沒洗滌，沒加溫，滌，沒加溫，P陽性的細胞陽性的細胞2021/3

20、/2633自身吸收自身吸收區(qū)分自身和同種抗體區(qū)分自身和同種抗體患者血清患者血清: :自身抗體自身抗體+ +同種抗同種抗K洗滌患者細胞洗滌患者細胞, ,56 0C水浴中孵育水浴中孵育5分鐘分鐘, ,洗脫部分自身抗體洗脫部分自身抗體酶處理洗脫紅細胞酶處理洗脫紅細胞, ,可增大吸附抗體的可增大吸附抗體的能力能力37 0C吸附患者血清，移去自身抗體，只吸附患者血清，移去自身抗體，只留下同種抗體留下同種抗體2021/3/26342021/3/2635Blood-Matching Goes Genetic Hoping to prevent adverse transfusion reactions an

21、d save lives, European researchers are lobbying to replace serology-based blood typing with matchingbased on DNA tests 14 MARCH 2008 VOL 319 SCIENCE 2021/3/2636配血步入基因時代配血步入基因時代 為了預(yù)防輸血不良反應(yīng)和挽救生命,歐州學者們正在呼吁用DNA檢測替代血清學方法來鑒定血型 14 MARCH 2008 VOL 319 SCIENCE 2021/3/2637Blood-Matching Goes Genetic Two decade

22、s ago, a 20-year-old man entered Duke University hospital for a hip replacement. He had sickle cell disease and because he was anemic, he needed a blood transfusion before the operation. As with most sickle cell patients, he had received transfusions before. But on this occasion, his body rejected the blood. The doctors tried again and again with different blood, but the mans immune system rebelled against every new transfusion, generating antibodies tha