PCR檢測(cè)技術(shù)的分析前質(zhì)量控制

1、臨床基因擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)分析前質(zhì)量控制上海市臨床檢驗(yàn)中心徐 翀全面質(zhì)量管理全面質(zhì)量管理阿曼德阿曼德費(fèi)根堡姆費(fèi)根堡姆（Armand Vallin Feigenbaum）全面質(zhì)量控制之父、質(zhì)量大師、全面全面質(zhì)量控制之父、質(zhì)量大師、全面質(zhì)量控制的作者質(zhì)量控制的作者最早提出全面質(zhì)量管理概念，努力擯棄當(dāng)時(shí)最受關(guān)注的質(zhì)量控制最早提出全面質(zhì)量管理概念，努力擯棄當(dāng)時(shí)最受關(guān)注的質(zhì)量控制的技術(shù)方法，而將質(zhì)量控制作為一種管理方法。的技術(shù)方法，而將質(zhì)量控制作為一種管理方法。臨床實(shí)驗(yàn)室的全面質(zhì)量管理 2003年3月正式頒布醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力專用要求（ISO/IEC 15189），其核心就是加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室的全面質(zhì)量管理。 全面

2、質(zhì)量管理就是按系統(tǒng)學(xué)的原理，建立一個(gè)體系，使在實(shí)驗(yàn)的全過(guò)程中所有影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的要求和環(huán)節(jié)都處于受控狀態(tài)，保證每個(gè)環(huán)節(jié)的協(xié)調(diào)和統(tǒng)一，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果始終可靠。全面質(zhì)量管理的劃分 為了方便管理，ISO/IEC 15189文件將實(shí)驗(yàn)過(guò)程各環(huán)節(jié)劃分為分析前質(zhì)量管理、分析中質(zhì)量管理和分析后質(zhì)量管理。分析前質(zhì)量管理的內(nèi)涵 ISO/IEC 15189對(duì)于分析前程序的明確定義： 按照時(shí)間順序，從臨床醫(yī)生開出醫(yī)囑開始，到分析檢驗(yàn)程序時(shí)終止的步驟，包括檢驗(yàn)申請(qǐng)、患者的準(zhǔn)備、原始樣品的采集、運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室并在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行傳輸。 這個(gè)過(guò)程大部分工作都是醫(yī)生、護(hù)士、護(hù)工等在實(shí)驗(yàn)室以外完成的。分析后質(zhì)量評(píng)估分析后質(zhì)量評(píng)估分析中質(zhì)

3、量控制分析中質(zhì)量控制 患者患者準(zhǔn)備準(zhǔn)備檢查患者檢查患者申請(qǐng)檢驗(yàn)申請(qǐng)檢驗(yàn)標(biāo)本標(biāo)本采集采集標(biāo)本標(biāo)本運(yùn)送運(yùn)送標(biāo)本標(biāo)本處理處理人員素質(zhì)人員素質(zhì)工作環(huán)境工作環(huán)境實(shí)驗(yàn)用水實(shí)驗(yàn)用水實(shí)驗(yàn)室管理實(shí)驗(yàn)室管理儀器質(zhì)量保證儀器質(zhì)量保證方法選擇與評(píng)價(jià)方法選擇與評(píng)價(jià)試劑選擇與評(píng)價(jià)試劑選擇與評(píng)價(jià)建立操作規(guī)程建立操作規(guī)程室內(nèi)質(zhì)控及分析室內(nèi)質(zhì)控及分析標(biāo)本分析測(cè)定標(biāo)本分析測(cè)定臨床醫(yī)師臨床醫(yī)師反饋信息反饋信息室內(nèi)室內(nèi)復(fù)查復(fù)查保留標(biāo)本保留標(biāo)本隨時(shí)復(fù)查隨時(shí)復(fù)查運(yùn)送報(bào)告運(yùn)送報(bào)告患者投訴患者投訴室間質(zhì)評(píng)室間質(zhì)評(píng) 登記登記填發(fā)報(bào)告填發(fā)報(bào)告分析前質(zhì)量保證分析前質(zhì)量保證分析中質(zhì)量控制分析中質(zhì)量控制分析前程序的特點(diǎn) 分析前階段所占時(shí)間比例大。分析

4、前程序的特點(diǎn)分析前質(zhì)量管理是最易出現(xiàn)問(wèn)題、涉及人員最多、潛在因素最多、最難控制的環(huán)節(jié)。發(fā)生在臨床實(shí)驗(yàn)室的錯(cuò)誤分析Analytical factors% of total errorspre-analytical factors4668.2post-analytical factors18.547intra-analytical factors15Mario Plebani. Errors in clinical laboratories or errors in laboratory medicine?Clinical Chemical Laboratory Medicine. 2006, V

5、olume 44, Issue 6, 750759發(fā)生在臨床實(shí)驗(yàn)室的錯(cuò)誤分析臨床反饋不滿意的檢臨床反饋不滿意的檢驗(yàn)結(jié)果，驗(yàn)結(jié)果，80%的報(bào)告的報(bào)告最終可溯源到標(biāo)本質(zhì)最終可溯源到標(biāo)本質(zhì)量不符合要求。量不符合要求。醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法衛(wèi)醫(yī)發(fā)200673號(hào) 第十五條 醫(yī)療機(jī)構(gòu)和采供血機(jī)構(gòu)應(yīng)有分析前質(zhì)量保證措施，應(yīng)制定患者準(zhǔn)備、標(biāo)本采集、標(biāo)本貯存、標(biāo)本運(yùn)送、標(biāo)本接收等標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，標(biāo)本采集和接收記錄完整，并由醫(yī)療機(jī)構(gòu)和采供血機(jī)構(gòu)組織實(shí)施。序序號(hào)號(hào)審核內(nèi)容審核內(nèi)容審核意見審核意見符合基本符合但有缺陷不符合暫不需要考核評(píng)論與說(shuō)明6標(biāo)本管理6.1實(shí)驗(yàn)室有各類患者準(zhǔn)備、標(biāo)本采集、運(yùn)送、接收（或拒收）、保

6、存或安全處置的具體要求和操作規(guī)程6.2標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)符合生物安全的要求，組織標(biāo)本應(yīng)立刻冷凍并于低溫條件下運(yùn)送，標(biāo)本采集、運(yùn)送、接收全程可跟蹤6.3在接收標(biāo)本時(shí)應(yīng)有其狀態(tài)的詳細(xì)記錄6.4實(shí)驗(yàn)室應(yīng)確定標(biāo)本是否符合檢測(cè)要求，拒收標(biāo)本原因要明確6.5標(biāo)本檢測(cè)全過(guò)程包括核酸提取、擴(kuò)增、雜交、保存等都應(yīng)保持標(biāo)本的唯一編號(hào)6.6實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)標(biāo)本保存條件進(jìn)行監(jiān)控和記錄上海市臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)及相關(guān)分子診斷技術(shù)審核表做好分析前質(zhì)量管理要點(diǎn) 建立實(shí)驗(yàn)室分析前質(zhì)量管理文件 加強(qiáng)與醫(yī)生、護(hù)士、受檢者和實(shí)驗(yàn)室人員的溝通與培訓(xùn) 通過(guò)Lis-His網(wǎng)絡(luò)化管理臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室分析前質(zhì)量管理 軟件：1.檢測(cè)人員：應(yīng)當(dāng)經(jīng)省級(jí)以上衛(wèi)生行

7、政部門指定機(jī)構(gòu)技術(shù)培訓(xùn)合格后，方可從事臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)工作。2.臨床醫(yī)生、護(hù)士、護(hù)工及標(biāo)本接收人員等需溝通與培訓(xùn)。臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室分析前質(zhì)量管理 硬件 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室區(qū)域設(shè)置 1. 試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)2. 標(biāo)本制備區(qū)3. 擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)4. 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室分析前質(zhì)量管理質(zhì)量質(zhì)量手冊(cè)手冊(cè) 程序性文件程序性文件 質(zhì)量記錄質(zhì)量記錄 （表格、記錄本等）（表格、記錄本等） 作業(yè)指導(dǎo)書作業(yè)指導(dǎo)書（標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程）（標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程） 文件第三層次：第三層次：具體工作具體工作人員使用更詳細(xì)文件人員使用更詳細(xì)文件 第四層次：第四層次：用于質(zhì)用于質(zhì)量體系運(yùn)行的證實(shí)依量體系運(yùn)行的證

8、實(shí)依 質(zhì)量體系文件層次圖質(zhì)量體系文件層次圖綱領(lǐng)文件綱領(lǐng)文件 支持文件支持文件 證實(shí)監(jiān)督文證實(shí)監(jiān)督文 分析前質(zhì)量管理相關(guān)SOP文件臨床標(biāo)本的采集、運(yùn)送、接收和保存 每類標(biāo)本或每個(gè)項(xiàng)目的特定標(biāo)本如：血清、血漿、分泌物、尿液、痰、腦脊液、胸腹水及組織等，都應(yīng)有一個(gè)采集、運(yùn)送、接收和保存的SOP。分析前質(zhì)量管理相關(guān)SOP文件 編寫目的： 通過(guò)規(guī)范相應(yīng)臨床標(biāo)本的采集方法、所用容器、運(yùn)送方式、保存條件及接收，確保所采集的標(biāo)本在檢測(cè)前的有效性。分析前質(zhì)量管理相關(guān)SOP文件基本內(nèi)容：1. 特定標(biāo)本采集的具體方法和步驟2. 明確規(guī)定標(biāo)本的采集容器要求3. 明確標(biāo)本的采集量4. 明確標(biāo)本采集后送到實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)所能允

9、許的最大時(shí)間間隔5. 明確標(biāo)本采集后，在送往實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)前的保存方式和條件6. 明確標(biāo)本從采集處運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室過(guò)程中所要求的運(yùn)送條件7. 明確標(biāo)本接收時(shí)，簽收的程序、拒收的標(biāo)準(zhǔn)和標(biāo)本惟一編號(hào)的規(guī)則8. 規(guī)定標(biāo)本在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的短期和長(zhǎng)期保存條件和要求9. 制定保證標(biāo)本安全，即如何防止標(biāo)本丟失、調(diào)換、變質(zhì)的措施分析前質(zhì)量管理的核心問(wèn)題 醫(yī)囑（責(zé)任人醫(yī)生） 標(biāo)本采集 （責(zé)任人醫(yī)生、護(hù)士） 標(biāo)本運(yùn)送與保存 （責(zé)任人護(hù)工） 標(biāo)本驗(yàn)收與保存 （責(zé)任人檢驗(yàn)人員）檢驗(yàn)申請(qǐng)表信息充分1. 患者的唯一標(biāo)識(shí)2. 醫(yī)生的姓名或唯一標(biāo)識(shí)，最終檢驗(yàn)報(bào)告目的地3. 原始樣品的類型4. 申請(qǐng)的檢驗(yàn)項(xiàng)目5. 患者的相關(guān)臨床資料，至少

10、包括性別和出生日期6. 原始樣品采集日期和時(shí)間7. 實(shí)驗(yàn)室收到樣品的日期和時(shí)間標(biāo)本的采集 標(biāo)本采集時(shí)間對(duì)擴(kuò)增結(jié)果的影響 病原體感染機(jī)體后，特定的臨床標(biāo)本中，病原體含量能達(dá)到PCR檢出水平的時(shí)間點(diǎn)，并不能覆蓋整個(gè)感染過(guò)程，可能只是在感染或疾病發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的某一個(gè)時(shí)間段。 如HBV何HCV感染后，在特異抗原和抗體出現(xiàn)以前，血循環(huán)中即可有較高濃度病原體存在，而當(dāng)抗體出現(xiàn)后，病原體的濃度可能會(huì)低于PCR或RT-PCR方法的測(cè)定下限。標(biāo)本的采集 標(biāo)本采集時(shí)間對(duì)擴(kuò)增結(jié)果的影響采集血液標(biāo)本需空腹，脂血干擾核酸測(cè)定采集肺結(jié)核患者標(biāo)本，晨起后生理鹽水反復(fù)漱口后用力深咳標(biāo)本的采集 標(biāo)本的采集類型1. 血液標(biāo)本：

11、用于HBV、HCV檢測(cè)。研究表明對(duì)于病原體RNA測(cè)定，最好使用EDTA抗凝全血標(biāo)本（嚴(yán)禁使用肝素），抗凝后6h內(nèi)分離血漿。如使用血清標(biāo)本，則需盡快（2h內(nèi)）分離血清。2. 痰液：結(jié)合分枝桿菌病檢測(cè)。3. 各種分泌物：泌尿生殖道拭子用于衣原體檢測(cè)。4. 尿液、腦脊液、漿膜腔液、胸腹水和組織等。5. PCR標(biāo)本應(yīng)獨(dú)立收集，密閉運(yùn)輸，不能使用從其他檢測(cè)如生化、免疫、血液學(xué)檢測(cè)分出的標(biāo)本。肝素對(duì)PCR檢測(cè)的影響 肝素使DNA抽提得率降低肝素能結(jié)合并激活全血中多種蛋白酶原和補(bǔ)體系統(tǒng)，由此引起的一系列反應(yīng)使DNA在提取過(guò)程中不斷降解。 肝素在DNA提取過(guò)程中難以去除肝素為含多量硫酸基團(tuán)的粘多糖硫酸酯，溶于

12、水，不溶于有機(jī)溶劑。理化性質(zhì)決定了在DNA抽提過(guò)程中，不能被酚、氯仿去除，也不能被乙醇沉淀、洗滌去除。肝素對(duì)PCR檢測(cè)的影響 肝素使PCR擴(kuò)增效率降低1. 肝素對(duì)DNA聚合酶具有強(qiáng)大的親和力，使后者不能與Mg2+作用形成正確的親引物-模板符合體的活性中心。2. 肝素帶有強(qiáng)大負(fù)電荷，與DNA聚合酶結(jié)合后與同樣帶有較高負(fù)電荷的模板DNA之間產(chǎn)生排斥作用。3. 肝素?cái)y帶的強(qiáng)大負(fù)電荷中和反應(yīng)體系中的陽(yáng)離子如Mg2+和K+，使作為DNA聚合酶輔助因子的Mg2+濃度下降。使用一次性無(wú)菌及無(wú)核酸酶的材料綠頭管為含肝素類抗凝劑標(biāo)本的采集 標(biāo)本采集過(guò)程泌尿生殖道分泌物采集1. 消毒：采集部位如為泌尿生殖道，過(guò)度

13、消毒可能會(huì)去掉或破壞靶微生物。2. 采集：將拭子深入至尿道口2至3厘米處用力旋轉(zhuǎn)1至2圈。痰液采集1. 患者漱口，用力咳出氣管深出第一口痰于清潔干燥無(wú)菌的容器內(nèi) 。2. 對(duì)于無(wú)痰或少痰的患者，可用45加溫的100g/L NaCl水溶液霧化吸入或改變體位以使痰液易于咳出。3. 對(duì)于小兒可以輕壓胸骨柄上方以誘導(dǎo)咳痰，用消毒棉拭子刺激喉部引起咳嗽反射，用棉拭子采集標(biāo)本標(biāo)本的運(yùn)送與保存 標(biāo)本采集后，應(yīng)盡快送至檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室。1. 采集后的所有樣本在送至實(shí)驗(yàn)室之前，均應(yīng)暫放在28臨時(shí)保存。2. 靶核酸為DNA的標(biāo)本，如為無(wú)菌條件下采集，可在室溫下8小時(shí)內(nèi)運(yùn)送。3. 靶核酸為RNA的標(biāo)本，短時(shí)間內(nèi)的運(yùn)送（如1

14、0min左右），可在室溫下運(yùn)送；如時(shí)間較長(zhǎng)，則應(yīng)在加冰條件下運(yùn)送。如在標(biāo)本中加入了適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑（如GITC）的血標(biāo)本，則可在室溫下運(yùn)送或郵寄。4. 靶核酸為RNA的標(biāo)本，采集后建議在4h內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室。5. 標(biāo)本運(yùn)送過(guò)程中應(yīng)充分考慮生物安全問(wèn)題。有合適的容器轉(zhuǎn)運(yùn)標(biāo)本，帶蓋的透明轉(zhuǎn)運(yùn)盒，有生物危害標(biāo)識(shí)。標(biāo)本的驗(yàn)收 標(biāo)本接收的地點(diǎn) 不宜放在在標(biāo)本制備區(qū)，減少實(shí)驗(yàn)室污染的機(jī)會(huì)?？稍谒膮^(qū)外單獨(dú)設(shè)置或與其他臨床標(biāo)本接收處放在一起。標(biāo)本的驗(yàn)收 采樣質(zhì)量評(píng)價(jià)1. 血清（漿）標(biāo)本：體積不少于2ml。觀察是否溶血、脂血、黃疸及其程度。 嚴(yán)重溶血：血紅蛋白及其代謝產(chǎn)物可能抑制Taq酶活性，使PCR擴(kuò)增效率明顯降低。

15、 嚴(yán)重黃疸：膽紅素可抑制Taq酶活性。 脂血：低密度脂蛋白對(duì)熒光有屏蔽和吸收作用，故對(duì)Real Time PCR有干擾。標(biāo)本的驗(yàn)收 采樣質(zhì)量評(píng)價(jià)2. 分泌物標(biāo)本：從細(xì)胞組成、所需類型細(xì)胞的數(shù)量進(jìn)行評(píng)價(jià) 泌尿生殖道分泌物標(biāo)本可以顯微鏡下觀察是否有上皮細(xì)胞存在3. 痰液標(biāo)本：體積不少于5ml。外觀規(guī)定膿樣、血性、干酪樣及膿性粘液樣痰為合格。鏡下用油鏡觀察白細(xì)胞大于10個(gè)。標(biāo)本的驗(yàn)收 核對(duì)標(biāo)本的采集時(shí)間，嚴(yán)格控制標(biāo)本運(yùn)送時(shí)間1. 靶核酸為DNA的標(biāo)本，如為無(wú)菌條件下采集，可在室溫下8小時(shí)內(nèi)送達(dá)。2. 靶核酸為RNA的標(biāo)本，采集后4h內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室，并注意運(yùn)送條件。標(biāo)本的驗(yàn)收 標(biāo)本的唯一性編號(hào)編號(hào)時(shí)，建

16、議體現(xiàn)出項(xiàng)目的區(qū)別，比如：2012年3月19日，第一個(gè)送達(dá)的HBV-DNA標(biāo)本，可編號(hào)成B12031901可用字母C用于HCV-RNA，T用于TB-DNA，P用于HPV-DNA的編號(hào) 交接填表、簽名，拒收填表、簽名臨床PCR實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本接收記錄唯一編號(hào)唯一編號(hào)姓名姓名性別性別病歷號(hào)病歷號(hào)采集時(shí)間采集時(shí)間接收時(shí)間接收時(shí)間標(biāo)本類別標(biāo)本類別標(biāo)本狀態(tài)標(biāo)本狀態(tài)男男女女 月月 日日 時(shí)時(shí) 月月 日日 時(shí)時(shí)全血全血 正常正常男男女女 月月 日日 時(shí)時(shí) 月月 日日 時(shí)時(shí)全血全血 正常正常男男女女 月月 日日 時(shí)時(shí) 月月 日日 時(shí)時(shí)全血全血 正常正常男男女女 月月 日日 時(shí)時(shí) 月月 日日 時(shí)時(shí)全血全血 正常正常男

17、男女女 月月 日日 時(shí)時(shí) 月月 日日 時(shí)時(shí)全血全血 正常正常以上標(biāo)本編號(hào)從以上標(biāo)本編號(hào)從 至至 ，送檢人（簽字）：，送檢人（簽字）： 接收人（簽字）：接收人（簽字）： 。以上標(biāo)本編號(hào)從以上標(biāo)本編號(hào)從 至至 ，送檢人（簽字）：，送檢人（簽字）： 接收人（簽字）：接收人（簽字）： 。以上標(biāo)本編號(hào)從以上標(biāo)本編號(hào)從 至至 ，送檢人（簽字）：，送檢人（簽字）： 接收人（簽字）：接收人（簽字）： 。 臨床PCR實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本拒收記錄（一）姓名姓名性別性別病歷號(hào)病歷號(hào)采集時(shí)間采集時(shí)間接收時(shí)間接收時(shí)間標(biāo)本類別標(biāo)本類別拒收原因拒收原因拒收人簽字拒收人簽字送檢人簽字送檢人簽字男男女女 月月 日日 時(shí)時(shí) 月月 日日 時(shí)

18、時(shí)全血全血 正常正常男男女女 月月 日日 時(shí)時(shí) 月月 日日 時(shí)時(shí)全血全血 正常正常男男女女 月月 日日 時(shí)時(shí) 月月 日日 時(shí)時(shí)全血全血 正常正常男男女女 月月 日日 時(shí)時(shí) 月月 日日 時(shí)時(shí)全血全血 正常正常男男女女 月月 日日 時(shí)時(shí) 月月 日日 時(shí)時(shí)全血全血 正常正常臨床PCR實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本拒收記錄（二）姓名姓名性別性別病歷號(hào)病歷號(hào)采集時(shí)間采集時(shí)間接收時(shí)間接收時(shí)間標(biāo)本類別標(biāo)本類別拒收原因拒收原因拒收人簽字拒收人簽字送檢人簽字送檢人簽字男男女女 月月 日日 時(shí)時(shí) 月月 日日 時(shí)時(shí)全血全血 正常正常標(biāo)本拒收原因：標(biāo)本拒收原因：（1）患者姓名或病歷號(hào)不符）患者姓名或病歷號(hào)不符（2）標(biāo)本容器為非不含任何添

19、加劑的真空采血管）標(biāo)本容器為非不含任何添加劑的真空采血管（3）采血量低于）采血量低于2ml（4）標(biāo)本采用肝素抗凝）標(biāo)本采用肝素抗凝（5）容器破損）容器破損（6）標(biāo)本采集后送檢時(shí)間超時(shí)）標(biāo)本采集后送檢時(shí)間超時(shí)（7）標(biāo)本重度或中度溶血）標(biāo)本重度或中度溶血（8）標(biāo)本脂血）標(biāo)本脂血（9）標(biāo)本類型不正確）標(biāo)本類型不正確（10）其它：）其它： 標(biāo)本的處理和保存 血清（漿）1. 最理想的做法：分離血清（漿）時(shí)，分出兩管，一管用于測(cè)定，一管用于長(zhǎng)期保存?zhèn)洳椤?. HBV：分離出的血清（漿）如不立即提取核酸，保存于-20待檢。 3. HCV：盡快分離血清(漿), 如不立即提取RNA， 保存于-20待檢。 4.

20、RNA長(zhǎng)期保存：吸取200l血清，加20u RNasin（RNA酶抑制劑），保存于-70。 5. 如不分管，已發(fā)出結(jié)果報(bào)告的標(biāo)本應(yīng)及時(shí)轉(zhuǎn)移至冰箱保存，并由專人負(fù)責(zé)管理，保存1-2周（時(shí)間長(zhǎng)短根據(jù)報(bào)告單上的承諾而定）。標(biāo)本的處理和保存 全血標(biāo)本1. 全血標(biāo)本如用于DNA提取，可4下短期保存（數(shù)天），時(shí)間長(zhǎng)易降解，如用于RNA檢測(cè)，應(yīng)在取血后盡快提取RNA。 2. 最好將DNA或RNA提取后，置-70保存。標(biāo)本的處理和保存 外周血單個(gè)核細(xì)胞1. 用淋巴細(xì)胞分離液分離單個(gè)核細(xì)胞。 2. 加紅細(xì)胞裂解液裂解殘余紅細(xì)胞，生理鹽水洗滌數(shù)次離心取沉淀。3. 如短期內(nèi)不提取核酸，置-70保存。標(biāo)本的處理和保存淋巴細(xì)胞分離液分淋巴細(xì)胞分離液分離單個(gè)核細(xì)胞離單個(gè)