血液標(biāo)本采集

1、上課啦上課啦臨臨 床床 檢檢 驗(yàn)驗(yàn) 基基 礎(chǔ)礎(chǔ)clinical laboratory technologyclinical laboratory technologyn 臨床檢驗(yàn)的概念臨床檢驗(yàn)的概念n 臨床檢驗(yàn)的發(fā)展簡(jiǎn)史臨床檢驗(yàn)的發(fā)展簡(jiǎn)史n 臨床檢驗(yàn)在醫(yī)學(xué)中的作用臨床檢驗(yàn)在醫(yī)學(xué)中的作用 n 學(xué)習(xí)臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)的目的和要求學(xué)習(xí)臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)的目的和要求 緒緒 論論 INTRODUCTIONINTRODUCTION 一、概念（一、概念（Concept or Definition)Concept or Definition)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)中的重要分支，醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)中的重要分支，醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)的主干課程之一醫(yī)學(xué)檢

2、驗(yàn)專(zhuān)業(yè)的主干課程之一“臨床檢驗(yàn)學(xué)臨床檢驗(yàn)學(xué)”“臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)” RickRick于于19861986曾撰寫(xiě)曾撰寫(xiě) “醫(yī)學(xué)顯微鏡技術(shù)醫(yī)學(xué)顯微鏡技術(shù)(medical microscopy)(medical microscopy)” 19951995年衛(wèi)生部會(huì)議（青島）年衛(wèi)生部會(huì)議（青島） 專(zhuān)家們推薦使用專(zhuān)家們推薦使用“臨床基礎(chǔ)檢驗(yàn)學(xué)臨床基礎(chǔ)檢驗(yàn)學(xué)”臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)n借助先進(jìn)的檢測(cè)技術(shù)，對(duì)來(lái)自離體的血液、尿借助先進(jìn)的檢測(cè)技術(shù)，對(duì)來(lái)自離體的血液、尿液、糞便以及分泌物和排泄物等標(biāo)本進(jìn)行理學(xué)、液、糞便以及分泌物和排泄物等標(biāo)本進(jìn)行理學(xué)、化學(xué)、病原學(xué)和顯微鏡形態(tài)學(xué)的檢查，以簡(jiǎn)便、化學(xué)、病原學(xué)

3、和顯微鏡形態(tài)學(xué)的檢查，以簡(jiǎn)便、快速的檢測(cè)結(jié)果，滿足臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)篩檢疾病快速的檢測(cè)結(jié)果，滿足臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)篩檢疾病的要求的要求二、簡(jiǎn)史二、簡(jiǎn)史 (History)(History)n公元前公元前400年，希臘名醫(yī)年，希臘名醫(yī)Hippocrates 感官直覺(jué)感官直覺(jué)n1717世紀(jì)末荷蘭人世紀(jì)末荷蘭人Leeuwenhook Leeuwenhook 顯微鏡顯微鏡 n1919世紀(jì)末世紀(jì)末EhrlichEhrlich和和Romanowsky Romanowsky 染色技術(shù)染色技術(shù) n19281928年年 Papanieolaou Papanieolaou 脫落細(xì)胞學(xué)脫落細(xì)胞學(xué)n現(xiàn)代技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)代技術(shù)的發(fā)展

4、現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的特點(diǎn)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的特點(diǎn)n從手工檢測(cè)步入儀器自動(dòng)化、電腦化檢測(cè)從手工檢測(cè)步入儀器自動(dòng)化、電腦化檢測(cè)n床邊檢測(cè)床邊檢測(cè)n試劑批量化、配套化、專(zhuān)業(yè)化和多樣化試劑批量化、配套化、專(zhuān)業(yè)化和多樣化n檢驗(yàn)方法的標(biāo)準(zhǔn)化檢驗(yàn)方法的標(biāo)準(zhǔn)化n全面的質(zhì)量管理和質(zhì)量保證全面的質(zhì)量管理和質(zhì)量保證三、應(yīng)用三、應(yīng)用 (Utilization) 1為準(zhǔn)確診斷、及時(shí)治療提供證據(jù)為準(zhǔn)確診斷、及時(shí)治療提供證據(jù) 2 為分析病情、觀察療效、判斷預(yù)后提供依據(jù)為分析病情、觀察療效、判斷預(yù)后提供依據(jù)3為預(yù)防疾病提供資料為預(yù)防疾病提供資料4為配合臨床科研提供可靠數(shù)據(jù)為配合臨床科研提供可靠數(shù)據(jù)四、臨床檢驗(yàn)的一般方法四、臨床檢驗(yàn)的一般

5、方法n 目視檢查：目視檢查： 直接觀察被檢標(biāo)本直接觀察被檢標(biāo)本n 理學(xué)檢查：理學(xué)檢查： 借助物理學(xué)方法借助物理學(xué)方法n 化學(xué)檢查：化學(xué)檢查： 用定性和定量分析的方法用定性和定量分析的方法n 顯微鏡檢查：顯微鏡檢查：臨檢的主要檢查手段臨檢的主要檢查手段 n 自動(dòng)化儀器檢查自動(dòng)化儀器檢查要要 求求 (Request)1掌握檢驗(yàn)的基礎(chǔ)理論掌握檢驗(yàn)的基礎(chǔ)理論2掌握檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)技能掌握檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)技能3熟悉檢驗(yàn)的方法學(xué)評(píng)價(jià)熟悉檢驗(yàn)的方法學(xué)評(píng)價(jià) 4 . .了解檢驗(yàn)項(xiàng)目的參考值了解檢驗(yàn)項(xiàng)目的參考值5. 5. 熟悉檢驗(yàn)項(xiàng)目的臨床意義熟悉檢驗(yàn)項(xiàng)目的臨床意義 第一章第一章 血液一般檢驗(yàn)血液一般檢驗(yàn)第一節(jié)第一節(jié) 血液標(biāo)

6、本采集與處理血液標(biāo)本采集與處理 采血方法采血方法 靜脈采血靜脈采血 皮膚采血皮膚采血 真空采血真空采血 血量量0.1ml的檢驗(yàn)項(xiàng)目：的檢驗(yàn)項(xiàng)目：RBC計(jì)數(shù)、計(jì)數(shù)、WBC計(jì)數(shù)、計(jì)數(shù)、 BPL計(jì)數(shù)、計(jì)數(shù)、Hb測(cè)定等測(cè)定等皮皮 膚膚 采采 血血 法法Skinpunctureforbloodcollection采血部位WHO推薦采取外周血以左手無(wú)名指或中指指尖內(nèi)側(cè)推薦采取外周血以左手無(wú)名指或中指指尖內(nèi)側(cè)1、手指采血：、手指采血： 優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：方便方便獲較多血量獲較多血量檢查結(jié)果比較恒定檢查結(jié)果比較恒定 缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：與靜脈血仍在某些差異。與靜脈血仍在某些差異。2、耳垂采血：、耳垂采血： 優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：痛感

7、輕痛感輕 方便方便 適用于反復(fù)采集適用于反復(fù)采集 缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：血循環(huán)差血循環(huán)差受氣溫影響大檢查結(jié)果不恒定受氣溫影響大檢查結(jié)果不恒定 RBC、WBC、Hb、Hct結(jié)果均比靜脈血高，結(jié)果均比靜脈血高，特別是冬季。特別是冬季。3、其他部位：、其他部位： 拇指、拇趾或足跟采血拇指、拇趾或足跟采血 半歲以下嬰幼兒半歲以下嬰幼兒 皮膚完整處皮膚完整處 嚴(yán)重?zé)齻邍?yán)重?zé)齻?采血針采血針 三棱針或?qū)Ｓ玫娜忉樆驅(qū)Ｓ玫摹安裳槻裳槨睘楹?，使用前者?yīng)高壓滅菌，為好，使用前者應(yīng)高壓滅菌， 一人一針一人一針。n一、皮膚采血器材（vacuum blood collector ）2008-10-21采血器材采血器材注

8、意事項(xiàng)1、采血部位皮膚完整。、采血部位皮膚完整。2、無(wú)菌技術(shù)操作：防采血部位感染，、無(wú)菌技術(shù)操作：防采血部位感染， 一人一針?lè)栏窝?、艾滋病。一人一針?lè)栏窝?、艾滋病?、采血針刺入皮膚應(yīng)深淺適中。、采血針刺入皮膚應(yīng)深淺適中。4、多項(xiàng)檢查時(shí)，采血次序?yàn)椋?、多?xiàng)檢查時(shí)，采血次序?yàn)椋築PL計(jì)數(shù)（不擦第一滴血）計(jì)數(shù)（不擦第一滴血） RBC計(jì)數(shù)、計(jì)數(shù)、HbWBC計(jì)數(shù)與分類(lèi)。計(jì)數(shù)與分類(lèi)。5、取血用于自動(dòng)化血細(xì)胞分析儀，要防止棉球纖維混入、取血用于自動(dòng)化血細(xì)胞分析儀，要防止棉球纖維混入 堵塞儀器。堵塞儀器。 靜靜 脈脈 采采 血血 法法 (venipuncture for blood collection)凡

9、需血量較多的檢查凡需血量較多的檢查0.5ml如：如：ESR、Hct、凝血因子的測(cè)定等。、凝血因子的測(cè)定等。 部位部位 淺表靜脈均可淺表靜脈均可 常用肘部靜脈，不明顯時(shí)可用手背、踝常用肘部靜脈，不明顯時(shí)可用手背、踝 部，部， 幼兒可用頸外靜脈。幼兒可用頸外靜脈。P4 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) 1、采血前應(yīng)向病人作適當(dāng)解釋?zhuān)?、采血前?yīng)向病人作適當(dāng)解釋?zhuān)?、檢查注射器：、檢查注射器：3、止血帶壓迫時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)：、止血帶壓迫時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)：4 4、抽血時(shí)，只能向外抽，不能向內(nèi)推：抽血時(shí)，只能向外抽，不能向內(nèi)推：兩種采血方法的優(yōu)缺點(diǎn)比較兩種采血方法的優(yōu)缺點(diǎn)比較皮膚采血皮膚采血靜脈采血靜脈采血缺點(diǎn)缺點(diǎn)限制了重復(fù)實(shí)驗(yàn)

10、和追限制了重復(fù)實(shí)驗(yàn)和追加實(shí)驗(yàn)，標(biāo)本量少，加實(shí)驗(yàn)，標(biāo)本量少，局部炎癥可得假結(jié)果局部炎癥可得假結(jié)果，組織液可混入，組織液可混入不同抗凝劑的使用，不同抗凝劑的使用，改變血液性質(zhì)，影響改變血液性質(zhì)，影響有形成分的形態(tài)有形成分的形態(tài)優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)價(jià)廉、快速、操作簡(jiǎn)價(jià)廉、快速、操作簡(jiǎn)便，標(biāo)本可直接測(cè)定便，標(biāo)本可直接測(cè)定標(biāo)本代表性大，無(wú)組標(biāo)本代表性大，無(wú)組織液影響，適于臨床織液影響，適于臨床研究，可重復(fù)實(shí)驗(yàn)和研究，可重復(fù)實(shí)驗(yàn)和追加其他實(shí)驗(yàn)追加其他實(shí)驗(yàn)三、真空采血法（三、真空采血法（40年代，美國(guó)年代，美國(guó)BD公司）公司）（vacuum tube for blood collection）n套筒式和頭皮靜脈式兩種套

11、筒式和頭皮靜脈式兩種n優(yōu)點(diǎn)：血樣無(wú)需容器之間的轉(zhuǎn)移，減少優(yōu)點(diǎn)：血樣無(wú)需容器之間的轉(zhuǎn)移，減少 溶血現(xiàn)象，保持血液標(biāo)本的完整溶血現(xiàn)象，保持血液標(biāo)本的完整 性，使檢驗(yàn)結(jié)果更加準(zhǔn)確，也有性，使檢驗(yàn)結(jié)果更加準(zhǔn)確，也有 利于防止醫(yī)院內(nèi)血源性傳染病的利于防止醫(yī)院內(nèi)血源性傳染病的 交叉感染和環(huán)境保護(hù)。交叉感染和環(huán)境保護(hù)。 缺點(diǎn)：真空采血管價(jià)格較高缺點(diǎn)：真空采血管價(jià)格較高n2.真空采血器材 I.采血針2008-10-21n II.持針器2008-10-212008-10-21醫(yī)學(xué)全在線網(wǎng)站醫(yī)學(xué)全在線網(wǎng)站 n III.真空采血管2008-10-21血液標(biāo)本采集的質(zhì)量保證血液標(biāo)本采集的質(zhì)量保證一、采血服務(wù)一、采血服

12、務(wù) 1.環(huán)境要求環(huán)境要求 a） 空間空間 b）窗口）窗口 2.生物安全生物安全 a）防止交叉感染）防止交叉感染 b）履行環(huán)境消毒）履行環(huán)境消毒 二、患者狀態(tài)要求（自學(xué)）二、患者狀態(tài)要求（自學(xué)）三、采血操作對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的影響三、采血操作對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的影響1.采血時(shí)間采血時(shí)間2.采血部位采血部位3. 采血體位采血體位4.壓脈帶使用壓脈帶使用5.輸液輸液6.溶血溶血血標(biāo)本溶血：血標(biāo)本溶血： 注射器和容器：干燥、清潔。注射器和容器：干燥、清潔。抽血速度不能太快。抽血速度不能太快。抽血時(shí)避免產(chǎn)生大量泡沬。抽血時(shí)避免產(chǎn)生大量泡沬。抽血后應(yīng)先拔針頭，再注入。抽血后應(yīng)先拔針頭，再注入。抗凝不能用力振蕩?？鼓荒苡?/p>

13、力振蕩。離心速度不能過(guò)高。離心速度不能過(guò)高。 一、血液標(biāo)本運(yùn)輸一、血液標(biāo)本運(yùn)輸 1.1.唯一標(biāo)識(shí)原則唯一標(biāo)識(shí)原則 2.2.生物安全原則生物安全原則 3.3.盡快運(yùn)輸原則盡快運(yùn)輸原則二、標(biāo)本拒收二、標(biāo)本拒收 血液標(biāo)本運(yùn)輸、血液標(biāo)本運(yùn)輸、保存與保存與處理處理三、血液檢驗(yàn)前的預(yù)處理三、血液檢驗(yàn)前的預(yù)處理n1.分離血清或血漿分離血清或血漿n2.分離細(xì)胞分離細(xì)胞n分離后的標(biāo)本分離后的標(biāo)本 ： 一般應(yīng)置于一般應(yīng)置于4，保存一個(gè)月的標(biāo)本，保存一個(gè)月的標(biāo)本 ， 應(yīng)應(yīng)-20 冰箱。保存冰箱。保存3個(gè)月以上的標(biāo)本，分離個(gè)月以上的標(biāo)本，分離 后應(yīng)該后應(yīng)該-70 保存。保存。n立即送檢標(biāo)本立即送檢標(biāo)本n檢測(cè)后的標(biāo)本檢

14、測(cè)后的標(biāo)本n標(biāo)本信息的保存標(biāo)本信息的保存四、血液標(biāo)本保存四、血液標(biāo)本保存 二、抗凝劑選擇二、抗凝劑選擇 1、檸檬酸鈉（枸櫞酸鈉）、檸檬酸鈉（枸櫞酸鈉） a. 抗凝原理：螯合鈣離抗凝原理：螯合鈣離使用方法使用方法 配成配成 109 mmol/L的濃度和血液的濃度和血液1：9 106 mmol/L的濃度和血液的濃度和血液1：4化學(xué)名：3-羥基-3-羧基戊二酸（三鈉鹽）c. 適用范圍：止血學(xué)檢驗(yàn)、血沉、輸血保養(yǎng)液（毒性小）適用范圍：止血學(xué)檢驗(yàn)、血沉、輸血保養(yǎng)液（毒性?。ヾ. 不適用于：不適用于：血細(xì)胞計(jì)數(shù)血細(xì)胞計(jì)數(shù) 2. 草酸鈉（乙二酸的鈉鹽）草酸鈉（乙二酸的鈉鹽）a. 抗凝原理：草酸鈣沉淀抗凝原理

15、：草酸鈣沉淀b. 使用方法：使用方法： 草酸鈉草酸鈉 0.1mol/L 和血液和血液1：9c. 適用范圍：適用范圍： 止血學(xué)檢驗(yàn)止血學(xué)檢驗(yàn) (制備正吸漿制備正吸漿)。d. 不適用于：不適用于：對(duì)凝血因子對(duì)凝血因子V保護(hù)功能差，保護(hù)功能差， 影響影響PT測(cè)定；沉淀物影響測(cè)定；沉淀物影響 自動(dòng)凝血儀的使用自動(dòng)凝血儀的使用。3. 雙草酸鹽抗凝劑雙草酸鹽抗凝劑 a. 抗凝原理：抗凝原理： 草酸鈣沉淀草酸鈣沉淀使用方法：使用方法： 草酸鉀草酸鉀0.8g , 草酸銨草酸銨1.2g（100ml） 與血液與血液 1：10 （80C以下烘干）以下烘干）適用范圍：適用范圍： 紅細(xì)胞檢驗(yàn)（紅細(xì)胞比積、計(jì)數(shù)）紅細(xì)胞檢

16、驗(yàn)（紅細(xì)胞比積、計(jì)數(shù)） d. 不適于不適于: 血小板計(jì)數(shù)和白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)血小板計(jì)數(shù)和白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù), 電解質(zhì)測(cè)定電解質(zhì)測(cè)定4. 肝素肝素 （含硫酸基團(tuán)的粘多糖）（含硫酸基團(tuán)的粘多糖）抗凝原理：低濃度時(shí)抑制因子抗凝原理：低濃度時(shí)抑制因子a、和和PF3之之 間的作用，加強(qiáng)抗凝血酶間的作用，加強(qiáng)抗凝血酶滅活絲滅活絲 氨酸蛋白酶，從而阻止凝血酶形成，氨酸蛋白酶，從而阻止凝血酶形成， 還能抑制凝血酶的自我催化及抑制還能抑制凝血酶的自我催化及抑制 因子因子的作用；高濃度時(shí)阻斷凝血的作用；高濃度時(shí)阻斷凝血 酶和纖維蛋白的反應(yīng)。酶和纖維蛋白的反應(yīng)。 b. 適用方法：適用方法： 1g/L濃度的肝素鈉與血液濃度的

17、肝素鈉與血液 1：10優(yōu)點(diǎn)：抗凝能力強(qiáng)、不影響血細(xì)胞體積、不易優(yōu)點(diǎn)：抗凝能力強(qiáng)、不影響血細(xì)胞體積、不易 溶血、能耐高溫。溶血、能耐高溫。適用范圍：紅細(xì)胞檢驗(yàn)（紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白適用范圍：紅細(xì)胞檢驗(yàn)（紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白 測(cè)定、紅細(xì)胞比積）和多種生化分析測(cè)定、紅細(xì)胞比積）和多種生化分析 e. 不適用于：不適用于： WBC和和BPL計(jì)數(shù)、血涂片檢查、計(jì)數(shù)、血涂片檢查、 凝血象檢驗(yàn)。凝血象檢驗(yàn)。5. 乙二胺四乙酸（乙二胺四乙酸（EDTA）鹽）鹽a. 抗凝原理：抗凝原理： 螯合鈣離子螯合鈣離子b. 使用方法：使用方法： 15g/L濃度濃度EDTA 和血液和血液 1：10適用范圍：適用范圍： 對(duì)血細(xì)胞

18、形態(tài)影響小對(duì)血細(xì)胞形態(tài)影響小,適合血常規(guī)檢查、適合血常規(guī)檢查、 Hct不適用于：不適用于：影響血小板聚集和白細(xì)胞吞噬功能影響血小板聚集和白細(xì)胞吞噬功能, 不宜凝血象檢查和血小板功能試驗(yàn)。不宜凝血象檢查和血小板功能試驗(yàn)。 物理方法抗凝物理方法抗凝 脫纖維蛋白：脫纖維蛋白： 將血液注入有玻璃珠的器皿中，轉(zhuǎn)動(dòng)，將血液注入有玻璃珠的器皿中，轉(zhuǎn)動(dòng)， 纖維蛋白纏繞凝固于玻璃球，從而防止血纖維蛋白纏繞凝固于玻璃球，從而防止血 成凝塊。適用于免疫學(xué)檢驗(yàn)和紅斑性狼瘡成凝塊。適用于免疫學(xué)檢驗(yàn)和紅斑性狼瘡 細(xì)胞檢查。細(xì)胞檢查。第二節(jié)第二節(jié) 血涂片制備和細(xì)胞染色血涂片制備和細(xì)胞染色n血涂片的制備方法血涂片的制備方法n

19、血涂片制備的注意事項(xiàng)血涂片制備的注意事項(xiàng)n血液細(xì)胞染色血液細(xì)胞染色n細(xì)胞染色時(shí)注意事項(xiàng)細(xì)胞染色時(shí)注意事項(xiàng)一、血涂片的制備技術(shù)一、血涂片的制備技術(shù)血涂片的用途：血涂片的用途： 血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)、網(wǎng)織紅、血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)、網(wǎng)織紅、 異常細(xì)胞、寄生蟲(chóng)檢驗(yàn)。異常細(xì)胞、寄生蟲(chóng)檢驗(yàn)。 2. 血涂片制備步驟：血涂片制備步驟：（手工推片法）手工推片法）一一玻片清潔：玻片清潔： 1、新玻片處理：有游離堿質(zhì)。、新玻片處理：有游離堿質(zhì)。 2、用過(guò)玻片處理：、用過(guò)玻片處理： 3、使用中玻片處理：只能持玻片邊緣，、使用中玻片處理：只能持玻片邊緣， 保持清潔、干燥、保持清潔、干燥、 中性、無(wú)油膩。中性、無(wú)油膩。P 6二二

20、血涂片制作：血涂片制作：揮動(dòng)使之干燥，而后在血膜上寫(xiě)編號(hào)或病人姓名。揮動(dòng)使之干燥，而后在血膜上寫(xiě)編號(hào)或病人姓名。 將推玻片向?qū)⑼撇Ｆ?的方向稍抽回，當(dāng)血液充滿推玻的方向稍抽回，當(dāng)血液充滿推玻片的寬度后，以一定均勻的速度向片的寬度后，以一定均勻的速度向2的方向滑的方向滑動(dòng)。動(dòng)。三三影響因素：影響因素： 二、血液細(xì)胞染色二、血液細(xì)胞染色細(xì)胞染色技術(shù)細(xì)胞染色技術(shù)（一）染料（一）染料 （天然染料和人工染料）（天然染料和人工染料） 發(fā)色基團(tuán)和助色基團(tuán)使生物學(xué)染色劑產(chǎn)生顏色和被染發(fā)色基團(tuán)和助色基團(tuán)使生物學(xué)染色劑產(chǎn)生顏色和被染 組織親合。組織親合。堿性染料：堿性染料：為陽(yáng)離子染料，能接受質(zhì)子，染細(xì)胞核為陽(yáng)

21、離子染料，能接受質(zhì)子，染細(xì)胞核 的染料。如亞甲藍(lán)、天青。的染料。如亞甲藍(lán)、天青。酸性染料：酸性染料：為陰離子染料，能釋放質(zhì)子。主要有熒為陰離子染料，能釋放質(zhì)子。主要有熒 烷烷-氧雜蒽染料和偶氮染料兩類(lèi)，能結(jié)合氧雜蒽染料和偶氮染料兩類(lèi)，能結(jié)合 細(xì)胞的堿性成分并染色，如血紅蛋白、細(xì)胞的堿性成分并染色，如血紅蛋白、 嗜酸性顆粒成分等。嗜酸性顆粒成分等。3. 復(fù)合染料：復(fù)合染料： 同時(shí)具有陰、陽(yáng)離子型的染料如瑞氏染料同時(shí)具有陰、陽(yáng)離子型的染料如瑞氏染料（二）細(xì)胞染色原理：（二）細(xì)胞染色原理：1. 物理作用：物理作用：毛細(xì)管現(xiàn)象、滲透、吸收、吸附作用等毛細(xì)管現(xiàn)象、滲透、吸收、吸附作用等化學(xué)作用：化學(xué)作用

22、： a. 染料的化學(xué)成分：染料的化學(xué)成分： 助色基團(tuán)的存在，堿性染料在溶媒中為陽(yáng)離子型，助色基團(tuán)的存在，堿性染料在溶媒中為陽(yáng)離子型，易與組織和細(xì)胞內(nèi)帶負(fù)電荷的酸性物質(zhì)結(jié)合；而酸性易與組織和細(xì)胞內(nèi)帶負(fù)電荷的酸性物質(zhì)結(jié)合；而酸性染料在溶媒中為陰離子型，與帶正電荷的堿性物質(zhì)結(jié)合。染料在溶媒中為陰離子型，與帶正電荷的堿性物質(zhì)結(jié)合。 b. 蛋白質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)：蛋白質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)： 蛋白質(zhì)中的氨基酸含有不同蛋白質(zhì)中的氨基酸含有不同 數(shù)量的氨基（數(shù)量的氨基（-NH2）和）和 羧基（羧基（-COOH），同時(shí)還有其他活性基團(tuán)。在游離狀態(tài)時(shí)，），同時(shí)還有其他活性基團(tuán)。在游離狀態(tài)時(shí)， -NH2獲得一個(gè)獲得一個(gè)H+變成帶

23、正電的變成帶正電的-NH3+，而，而-COOH失去一個(gè)失去一個(gè)H+變成帶負(fù)電的變成帶負(fù)電的-COO-。分別與不同染料結(jié)合。分別與不同染料結(jié)合。 c. 周?chē)h(huán)境的酸堿度：周?chē)h(huán)境的酸堿度： 如環(huán)境如環(huán)境pHpI（ pI 為等電點(diǎn)），則蛋白質(zhì)帶正電，結(jié)合酸為等電點(diǎn)），則蛋白質(zhì)帶正電，結(jié)合酸性染料；反之，性染料；反之， pH pI，則結(jié)合堿性染料。，則結(jié)合堿性染料。 PHH增多增多易與伊紅結(jié)合易與伊紅結(jié)合染色偏紅染色偏紅 PHH減少減少易與美藍(lán)結(jié)合易與美藍(lán)結(jié)合偏藍(lán)偏藍(lán) （三）細(xì)胞染色法的類(lèi)型（三）細(xì)胞染色法的類(lèi)型 1. 普通染色法：普通染色法： 經(jīng)物理和經(jīng)物理和/或化學(xué)作用的吸附、結(jié)合或化學(xué)作用的吸

24、附、結(jié)合 2. 熒光染色法：熒光染色法：熒光染料，熒光顯微鏡熒光染料，熒光顯微鏡 3. 細(xì)胞活體染色法：細(xì)胞活體染色法：活體染料如燦爛甲酚藍(lán)等活體染料如燦爛甲酚藍(lán)等 4. 細(xì)胞化學(xué)染色法：細(xì)胞化學(xué)染色法：用化學(xué)反應(yīng)顯示細(xì)胞內(nèi)某種成分。用化學(xué)反應(yīng)顯示細(xì)胞內(nèi)某種成分。 細(xì)胞免疫化學(xué)染色法細(xì)胞免疫化學(xué)染色法 （應(yīng)用單克隆抗體技術(shù)、酶標(biāo)記技術(shù)）（應(yīng)用單克隆抗體技術(shù)、酶標(biāo)記技術(shù)） 瑞氏染色法瑞氏染色法（一）染色原理（一）染色原理 分兩相進(jìn)行，第一相是酸性伊紅與細(xì)胞中的堿性物質(zhì)分兩相進(jìn)行，第一相是酸性伊紅與細(xì)胞中的堿性物質(zhì)如血紅蛋白、嗜酸性顆粒結(jié)合；堿性染料天青如血紅蛋白、嗜酸性顆粒結(jié)合；堿性染料天青 B

25、與細(xì)胞中的酸性物質(zhì)如核染色質(zhì)、特異中性顆粒、與細(xì)胞中的酸性物質(zhì)如核染色質(zhì)、特異中性顆粒、 血小板結(jié)合。第二相是天青血小板結(jié)合。第二相是天青B和伊紅結(jié)合在適宜條件和伊紅結(jié)合在適宜條件下形成紫色的天青下形成紫色的天青B-伊紅復(fù)合物，結(jié)果使白細(xì)胞核染伊紅復(fù)合物，結(jié)果使白細(xì)胞核染色質(zhì)成紫色（瘧原蟲(chóng)的染色質(zhì)成紅色），中性粒細(xì)胞色質(zhì)成紫色（瘧原蟲(chóng)的染色質(zhì)成紅色），中性粒細(xì)胞的顆粒及血小板顆粒區(qū)成紫色。的顆粒及血小板顆粒區(qū)成紫色。 （二）試劑（二）試劑 1. Wright染液染液 瑞氏染粉瑞氏染粉0.1g,甲醇甲醇60.0ml 磷酸鹽緩沖液（磷酸鹽緩沖液（PBS）：）： （PH6.46.8） 磷酸二氫鉀（無(wú)水）磷酸二氫鉀（無(wú)水）0.3g，磷酸氫二鈉（無(wú)水），磷酸氫二